一、紫外线在移植物抗宿主反应中的作用（论文文献综述）
韩月霞[1]（2021）在《脂肪源间充质干细胞体外对aGVHD患者T细胞亚群的影响及机制初探》文中研究指明目的:探讨脂肪源间充质干细胞（Adipose derived stem cells,ADSCs）对急性移植物抗宿主病（graft-versus-host disease,aGVHD）患者T细胞的功能影响及其发生机制。方法:分离培养健康人体的脂肪源干细胞,观察细胞形态,培养至第三代,应用流式细胞术进行表面标志物鉴定,同时进行成脂分化及成骨分化鉴定。选取于新疆医科大学第一附属医院血液病中心行造血干细胞移植的aGVHD患者,以健康体检者作为对照组,分离外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cell,PBMC）,加入植物血凝素刺激PBMC增殖,与ADSCs共培养3天,PBMC:ADSCs=10:1,分为3组:（1）aGVHD患者的PBMC与ADSCs共培养,（2）健康体检者的PBMC与ADSCs共培养,（3）PBMC单独培养。共培养组应用PCR技术检测Th1、Th2亚群特异性转录因子表达水平及HES-1基因表达变化,应用流式细胞术分别检测三组的Th1、Th2亚群变化。结果:（1）吸脂术获取的ADSCs具有多向分化能力,表达CD29、CD44、CD105,而CD31、CD45,CD34弱表达。（2）流式细胞术检测aGVHD患者Th1亚群在CD4+T细胞中所占的比例较对照组高,差异有统计学意义。与ADSCs共培养后Th1亚群有降低趋势,Th2亚群有升高趋势,但无统计学意义。（3）与ADSC共培养后Th1转录因子表达减少,Th2转录因子表达升高,HES-1表达水平降低。结论:aGVHD患者存在Th亚群失衡,主要表现为Th1偏移,ADSCs可能通过减少Th1细胞分化、促进Th2细胞分化,下调Notch信号通路的表达从而纠正免疫失衡。
李泊涵[2]（2020）在《树突状细胞在移植物抗宿主病中的亚群变化及调控机制初探》文中提出目的:许多研究表明造血干细胞移植后的移植物抗宿主病的发生与树突状细胞的免疫重建有着明显的相关性,然而关于供体树突状细胞各亚群的免疫重建异常的机制仍没有明确的答案,树突状细胞的产生与发育主要来源于骨髓中的造血干祖细胞如多能干细胞（MPP）,树突状细胞祖细胞（CDP）。关于这些干祖细胞在移植物抗宿主病（graft-versus-host disease,GVHD）发生发展过程中的改变以及其可能机制的研究仍然较少,本研究将通过造血干细胞移植后外周血以及骨髓临床样本中树突状细胞以及树突状细胞祖细胞的比例和数量的检测来探讨造血干细胞移植后儿童的树突状细胞免疫重建的情况以及其与移植物抗宿主病的严重程度的相关性。通过体外培养造血干细胞,建立造血干细胞向树突状细胞分化的体外培养系统。并通过体外实验探导致树突状细胞免疫重建异常的可能分子机制。方法:1.使用流式细胞仪检测粒细胞植入时造血干细胞移植后患者外周血中DC以及其亚群的比例以及数目的情况。2.使用流式细胞仪检测造血干细胞移植后1个月的患者骨髓中造血干祖细胞的比例和数量。3.使用流式细胞仪检测造血干祖细胞中Dot1L的功能产物H3k79me2的表达水平。4.使用流式细胞仪检测使用不同细胞因子组合体外培养14后的粒细胞,单核细胞,树突状细胞的比例及数量。5.向体外培养系统中添加Dot1L抑制剂SGC0946,检测抑制剂组以及对照组体外分化培养第8天,第12天,第16天时检测粒细胞,单核细胞,树突状细胞的比例及数量。6.使用分选式流式细胞仪分选抑制剂组以及对照组中体外培养14天后的pDC以及CD1c+DC,将分选后的树突状细胞与CD4+T细胞进行共培养,使用流式细胞仪检测其分泌细胞因子的情况。7.使用流式细胞仪检测分化培养后CD1c+DC、pDC表达共刺激分子的情况。8.使用定量PCR法检测培养分化后的CD1c+DC、pDC分泌细胞因子的基因的表达情况。9.使用定量PCR法检测体外培养分化到第4天,第8天时DC相关转录因子的表达情况。10.统计学分析采用SPSS 22.0统计软件进行数据统计分析。使用曼-惠特尼U检验临床样本中外周血中树突状细胞及其亚群的比例数量,骨髓中造血干祖细胞细胞比例数量以及H3k79me2的表达水平。使用双侧t检验分析体外分化培养后各组之间细胞数的差异。以及两组之间基因表达情况的差异。使用P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.发生2-4度aGVHD的患者与发生0-1度aGVHD的患者相比其粒细胞植入时DC所占比例以及数量更低,差异有统计学意义。（P<0.05）DC亚群方面发生2-4度aGVHD的患者与发生0-1度aGVHD的患者相比在粒细胞植入时其pDC占总DC的比例以及数量更低,差异有统计学意义。（P<0.05）而CD1c+DC占DC的比例以及数量在0-1aGVHD组和2-4aGVHD组之间无差异。（P>0.05）2.在造血干细胞移植术后1个月时发生2-4度aGVHD的患者与0-1度aGVHD的患者相比其骨髓中总CD34+细胞以及造血祖细胞MPP、CDP的比例以及数量均较少,差异有统计学意义。（P<0.05）3.发生2-4度aGVHD的患者其骨髓中MPP以及CDP表达H3k79me2的表达量较发生0-1度aGVHD的患者的H3k79me2低,差异有统计学意义。（P<0.05）4.MS-5+GFS3组合在体外可以更有效的使造血干细胞分化为DC。5.Dot1L抑制剂SGC0946可以降低造血干细胞体外的增殖,同时可以促使造血干细胞向粒细胞的分化,抑制造血干细胞向pDC分化,差异有统计学意义。（P<0.05）6.使用Dot1L抑制剂SGC0946培养分化得到的DC与对照组相比可以更强的促进CD4+T细胞向Th1,Th2的分化。7.使用Dot1L抑制剂SGC0946培养分化得到的DC与未使用抑制剂组相比其共刺激分子HLA-DR,CD86,CD83表达水平更高。8.使用Dot1L抑制剂SGC0946培养分化得到的DC与对照组相比其细胞因子IL-12,IFN-α,IFN-β的基因表达量均低于对照组。9.使用Dot1L抑制剂SGC0946培养第四天其IRF4,BATF3,FLT3基因表达量明显低于对照组,差异有统计学意义。（P<0.05）在第8天时TCF4,IRF4,IRF8,FLT3的基因表达量明显低于对照组,差异有统计学意义。（P<0.05）结论:1.GVHD的患者其粒细胞植入时外周血中DC重建受损尤其是pDC。2.GVHD的患者骨髓中的造血干祖细胞MPP/CDP减少与发生2-4严重GVHD反应有明显相关性。而这种现象与造血干祖细胞中Dot1L的表达量低有相关性。3.MS5+GSF3体外分化培养系统与其他细胞因子组合相比可以很好的使造血干细胞向DC分化。4.造血干细胞中Dot1L的甲基化功能受到抑制后会导致DC分化相关的转录因子表达降低,从而影响产生DC尤其是pDC的数量,并且还会利于DC诱导CD4+T的活化,以及共刺激分子的表达。
胡永浩[3]（2020）在《CD73在子宫内膜再生细胞抑制小鼠同种异体心脏移植物排斥反应中的作用机制研究》文中提出背景:目前在临床实践中,对于那些患有终末期疾病或者患有先天性器官缺陷的患者,器官移植的实施已经成为了一种行之有效的治疗手段。免疫抑制剂的研发和应用在器官移植的发展过程中起到了不可或缺的作用,虽然现有的免疫抑制方案也在朝着个体化和联合用药的方向不断地进行优化,但是其长期应用仍然会带来许多免疫抑制剂相关的并发症,比如:感染、肿瘤和器官损伤等。此时,间充质干细胞（Mesenchymal stem cell,MSC）的发现和应用,为抑制移植排斥反应带来了新的选择。MSC是一种多能干细胞,能够分化多种谱系包括脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞。研究表明MSC能够抑制机体的免疫功能,而且在器官移植中应用能够使移植受体获益。与常用的免疫抑制剂相比,MSC更安全,也能避免免疫抑制剂相关的副作用。但是,若将MSC的应用于临床治疗,其也存在自身的局限性（有创的获取方式以及相关的并发症,有限的增殖能力以及来源短缺等）。然而,一种新发现的类间充质干细胞:子宫内膜再生细胞（Endometrial regenerative cell,ERC）,其不仅拥有与MSC相似的免疫调节功能,并且具有高增殖率、低免疫原性、广泛扩增等特点,最重要的是ERC能够无创的从无限来源的月经血中提取出来。不仅如此,相关的研究也已经发现ERC在器官移植中具有诱导免疫耐受和保护器官移植物的作用。然而,ERC发挥免疫抑制的机制尚不清楚,仍需要进一步的研究。与此同时,我们发现ERC表面能够表达5’-核苷酸外切酶（Ecto-5’-nucleotidase,CD73）。CD73是细胞外腺苷（Adenosine,ADO）生成过程中的限速酶,而ADO又可以与其下游的受体结合,发挥相应的生物学功能。因此,阐明ERC表达CD73对其在免疫调节过程中发挥作用的机制将会对ERC的应用具有极大的指导意义。所以,本课题聚焦于CD73表达对ERC在体内和体外调节免疫细胞过程中的影响和机理。课题的成功实施将会为ERC的临床转化和规范化应用提供坚实的理论和实践依据。目的:分离提纯ERC并验证其表面能够稳定表达CD73。探究ERC表面所表达的CD73的体外催化功能及其在体外培养中对树突状细胞、巨噬细胞和调节T细胞的调控作用。探讨CD73表达对ERC延长同种异体心脏移植物生存时间及抑制免疫排斥反应发生的作用机制。方法:本研究主要由三个部分构成:第一部分,从健康女性志愿者的月经血中提取ERC并进行体外培养;通过流式细胞术鉴定ERC的细胞表型;通过细胞的免疫荧光实验再次验证ERC表面CD73的表达。第二部分,使用Pi Color Lock TM磷酸检测试剂盒检测ERC表面的CD73在体外催化单磷酸腺苷（Adenosine monophosphate,AMP）分解为ADO的能力;通过体外培养研究CD73表达对ERC体外调控树突状细胞（Dendritic cell,DC）,巨噬细胞和调节性T细胞（Regulatory T cell,Treg）分化增殖能力的影响,并通过流式细胞术检测细胞群数量的变化。第三部分为体内实验,建立小鼠同种异体异位心脏移植模型;体内探究ERC表面表达CD73在其抑制小鼠同种异体异位心脏移植排斥反应中的作用以及相应的作用机制。结果:第一部分:成功的从志愿者的月经血中提取出ERC,并且实现了体外扩增;流式细胞术结果显示ERC可以稳定表达CD90、CD105、CD73,低表达CD39;ERC免疫荧光的结果也显示CD73表达在ERC的细胞膜上。第二部分:ERC表面的CD73在体外可以催化AMP水解为ADO,并且CD73的功能可以被抗CD73单克隆抗体阻滞;ERC表面的CD73被阻滞后其体外抑制成熟DC增殖的能力会下降,促进2型巨噬细胞（Macrophages type 2,M2）和Treg增殖的能力也会被抑制。第三部分:成功制备了小鼠同种异体异位心脏移植模型;ERC表面的CD73功能被阻滞后其延长移植物生存时间,减轻移植物病理改变,减轻CD4+和CD8+细胞浸润,上调耐受性树突状细胞（Tolerogenic dendritic cells,Tol-DC）、M2、Treg的比例,减少促炎因子IFN-γ和TNF-α分泌,增加抗炎因子IL-10分泌以及促进心肌组织A2B受体表达等功能均受到抑制。结论:通过三部分的实验研究,可以得出以下结论:1)可以从健康适龄女性志愿者的月经血中提取出表型稳定的ERC,并且ERC的表面可以稳定表达CD73。2)ERC表面表达的CD73体外具有催化AMP脱磷酸分解为ADO的能力,并且CD73的功能可以被抗CD73单克隆抗体阻滞,同时表达CD73对ERC发挥抑制DC细胞成熟、促进M2和Treg增殖的作用极其重要。3)表达CD73的ERC可以抑制小鼠同种异体心脏移植排斥反应,延长移心脏移植物的生存期。因此,课题的成功实施为ERC的临床转化和规范化应提供了理论和实践依据。
王艺霖[4]（2019）在《在低氧条件下280nm LED紫外线对HL-60细胞株增殖的影响及机制研究》文中进行了进一步梳理目的本实验的目的是试图通过探究在低氧条件下280nm发光二极管紫外线（Light Emitting Diode-Ultraviolet,LED UV）对急性早幼粒白血病细胞标准细胞株（HL-60）细胞增殖的影响并研究其相应的机制。方法1.取对数生长期HL-60细胞株作为研究对象,280nm LED UV作为光源,氯化钴（CoCl2）模拟低氧;2.将实验分为六组（对照组A及实验组B、C、D、E、F）,A组采取正常供氧下常规培养,B组给予CoCl2（终浓度150μmol/L）处理后作为低氧组,C组用30J/m2剂量的280nm LED UV照射后作为紫外线组,D组在与B组相同浓度CoCl2基础上给予30J/m2剂量的280nm LED UV照射后作为低氧+紫外线组,E组在C组的基础上孵育24h后再次给予30J/m2剂量的280nm LED UV照射作为紫外线二次照射组,F组为D组的基础上孵育24h后再次给予30J/m2剂量的280nm LED UV照射作为低氧+紫外线二次照射组;3.将各组细胞加入等量含10%胎牛血清的IMDM培养基,在37℃、5%CO2、饱和湿度的条件下培养48小时;4.检测以下指标:倒置显微镜下观察细胞数量及形态变化;CCK-8检测细胞增殖抑制率;AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR检测Bcl-2基因的表达量;蛋白质印迹法（Western Blot）检测Bcl-2蛋白的表达量。结果1.HL-60细胞株生长、形态及密度变化:培养48h后在倒置显微镜下观察HL-60细胞,对照（A）组细胞排列整齐,圆形透亮、形态完整,细胞数量增多,细胞计数为（201.67±6.51）×104/ml;实验（B-F）组细胞排列紊乱,皱缩、透亮度降低,细胞数量明显少于对照组（P均<0.01）,细胞计数由高到低依次为低氧组（161.67±3.51）×104/ml、紫外线组（112.00±2.65）×104/ml、低氧+紫外线组（71.33±2.52）×104/ml、紫外线二次照射组（52.67±1.53）×104/ml、低氧+紫外线二次照射组（24.67±1.53）×104/ml。各组细胞密度比较差异有统计学意义（F=1135.695,P<0.01）。各组间比较差异均有统计学意义（P均<0.05）。实验组B-F细胞的生长状况及细胞形态逐渐变差:紫外线组较低氧组细胞生长状况差;低氧+紫外线组细胞生长状况较紫外线组更差;紫外线二次照射组可见一定比例的死亡细胞及细胞裂解的胞质小体,细胞生长状况较低氧+紫外线组细胞差;低氧+紫外线二次照射组细胞生长状况最差,可见大量裂解细胞。2.HL-60细胞增殖抑制率:与对照组比,实验组B-F组的增殖抑制率均明显升高（P均<0.01）,由低到高依次是低氧组（20.51±1.01）%、紫外线组（44.32±2.07）%、低氧+紫外线组（64.67±3.34）%、紫外线二次照射组（74.53±1.01）%、低氧+紫外线二次照射组（87.47±0.68）%,以低氧+紫外线二次照射组最为明显。各组细胞增殖抑制率比较差异有统计学意义（F=581.561,P<0.01）。各组间比较差异均有统计学意义（P均<0.05）。3.HL-60细胞凋亡率:对照组细胞凋亡率为（2.64±1.16）%,各实验组细胞凋亡率均明显高于对照组（P均<0.01）,各实验组HL-60细胞凋亡率由低到高依次是低氧组（10.65±0.73）%、紫外线组（14.47±1.46）%、低氧+紫外线组（31.71±1.27）%、紫外线二次照射组（39.30±1.39）%、低氧+紫外线二次照射组（72.10±1.44）%,以低氧+紫外线二次照射组最为明显。各组细胞凋亡率的比较差异有统计学意义（F=1195.466,P<0.01）。各实验组间比较差异均有统计学意义（P<0.05）。4.HL-60细胞Bcl-2基因表达量:与对照组比较,实验组B-F的Bcl-2基因的表达量均显着下调（P均<0.01）,各实验组由高到低依次是低氧组（0.7374±0.0184）、紫外线组（0.6274±0.01894）、低氧+紫外线组（0.4616±0.0230）、紫外线二次照射组（0.3810±0.0262）、低氧+紫外线二次照射组（0.2575±0.0268）,以低氧+紫外线二次照射组Bcl-2基因表达下调最为明显。各组细胞Bcl-2基因表达量比较差异有统计学意义（F=652.230,P<0.01）。各实验组间比较差异有统计学意义（P均<0.05）。5.HL-60细胞Bcl-2蛋白表达量:与对照组比较,实验组B-F的Bcl-2蛋白的表达量均显着下调（P均<0.01）,各实验组由高到低依次是低氧组（0.7418±0.0186）、紫外线组（0.6523±0.0145）、低氧+紫外线组（0.4948±0.0156）、紫外线二次照射组（0.4061±0.0156）、低氧+紫外线二次照射组（0.3236±0.0109）,以低氧+紫外线二次照射组Bcl-2蛋白表达下调最为明显。各组细胞Bcl-2蛋白表达量比较差异有统计学意义（F=925.827,P<0.01）。各实验组间比较差异均有统计学意义（P均<0.05）。结论1.通过CoCl2模拟低氧和280nm LED UV照射HL-60细胞后,HL-60细胞生长明显受抑,在低氧条件下增加280nm LED UV照射剂量,细胞增殖抑制作用更强,提示低氧、低氧+LED UV照射可有效抑制HL-60细胞增殖。2.低氧条件下280nm LED UV照射诱导细胞凋亡率较常氧条件下高;两次280nm LED UV照射,细胞凋亡率明显高于单次照射;在低氧条件下同时增加280nm LED UV的照射剂量,细胞以坏死为主,提示低氧、低氧+LED UV照射抑制HL-60细胞增殖是通过促进HL-60细胞凋亡或坏死实现。3.低氧条件下280nm LED UV照射能抑制HL-60细胞Bcl-2基因以及蛋白的表达,随着280nm LED UV的照射剂量的增加,细胞Bcl-2基因及蛋白的表达下调更明显,提示Bcl-2基因及蛋白表达下调是低氧条件下280nm LED UV照射诱导HL-60细胞凋亡的主要机制之一。
邓慧兰[5]（2019）在《血浆中microRNA水平对造血干细胞移植后aGVHD的诊断和预测意义研究》文中指出目的:异基因造血干细胞移植是治愈多数血液系统疾病的唯一手段,急性移植物抗宿主病是导致患者死亡的最主要原因,由于aGVHD的治疗困难,早期预测或诊断急性移植物抗宿主病对改善患者的预后有很大的价值。本文旨在研究血浆中miR-181b和miR-194的表达水平的变化与异基因造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病发生的相关性,建立新的aGVHD诊断或预测指标。方法:本实验中观察了 31名进行异基因造血干细胞移植后的病人,地中海贫血患者21例,急性白血病6例、再生障碍性贫血3例、噬血细胞综合征1例。其中13名患者发生急性移植物抗宿主病（地中海贫血9人、急性白血病3人、再生障碍性贫血1人）,18人未发生急性移植物抗宿主病。采用qrt-PCR方法检测外周血血浆中miR-181b和miR-194在异基因造血干细胞移植后发生急性移植物抗宿主病患者中的表达是否有差异,以及急性移植物抗宿主病患者经过治疗后,这两种miRNAs在血浆中的表达水平是否有差异。经统计学计算分析miR-181b和miR-194的表达水平是否具有统计学意义以及是否具有诊断或预测价值。结果:1.与健康对照组比较,miR-181b、miR-194在移植前患者血浆中的表达水平无统计学差异（P>0.05）。2.miR-181b、miR-194在无aGVHD组患者移植前后血浆中的表达水平无统计学差异（P>0.05）。3.miR-181b、miR-194在aGVHD组患者发生aGVHD时的血浆中表达水平升高（P<0.05）,且在治疗后表达水平下降（P<0.05）。4.通过建立ROC曲线评估miR-181b和miR-194的诊断效能,miR-181b和miR-194对aGVHD均具有一定的诊断价值（两者P<0.05）。miR-181b的AUC值为 0.9124,特异性 94.44%,灵敏度为 69.23%。miR-194 的 AUC 值为 0.9103,特异性94.44%,灵敏度为76.92%。5.通过建立ROC曲线评估两种miR-181b和miR-194的诊断效能,miR-181b和miR-194对aGVHD均具有一定的预测价值（两者P<0.05）。miR-181b的AUC值为0.8965,特异度为88.89%,灵敏度为72.73%。miR-194的AUC值为0.8939,特异度为88.89%,灵敏度为81.82%。结论:1.miR-181b和miR-194对异基因造血干细胞移植后患者发生急性移植物抗宿主病的具有诊断价值。2.miR-181b和miR-194对异基因造血干细胞移植后患者发生急性移植物抗宿主病有一定的预测价值。3.miR-181b和miR-194对急性移植物抗宿主病治疗后的效果有一定的评估意义。
丁祥超[6]（2019）在《MicroRNA let-7靶向结合Nr4A1调控T细胞功能在心脏移植排斥反应中的作用及机制研究》文中研究说明背景:对于各类原因导致的终末期心脏功能衰竭,器官移植手术目前最有效的治疗方式。在各种免疫抑制剂的使用下,大部分的急性排斥反应能得到有效控制,但随后发生的慢性排斥反应以及免疫抑制剂相关的副作用,如感染、恶性肿瘤和肾脏毒性,是影响患者预后的主要因素。Nr4A1（Nuclear Receptor Subfamily 4 Group A Member 1）是一种细胞核孤生受体,在T细胞中具有重要作用,然而Nr4A1缺乏对于T细胞功能的影响和对心脏移植排斥反应的作用,以及Nr4A1的潜在调控机制尚不明确。目的:本课题将使用多种基因敲除小鼠建立心脏移植模型,研究T细胞中Nr4A1缺乏对于心脏移植排斥反应的影响,明确Nr4A1在T细胞中的作用机制,寻找调控Nr4A1的潜在上游靶点,为临床移植排斥反应的防治提供新的理论基础。方法:1.构建小鼠异位心脏移植模型并观察Nr4A1的表达变化取Balb/c（H-2d）小鼠心脏为供体,野生型C57BL/6（B6,H-2b）为受体,构建腹腔异位心脏移植模型;或体外混合淋巴细胞培养中,qPCR以及流式细胞技术检测CD4+T细胞中Nr4A1表达变化。2.体内观察Nr4A1敲除后对心脏移植排斥反应及体内CD4+T细胞表型的影响取Balb/c（H-2d）小鼠心脏为供体,B6;129S2-Nr4A1tm1Jmi/J(Nr4A1 KO,Nr4A1-/-)小鼠或免疫重建的B6.129S7-Rag1tm1Mom/JNju(Rag1-/-)小鼠做为受体,构建心脏移植模型,观察Nr4A1敲除后,体内CD4+T细胞表型变化以及对心脏移植排斥反应的影响。3.明确Nr4A1激动剂对CD4+T细胞功能以及心脏移植排斥反应的影响取Balb/c（H-2d）小鼠心脏为供体,野生型C57BL/6（B6,H-2b）为受体,构建腹腔异位心脏移植模型,应用多种Nr4A1特异性小分子激动剂研究其对心脏移植排斥反应的影响;同时,体外提取原代CD4+T细胞并使用激动剂干预,流式细胞技术检测T细胞表型改变。4.细胞水平探究Nr4A1的潜在调控靶点使用临床上常用的免疫抑制剂,观察其对CD4+T细胞Nr4A1表达的影响,并通过分子生物学Western Blot、qPCR检测CD4+T细胞内Nr4A1的表达调控方式,生物信息学分析Nr4A1的潜在上游靶点,最后通过细胞转染以及双荧光素酶报告基因实验验证上游靶点的有效性和特异性。5.构建microRNA拮抗剂观察其对心脏移植排斥反应的影响根据前文实验结果,确定目标microRNA是Nr4A1的潜在上游靶点,构建特异性microRNA拮抗剂,在体内水平观察其对Nr4A1的表达调控作用以及对心脏移植排斥反应的影响,并通过Nr4A1-/-小鼠验证特异性microRNA拮抗剂的保护作用对Nr4A1的依赖性。结果:1.Nr4A1在心脏移植后受体免疫器官以及体外淋巴细胞混合培养的CD4+T细胞中表达显着上调;2.Nr4A1敲除后,心脏移植排斥反应加重,且Nr4A1敲除鼠对于成熟的移植耐受诱导方案产生抵抗;3.细胞过继重建小鼠免疫系统实验证明,Nr4A1主要影响CD4+T细胞活化后凋亡以及Tregs细胞亚群分化而影响排斥反应进程;4.Nr4A1受目前最常用的免疫抑制剂—FK506,转录后水平的调控,且FK506通过上调miRNA let-7a发挥Nr4A1转录后抑制作用;5.MicroRNA let-7a拮抗剂可减轻心脏移植排斥反应,联用microRNA let-7a拮抗剂可减少FK506的使用,并增加移植物存活时间。6.MicroRNA let-7a拮抗剂通过上调Nr4A1蛋白表达,实现对心脏移植物的保护作用。结论:Nr4A1在CD4+T细胞介导的心脏移植排斥反应中具有重要作用,Nr4A1缺乏可抑制CD4+T细胞活化后凋亡以及Tregs细胞亚群分化,加重排斥反应的发生。临床上常用的免疫抑制剂FK506,可通过上调microRNA let-7a抑制Nr4A1转录后翻译过程,使用microRNA let-7a特异性拮抗剂可逆转FK506对于Nr4A1的抑制作用,从而显着延长移植物存活,增强FK506的治疗效果。Nr4A1可能为临床上心脏移植术后,诱导移植物免疫耐受的新靶点。
王曦[7]（2019）在《miR-669b-3p调控IDO抑制CD4+T细胞增殖的体外研究》文中研究说明目的:通过筛选出小鼠心脏异位移植模型移植物中显着差异表达的miRNA,探讨其体外调控吲哚胺2,3-双加氧酶（indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO）抑制CD4+T细胞活化的机制,以期探索miRNA影响免疫排斥的机理。方法:（1）通过显微外科技术建立小鼠心脏异位移植模型,对移植后供体心脏进行miRNA芯片筛选,对有明显差异表达的miRNA进行生物信息学分析预测寻找以IDO为靶基因的miRNA,qRT-PCR法验证芯片筛选结果。（2）携带miRNA基因的慢病毒转染3T3细胞,分3组,即miRNA过表达组、miRNA沉默组及空质粒对照组。qRT-PCR法检测转染后各组miRNA表达水平;qRT-PCR法检测转染后各组IDO mRNA表达水平,Western blot法检测转然后各组IDO蛋白表达水平。（3）体外分化诱导培养BALB/c小鼠脾脏DC,携带IDO基因的慢病毒转染DC,Western blot法检测IDO蛋白表达水平。（4）免疫磁珠分选C57BL/6小鼠CD4+T细胞,与转染后DC进行单向淋巴细胞混合培养,CCK-8法检测细胞增殖情况,Annexin-V/PI双染法检测细胞凋亡情况。结果:（1）miRNA芯片筛选结果显示171个miRNA表达差异显着,其中93个表达显着上调,78个表达显着下调。其中miR-669b-3p上调近5倍,且生物信息学分析预测可能以IDO为靶基因,qRT-PCR验证miR-669b-3p上调4.7±0.9倍,与芯片结果一致。（2）qRT-PCR检测miR-669b-3p过表达组的miR-669b-3p表达水平为空质粒对照组的10.1±4.8倍,miR-669b-3p沉默组的miR-669b-3p表达水平为空质粒对照组的0.3±0.1倍。qRT-PCR检测miR-669b-3p过表达组的IDO mRNA表达水平为空质粒对照组的0.4±0.1倍,miR-669b-3p沉默组的IDO mRNA表达水平为对照组的3.3±1.0倍,Western blot检测转染后miR-669b-3p过表达组的IDO与内参灰度值比值为0.439±0.012,miR-669b-3p沉默组的IDO与内参灰度值比值为0.767±0.027,空质粒对照组的IDO与内参灰度值比值为0.583±0.016,各组间对比差异均有统计学意义（P<0.05）。（3）体外分化诱导获得BALB/c小鼠脾脏DC,流式细胞数检测DC表面抗原CD11c、CD80、CD86、MHC II分别为89.5%±1.9%、97.0%±2.2%、92.2%±2.8%、87.1%±2.5%,符合DC表面抗原特点。Western blot检测转染后IDO+DC组IDO与内参灰度值比值为0.956±0.035,空质粒DC组为0.725±0.031,两组间对比差异有统计学意义（P<0.05）。（4）流式细胞术检测免疫磁珠法分离获得的C57BL/6小鼠脾脏CD4+T淋巴细胞的阳性率为96.1±2.9%。单向淋巴细胞混合培养CCK-8法检测结果显示IDO+DC组刺激指数为9.5±0.5%,低于DC组11.5±0.6%,差异有统计学意义（P<0.05）。Annexin-V/PI检测结果显示IDO+DC组凋亡率为20.9±3.4%,高于DC组10.7±1.3%,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:（1）在小鼠心脏异位移植免疫排斥反应中出现多个miRNA显着的差异性表达,其中miR-669b-3p经生物信息学分析预测可能以IDO为靶蛋白（2）miR-669b-3p可在体外抑制细胞内IDO表达。（3）IDO可在体外抑制CD4+T细胞的增殖并增加其凋亡。（4）miR-669b-3p可能通过调控IDO影响CD4+T细胞活性。
彭一帆[8]（2019）在《Galectin-1诱导耐受性树突状细胞联合凋亡淋巴细胞延长大鼠移植肝术后生存的研究》文中研究表明第一部分 Galectin-1诱导大鼠耐受性树突状细胞与凋亡淋巴细胞诱导耐受性免疫微环境的研究[目的]:树突状细胞是重要的免疫调节细胞。耐受性树突状细胞因其免疫抑制能力被用于多种自身免疫疾病的治疗。同时,耐受性树突状细胞预输注也被用于缓解移植术后排斥,延长移植受者术后生存。移植术后排斥的基本免疫学机制包括抗原提呈直接途径与间接途径。耐受性树突状细胞与凋亡淋巴细胞（apoptotic lymphocyte,AL）均为有效的移植术后耐受诱导细胞,且分别通过抑制抗原提呈直接途径与间接途径发挥免疫耐受诱导作用。Galectin-1是重要的免疫调节分子并可诱导耐受性树突状细胞（DCgal-1）。本研究通过联合DCgal-1与AL进行联合回输,诱导耐受性免疫微环境,以求获得比单独回输更好的耐受微环境诱导效果。[方法]:以重组Galectin-1蛋白诱导Dark Agouti（DA）大鼠骨髓来源树突状细胞为DCgal-1。以ultraviolet irradiation（UV）诱导DA大鼠脾脏来源淋巴细胞为AL。体外检测DCgal-1与AL的免疫学表型与功能。并将耐受细胞回输Lewis大鼠,以混合淋巴细胞反应实验检测针对DA大鼠来源抗原的耐受微环境诱导效果。[结果]:DCgal-1低表达炎症分子主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex,MHC）Ⅱ,CD80,CD86 并高表达 interleukin（IL）-10。DCgal-1 与UV诱导凋亡淋巴细胞在体外显着抑制混合淋巴细胞反应。DCgal-1与凋亡淋巴细胞联合回输显着降低Lewis大鼠受体CD8+T淋巴细胞增殖能力。[结论]:DCgal-1与UV诱导凋亡淋巴细胞联合回输是有效的免疫耐受微环境诱导方案。第二部分 DCgal-1联合凋亡淋巴细胞延长大鼠肝移植术后生存的研究[目的]:肝移植是治疗终末期肝病的最有效方法。肝移植术后免疫抑制剂的使用在延长肝移植受者术后生存的同时,也与肝移植术后原病复发,感染等并发症相关。诱导移植免疫耐受将实现移植受者在不服用免疫抑制剂的情况下长期存活,具有重大的临床意义。而目前耐受性树突状细胞回输虽能延长受者术后生存,但仍有很大改进空间。我们在第一部分中发现galectin-1诱导的耐受性树突状细胞（DCgal-1）联合 ultraviolet irradiation（UV）诱导的凋亡淋巴细胞（apoptotic lymphocyte,AL）可以在体内诱导针对供体抗原的免疫耐受,其效果优于单种耐受细胞单独回输,在这一部份,我们将其应用于大鼠模型肝脏移植排斥的预防,探究其作用。[方法]:构建大鼠Dark Agouti（DA）-Lewis肝移植排斥模型。以供体来源DCgal-1联合AL在移植术前七日行受体回输。通过生存曲线,肝功能,病理学,T细胞平衡变化及炎症因子表达变化阐述DCgl-1联合AL在预防肝移植排斥中的作用。除此之外,我们还研究了 DCgal-1和AL联合回输后长期生存受体在术后100天时的特征。[结果]:单独DCgal-1或AL输注显着延长受体大鼠移植术后生存,而联合DCgal-1和AL回输显示出比单独DCgal-1或AL输注更好的肝脏排斥抑制效果。该过程与控制同种异体反应性效应T细胞（IFN-y+T细胞）和提升受体大鼠体内肝脾调节性T细胞（Treg）比例有关。研究中,DCgal-1-AL治疗使超过30%的受者大鼠达到长期生存,在术后无需使用任何免疫抑制药物。此外,DCgal-1-AL输注在移植术后第七日显着抑制促炎因子表达。而术后长期生存受体肝脏转化生长因子-βl/2显着升高,这可能与维持移植物生存相关。[结论]:DCgal-1与AL联合回输是有效的肝移植排斥预防方案。
万江波[9]（2017）在《IL-10基因修饰的树突状细胞诱导1型调节T细胞在防治GVHD和保存GVL中的研究》文中研究说明背景和目的:Allo-HSCT是有望治愈血液系统恶性肿瘤的根本手段,但是对于allo-HSCT患者来说,GVHD是主要的移植相关死因。然而,来自异基因供体T淋巴细胞还可以产生GVL效应,从而减少移植后白血病的复发。因此,如何在防治GVHD的同时保留GVL效应是目前改善allo-HSCT治疗效果的关键。Tregs在针对自身和外来抗原产生的外周免疫耐受中发挥重要作用。它分为两大类,即nTregs和iTregs,后者主要为Tr1细胞。nTregs在机体内含量极少,体外大量扩增难度大,难以大规模生产而满足临床需求。本研究拟用IL-10基因修饰的DCs诱导产生Tr1细胞,并对其在体外对T细胞增殖,混合淋巴细胞反应以及小鼠骨髓移植模型中对GVHD以及移植动物的生存进行了观察。研究方法:构建携带IL-10基因的慢病毒载体转染受体DCs,应用DCLV-IL-10与供体CD4+T细胞共培养后免疫磁珠分选,获得纯化的Tr1细胞,并应用流式细胞和ELISA方法分析Tr1细胞生物特性;同时利用体外淋巴细胞增殖实验和混合淋巴细胞反应观察其特异性免疫抑制效应,在白血病小鼠骨髓移植模型中,观察其对GVHD的发生和GVL效应的影响。结果:1.携带IL-10的慢病毒载体的构建并转染DCs,DCLV-IL-10保留成熟DCs的表型,并分泌高水平的IL-10。2.受体DCLV-IL-10与供体幼稚CD4+T细胞共培养,能诱导产生大量的表达特征性CD49b、LAG-3、CD4和CD25免疫表型,同时表达IL-10和IFN-γ,而不表达Foxp3的T细胞,符合Tr1细胞的免疫特征。3.诱导产生的Tr1细胞分泌高水平的IL-10、IFN-γ以及低水平的IL-4、IL-2,对于其发挥免疫调节功能具有重要的作用;4.体外试验显示诱导产生的Tr1细胞抑制CD4+和CD8+T细胞增殖以及混合淋巴细胞反应,并呈剂量依赖趋势,此效应能被抗IL-10抗体所中和,提示其免疫抑制作用主要依靠IL-10;5.在C57BL/6→BALB/c小鼠骨髓移植模型中,输注Tr1细胞能显着减轻受体小鼠临床和病理GVHD的程度,延长生存期;6.在C57BL/6→BALB/c小鼠白血病骨髓移植模型中,输注Tr1细胞受体小鼠T细胞维持对A20淋巴瘤细胞的杀伤效应,出现Th1向Th2细胞转化,同时其生存期也明显延长,提示Tr1细胞在抑制GVHD的同时也保留了异基因供体T细胞的GVL效应。结论:1.应用IL-10基因修饰的受体DCs与供体CD4+T细胞共培养,体外大规模诱导符合临床应用的Tr1细胞是可行的,同时受体DCLV-IL-10诱导产生的Tr1细胞,在体外具有特异性的免疫抑制功能。2.受体DCLV-IL-10诱导产生的Tr1细胞,在小鼠白血病异基因骨髓移植模型中,输注Tr1细胞明显延长无病生存期,提示Tr1细胞在明显减轻GVHD程度的同时能够保留GVL效应。
尹琎[10]（2016）在《MDSC在异基因造血干细胞移植后诱导免疫耐受机制的初步研究》文中提出[目的]研究MDSC在异基因造血干细胞移植患者中的变化规律,探讨MDSC的增殖与异基因造血干细胞移植患者aGVHD的发生及临床预后的相关性。[方法]采集异基因造血干细胞移植患者输注的造血干细胞及移植后100天内的外周血,流式细胞学检测MDSC的表达及其他免疫相关细胞的表达；通过磁珠分选MDSC,检测MDSC形态学特征及表型;用Elisa法检测IL-6,IL-10,IL-1β,TNF-α,Arg-1, HO-1, iNOS的水平。[结果]干细胞采集物中MDSC数目及干细胞植活时外周血中MDSC的比例增高有利于患者移植后长期免疫耐受,有利于减轻aGVHD的发生率及aGVHD的严重程度,且不增加移植后疾病的复发率,有利于延长生存期。而移植后,aGVHD发生会伴随MDSC比例的增高,且IL-6、IL-10及TNF-α的浓度及免疫相关蛋白Arg-1、iNOS和HO-1的水平也明显增高。推测移植后伴随aGVHD的发生而出现的MDSC增多可能是由于触发aGVHD的炎症反应（尤其是IL-6及TNF-a）引起的MDSC的继发性增殖,从而引起MDSC分泌的免疫相关蛋白Arg-1、iNOS和HO-1也明显增高,整个过程是aGVHD的病理反应引起的机体负反馈调节机制的一部分。这种继发性MDSC的增高并不会增加移植后疾病的复发。[结论]干细胞回输时MDSC的数目及植活时外周血中MDSC水平可作为预测异基因造血干细胞移植后aGVHD的发生及严重程度的指标;回输MDSC或促进MDSC的扩增可能是一个减轻移植后aGVHD的有效方法。[目的]建立G-CSF诱导MDSC扩增的培养体系,研究MDSC在小鼠急性移植物抗宿主病中的效应。[方法]1.用不同浓度G-CSF诱导培养小鼠骨筋细胞不同时间,检测MDSC比例变化从而确立G-CSF诱导MDSC的培养体系；2.建立小鼠异基因骨髓移植模型,移植时回输G-CSF诱导的MDSC,观察小鼠GVHD的发生与发展,评估小鼠生存状况。[结果]1. G-CSF体内诱导MDSC的最佳浓度为5μg/只／天,最佳诱导时间为3天;2. G-CSF体外诱导MDSC的最佳浓度为100ng/mL,培养最佳时间为4天；3.回输G-CSF诱导的MDSC能明显减轻异基因移植小鼠GVHD的严重程度,延长小鼠的生存时间。[结论]G-CSF诱导的MDSC对异基因移植小鼠GVHD具有明显抑制作用,能延长小鼠的生存时间。这一结果证实了allo-HSCT患者回输的干细胞采集物中MDSC在移植患者体内的免疫抑制作用,提示回输的MDSC数目可作为预测异基因造血干细胞移植后aGVHD的发生及严重程度的重要标志,而基于MDSC的细胞治疗可能成为预防和治疗异基因造血干细胞移植后aGVHD的有效方法。[目的]建立G9诱导MDSC扩增的培养体系,研究G9-MDSC在小鼠急性移植物抗宿主病中的效应及机制。[方法]1、用不同浓度重组G9蛋白诱导培养小鼠骨链细胞不同时间,检测MDSC比例变化从而建立G9诱导MDSC的培养体系；2、Giemsa染色检测G9-MDSC形态并通过流式细胞学检测G9-MDSC表型；3、G9-MDSC与T淋巴细胞共培养检测G9-MDSC对T细胞增殖的影响;4、Real-time PCR检测G9-MDSC Arg-1、iNOS、Tim3基因表达量的变化;5、流式细胞学检测G9-MDSC的凋亡及分化；6、建立小鼠异基因骨髓移植模型,移植时回输G9-MDSC,观察小鼠GVHD的发生与发展,评估小鼠生存状况。[结果]1、G9体外诱导MDSC的最佳浓度为300ng/mL,培养最佳时间为4天;2、G9-MDSCG9-MDSC呈“花环样”,不表达早期造血干标志CD34,也不表达分化的单核细胞标志CD14、髓系DC细胞标志CD11c,但弱表达MHC-Ⅱ和巨噬表面标志F4/80。也表达Tim3;3、G9诱导MDSC的扩增是依赖Tim3途径的,但MDSC细胞表达的Tim3并不参与G9蛋白诱导MDSC增殖的过程,MDSC是从GMP分化而来的,G9蛋白可加速GMP向MDSC分化,但并不影响其他干祖细胞的分化过程;4、G9-MDSC对T细胞的增殖具有明显抑制作用。且是通过细胞-细胞接触来完成的；5、G9-MDSC中Arg-1、iNOS和Tim3表达增高;6、G9-MDSC抑制能力和能力的维持时间均较自然状态下的MDSC明显增强,G9-MDSC的抑制能力约可维持一周;7、G9诱导的MDSC能显着减轻异基因骨髓移植小鼠急性移植物抗宿主反应：8、回输G9-MDSC能明显减轻异基因移植小鼠GVHD的严重程度,延长小鼠的生存时间。[结论]重组G9蛋白对MDSC的诱导作用是一个全新的MDSC诱导方式,且G9在减轻急性移植物抗宿病中的作用除已知的G9/Tim3机制外,还存在诱导MDSC扩增从而对T细胞发挥抑制作用。
二、紫外线在移植物抗宿主反应中的作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、紫外线在移植物抗宿主反应中的作用（论文提纲范文）
（1）脂肪源间充质干细胞体外对aGVHD患者T细胞亚群的影响及机制初探（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 研究内容与方法 |
| 1 研究对象 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 纳入标准 |
| 1.3 排除标准 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 技术路线 |
| 5 统计学处理 |
| 结果 |
| 1.ADSC的生物学特性 |
| 2.流式细胞术检测Th亚群 |
| 3.共培养体系中PBMC增殖情况 |
| 4.患者的CD4+T细胞/CD8+T细胞比值 |
| 讨论 |
| 1.aGVHD的发病机制及治疗 |
| 2.间充质干细胞与aGVHD |
| 3.Notch信号通路与aGVHD |
| 小结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 脂肪间充质干细胞对不同免疫细胞的调节作用 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
| 新疆医科大学硕士研究生学位论文导师评阅表 |
（2）树突状细胞在移植物抗宿主病中的亚群变化及调控机制初探（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 树突状细胞免疫重建与GVHD的相关性探索 |
| 材料与方法 |
| 一、材料 |
| 二、方法 |
| 三、统计学分析 |
| 结果 |
| 1. 外周血DC亚群检测结果 |
| 2. 骨髓中DC祖细胞检测 |
| 3. 骨髓中H3k79me2的检测 |
| 小结 |
| 第二部分 树突状细胞体外分化培养系统的构建 |
| 材料与方法 |
| 一、材料 |
| 二、方法 |
| 三、统计学分析 |
| 结果 |
| 一、体外分化培养系统总细胞增殖情况 |
| 二、体外分化培养系统树突状细胞增殖情况 |
| 三、体外分化培养系统粒细胞以及单核细胞增殖情况 |
| 小结 |
| 第三部分 探索DOT1L与DC分化、功能之间的关联 |
| 材料与方法 |
| 一、材料 |
| 二、方法 |
| 三、统计学分析 |
| 结果 |
| 一、给予Dot1L抑制剂后对树突状细胞分化的影响 |
| 二、给予Dot1L抑制剂后对树突状细胞功能的影响 |
| 三、Dot1L影响DC分化的分子机制 |
| 小结 |
| 讨论 |
| 一、造血干细胞移植后树突状细胞免疫重建的探索 |
| 二、树突状细胞体外分化培养系统的构建 |
| 三、探索DOT1L与DC分化、功能之间的关联 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 中英文对照缩略词表 |
| 攻读学位期间公开发表的论文 |
| 致谢 |
（3）CD73在子宫内膜再生细胞抑制小鼠同种异体心脏移植物排斥反应中的作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、ERC的提取、培养、细胞表型鉴定以及CD73表达情况的鉴定 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 ERC的提取和培养 |
| 1.1.2 ERC的形态学观测 |
| 1.1.3 ERC的细胞表型鉴定 |
| 1.1.4 CD73的免疫荧光 |
| 1.1.5 主要仪器、耗材、试剂 |
| 1.1.6 统计学方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 ERC的形态 |
| 1.2.2 细胞表型鉴定结果 |
| 1.2.3 ERC表面CD73免疫荧光结果 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、ERC表面表达的CD73的体外功能研究 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 ERC细胞悬液的制备 |
| 2.1.2 ERC表面CD73的体外催化功能研究 |
| 2.1.3 小鼠脾脏细胞悬液的制备 |
| 2.1.4 抗CD73抗体预处理的ERC |
| 2.1.5 体外细胞共培养实验 |
| 2.1.6 流式细胞技术 |
| 2.1.7 主要仪器耗材和实验试剂 |
| 2.1.8 统计学方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 ERC表达的CD73能够体外催化AMP脱磷酸形成ADO |
| 2.2.2 表达CD73的ERC于体外可以抑制成熟DC的产生 |
| 2.2.3 表达CD73的ERC于体外能够促进M2 的增殖 |
| 2.2.4 表达CD73的ERC于体外能够促进Treg的增殖 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 三、ERC表达CD73在其抑制小鼠同种异体心脏移植物排斥反应中的作用及作用机制 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 小鼠同种异体异位心脏移植模型的制备 |
| 3.1.3 实验分组及治疗 |
| 3.1.4 同种异体异位心脏模型移植物生存观察 |
| 3.1.5 模型标本取材 |
| 3.1.6 组织病理检测及评分 |
| 3.1.7 免疫组织化学染色及分析 |
| 3.1.8 流式细胞术 |
| 3.1.9 单向混合淋巴细胞反应 |
| 3.1.10 酶联免疫吸附实验 |
| 3.1.11 实时荧光定量PCR |
| 3.1.12 相关仪器、耗材、试剂 |
| 3.1.13 统计学方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 ERC表达CD73能够延长小鼠心脏移植物的生存期 |
| 3.2.2 ERC表达CD73能够改善小鼠心脏移植物的病理改变 |
| 3.2.3 ERC表达CD73能够减轻小鼠心脏移植物急性细胞排斥反应 |
| 3.2.4 ERC表达CD73能够降低成熟DC的比例 |
| 3.2.5 ERC表达CD73能够增强Tol-DC的功能 |
| 3.2.6 ERC表达CD73能够降低总巨噬细胞数量并促进巨噬细胞向M2 极化 |
| 3.2.7 ERC表达CD73能够诱导体内Treg细胞增多 |
| 3.2.8 ERC表达CD73参与调节抗炎细胞因子和促炎因子的平衡 |
| 3.2.9 ERC表达CD73影响移植心脏A_(2A)和A_(2B)受体mRNA的转录水平 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 综述 CD73/ADO/ADOR信号通路在实体器官移植免疫中的研究进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）在低氧条件下280nm LED紫外线对HL-60细胞株增殖的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 细胞来源 |
| 1.2 主要器材 |
| 1.3 主要试剂 |
| 2 方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.2 实验分组 |
| 2.3 观察细胞形态、检测细胞密度 |
| 2.4 细胞增殖情况检测 |
| 2.5 细胞凋亡检测 |
| 2.6 Bcl-2 基因表达检测 |
| 2.7 Bcl-2 蛋白表达检测 |
| 2.8 统计学处理 |
| 结果 |
| 1. HL-60细胞株生长、形态及密度变化 |
| 2. HL-60细胞增殖抑制率 |
| 3. HL-60细胞凋亡率 |
| 4. HL-60细胞 Bcl -2基因的表达量 |
| 5. HL-60 细胞 Bcl -2 蛋白的表达量 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 缩略词表(附录) |
| 致谢 |
（5）血浆中microRNA水平对造血干细胞移植后aGVHD的诊断和预测意义研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 异基因造血干细胞移植概述 |
| 1.2 aGVHD概述 |
| 1.2.1 aGVHD概念与临床表现 |
| 1.2.2 aGVHD发生机制 |
| 1.3 aGVHD早期诊断标志研究现状 |
| 1.3.1 炎症因子与aGVHD |
| 1.3.2 蛋白质分子、信号通路与aGVHD |
| 1.4 microRNA概述 |
| 1.4.1 microRNA概念 |
| 1.4.2 microRNA的特性 |
| 1.4.3 microRNA与肿瘤 |
| 1.4.4 microRNA与血液系统疾病 |
| 1.4.5 microRNA与aGVHD |
| 1.5 实验目的基因的选择 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 研究对象与实验方法 |
| 2.1.1 研究对象 |
| 2.1.2 异基因造血干细胞移植患者临床资料 |
| 2.2 实验试剂与器材 |
| 2.2.1 实验试剂 |
| 2.2.2 qRT-PCR引物 |
| 2.2.3 实验器材与设备 |
| 2.2.4 实验器具处理 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 外周血标本的收集及储存 |
| 2.3.2 血浆的制备 |
| 2.3.3 血浆提取总RNA |
| 2.3.4 血浆总RNA的逆转录 |
| 2.3.5 实时荧光定量PCR反应 |
| 2.4 统计方法与数据分析 |
| 第三章 实验结果与分析 |
| 3.1 干细胞移植前血浆miR-181b、miR-194水平 |
| 3.2 无aGVHD组患者干细胞移植前后血浆miR-181b、miR-194表达水平 |
| 3.3 aGVHD组患者干细胞移植前后miR-181b、miR-194表达水平 |
| 3.4 miRNAs水平检测对aGVHD的诊断意义 |
| 3.4.1 miRNAs在aGVHD组和无aGVHD组的表达水平 |
| 3.4.2 血浆miRNAs的ROC曲线 |
| 3.5 miRNAs水平检测对aGVHD的预测意义 |
| 3.5.1 移植后2周血浆miRNAs对aGVHD的预测价值 |
| 3.5.2 移植后4-6周血浆miRNAs (miR-181b、miR-194)对aGVHD的预测价值 |
| 第四章 讨论 |
| 研究结论及展望 |
| 5.1 研究结论 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（6）MicroRNA let-7靶向结合Nr4A1调控T细胞功能在心脏移植排斥反应中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 主要中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 绪言 |
| 第一部分 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 实验结果 |
| 小结 |
| 讨论 |
| 第二部分 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 实验结果 |
| 小结 |
| 讨论 |
| 第三部分 |
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 实验结果 |
| 小结 |
| 讨论 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 :攻读博士学位期间发表文章 |
| 致谢 |
（7）miR-669b-3p调控IDO抑制CD4+T细胞增殖的体外研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 1 对象与方法 |
| 2 结果 |
| 3.讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研说明 |
| 综述 mi RNA在 T细胞的发育及T细胞介导的急性移植物抗宿主病中的作用 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）Galectin-1诱导耐受性树突状细胞联合凋亡淋巴细胞延长大鼠移植肝术后生存的研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 中英文缩略词 |
| 第一部分 Galectin-1诱导大鼠耐受性树突状细胞与凋亡淋巴细胞诱导耐受性免疫微环境的研究 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 材料与方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 结论 |
| 1.6 参考文献 |
| 第二部分 DC_(gal-1)联合凋亡淋巴细胞延长大鼠肝移植术后生存的研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 2.6 参考文献 |
| 综述 耐受性树突状细胞的特征,诱导及作用 |
| 参考文献 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 |
（9）IL-10基因修饰的树突状细胞诱导1型调节T细胞在防治GVHD和保存GVL中的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 绪论 |
| 第一部分 :IL-10慢病毒载体的构建及转染DCs |
| 1.材料和方法 |
| 1.1 主要材料和仪器 |
| 1.2 主要方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 第二部分 :IL-10 基因修饰的DCs诱导Tr1 细胞 |
| 1.材料和方法 |
| 1.1 主要试剂和仪器 |
| 1.2 主要方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 第三部分 :IL-10 基因修饰的DCs诱导Tr1 细胞对移植动物GVHD的发生以及生存的影响 |
| 1.材料和方法 |
| 1.1 主要材料和仪器 |
| 1.2 主要方法 |
| 2.结果 |
| 3.讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录1 :博士期间发表的学术论文 |
| 异基因造血干细胞移植中防治移植物抗宿主病并保留移植物抗白血病效应的研究进展 |
| 参考文献 |
（10）MDSC在异基因造血干细胞移植后诱导免疫耐受机制的初步研究（论文提纲范文）
| 英文缩略词表 |
| 第一部分 异基因造血干细胞移植患者体内髓系来源抑制细胞的表达及其临床意义 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 MDSC在小鼠急性移植物抗宿主病中的效应 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 体外G9诱导MDSC体系的建立及G9诱导的MDSC在小鼠急性移植物抗宿主病中的效应及作用机制初探 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 MDSC细胞在预防移植排斥反应中的作用 |
| 参考文献 |
| 附录 攻读学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
四、紫外线在移植物抗宿主反应中的作用（论文参考文献）
- [1]脂肪源间充质干细胞体外对aGVHD患者T细胞亚群的影响及机制初探[D]. 韩月霞. 新疆医科大学, 2021(09)
- [2]树突状细胞在移植物抗宿主病中的亚群变化及调控机制初探[D]. 李泊涵. 苏州大学, 2020(02)
- [3]CD73在子宫内膜再生细胞抑制小鼠同种异体心脏移植物排斥反应中的作用机制研究[D]. 胡永浩. 天津医科大学, 2020(06)
- [4]在低氧条件下280nm LED紫外线对HL-60细胞株增殖的影响及机制研究[D]. 王艺霖. 青岛大学, 2019(03)
- [5]血浆中microRNA水平对造血干细胞移植后aGVHD的诊断和预测意义研究[D]. 邓慧兰. 厦门大学, 2019(01)
- [6]MicroRNA let-7靶向结合Nr4A1调控T细胞功能在心脏移植排斥反应中的作用及机制研究[D]. 丁祥超. 华中科技大学, 2019(03)
- [7]miR-669b-3p调控IDO抑制CD4+T细胞增殖的体外研究[D]. 王曦. 天津医科大学, 2019(02)
- [8]Galectin-1诱导耐受性树突状细胞联合凋亡淋巴细胞延长大鼠移植肝术后生存的研究[D]. 彭一帆. 浙江大学, 2019(03)
- [9]IL-10基因修饰的树突状细胞诱导1型调节T细胞在防治GVHD和保存GVL中的研究[D]. 万江波. 上海交通大学, 2017(05)
- [10]MDSC在异基因造血干细胞移植后诱导免疫耐受机制的初步研究[D]. 尹琎. 华中科技大学, 2016(08)