一、T细胞受体删除环定量检测的意义及应用现状（论文文献综述）
魏于斯[1]（2020）在《4例重组激活基因1突变免疫缺陷患儿的临床及免疫学分析》文中研究指明目的:总结分析4例由RAG1基因突变引起的免疫缺陷患儿的临床特征、免疫表型及基因型。方法:收集2018年3月-2018年7月在重庆医科大学附属儿童医院就诊的4例经基因确诊RAG1基因突变患儿的临床资料,采集患儿及家属的外周血标本,送检血常规、淋巴细胞分类计数、免疫球蛋白水平,分析TCR-Vβ亚家族克隆谱型,定量PCR检测TRECs水平,流式细胞术检测淋巴细胞亚群,STR检测除外母源性T细胞植入。结果:4例RAG1基因突变患儿中男女各2例,2例有家族史。所有患儿以反复呼吸道感染为主要表现,除了例1未接种卡介苗,其余患儿均接种卡介苗且患卡介苗病。结合临床表现及免疫结果分析例1表现为T+B-Omenn综合征,例2表现为T-B-Omenn综合征,例4表现为经典T-B-SCID,例3表现为泄露型T-B+SCID。3例患儿行TREC水平检测,例1为40.8、例2为24、例3为169,均低于同龄健康儿童。例1、例2大多数TCR-Vβ亚家族表现为单克隆或寡克隆峰。例4为纯合突变,其余为复合杂合突变,其中c.3072＿c.3073 ins T、c.322C>T、c.2689C>T、及c.2333G>A已见报道,c.2190 del T、c.310C>T、c.2516A>C为新发位点。结论:RAG1基因突变患儿的临床表现、免疫学表型多种多样,若临床发现红皮病、淋巴数量减少,自身免疫现象且合并多种感染、重症感染甚至卡介苗感染,则应警惕SCID尤其是RAG1缺陷可能。对疑似患儿应尽早行免疫学及基因检查确诊。高度怀疑免疫缺陷患儿应避免接种活疫苗。
李文言[2]（2020）在《WAS蛋白缺陷对记忆T细胞受体多样性和胸腺输出功能的影响及机制研究》文中认为第一部分WAS蛋白缺陷对记忆T细胞受体多样性的影响背景:T细胞受体（TCR）多样性是T细胞发挥有效免疫功能的重要保障之一。在免疫系统中,TCR组库由所有T细胞克隆组成,每个T细胞克隆通过其TCR特异性识别相应抗原,使免疫系统具备可识别周围环境中几乎所有抗原的潜能。Wiskott-Aldrich综合征（WAS,OMIM#301000）又称湿疹、血小板减少伴免疫缺陷综合征,由WAS蛋白（WASp）缺陷导致,临床主要表现为湿疹、血小板减少、免疫缺陷及易患自身免疫性疾病和淋巴系统肿瘤。WASp主要调节非红系造血系统细胞的肌动蛋白聚合,其缺陷可影响免疫细胞的多种功能。我们课题组与国外研究团队相继发现WAS病人的TCR多样性严重受限。在这些研究结果中,WASp缺陷对T细胞各亚群TCR多样性的影响程度稍有差异,其中记忆T细胞TCR多样性受限最为肯定。众所周知,TCR克隆数易受感染、免疫接种、自身免疫等各种外源性因素的影响。尽管我们在年幼的WAS患儿中也证实了TCR多样性受限,但仍无法完全排除环境因素对TCR多样性的影响。目的:利用WASKO小鼠、骨髓嵌合小鼠模型和高通量测序技术（HST）,研究WASp对T细胞各亚群TCRVβ多样性的影响,以探索WASp缺陷是否为导致记忆T细胞TCRVβ多样性受限的固有因素,而非感染或其他外源性因素。方法:我们采用磁珠分选和流式细胞分选技术,分选出WASKO/WT小鼠模型、WASKO/WT小鼠（CD45.2+）与野生型小鼠（CD45.1+）骨髓嵌合模型的T细胞亚群,利用多重PCR的HST和新型UMI定量5’RACE的HST免疫组库测序方法进行检测,通过生物信息学方法全面分析TCRVβ链的互补决定区3（CDR3）的序列,以验证WASp缺陷引起的记忆T细胞TCR多样性受限是否为固有存在。结果:1.运用多重PCR的HST测序方法检测未嵌合WASKO/WT小鼠中CD4+TEM、CD4+TCM、CD4+T Na?ve、CD4+Tscm、CD8+TCM、CD8+T Na?ve和CD8+Tscm 7个T细胞亚群的TCRVβ多样性。经生物学分析发现:与WT组相比,WASKO组中CD8+T Na?ve和CD8+Tscm的香农指数和辛普森指数倒数降低（P<0.05）,克隆性指数升高（P<0.05）,Chao1指数和Ace指数无统计学差异;其余T细胞亚群的5种多样性指数值在两组间均无统计学差异。整体上,WT和WASKO两组7个T细胞亚群的V、D、J基因的亚家族的取用和TCRVβ的CDR3序列长度无明显差异。2.运用UMI定量5’RACE的HST免疫组库测序技术检测WT小鼠（WASp+,CD45.2+）和WASKO小鼠（WASp-,CD45.2+）骨髓嵌合模型中CD4+TEM和CD8+TCM两组记忆T细胞亚群的TCRVβ多样性,共获得32个样本平均551万个测序读数（305900万个）。运用生物学分析发现:（1）与WT相比,KO-CD4+TEM的辛普森指数升高、D50降低（P<0.05）,而香农指数和Chao 1指数无统计学差异;KO-CD8+TCM与WT相比,4个多样性指数均无统计学差异。与WT相比,KO-CD4+TEM或KO-CD8+TCM的TOP100均无统计学差异。（2）与WT相比,KO-CD4+TEM的丰度比曲线陡而短、Dq与q值的曲线偏下,而KO-CD8+TCM两种曲线位置变化均不明显。（3）用组成份分析（PCA）综合考量TCRVβ多样性发现,KO-CD4+TEM和WT-CD4+TEM两组可以明显区分,而KO-CD8+TCM与WT-CD8+TCM两组基本一致。（4）KO-CD4+TEM与WT-CD4+TEM在V/D/J基因的亚家族的取用上相比发现,TRBV12.2、TRBV30、TRBV31、TRBV4、TRBD1、TRBD2、TRBJ1.1和TRBJ1.4的取用上存在显着差异（P<0.05）。KO-CD8+TCM与WT-CD8+TCM相比,在TRBV12.2、TRBV15、TRBV20的取用上存在显着差异（P<0.05）。（5）运用PCA方法,对V基因、V-J基因组合、V-D-J基因组合情况相比较发现,KO-CD4+TEM和WT-CD4+TEM在V基因上可明显分为两群,但随着组合基因的增多差异变小;KO-CD8+TCM和WT-CD8+TCM两组间的差异较小。（6）与WT相比,KO组中CD4+TEM样本的重叠指数降低（P<0.001）、CD8+TEM样本的重叠指数升高（P<0.001）、CD4+TEM比CD8+TEM的重叠指数升高（P<0.001）。（7）利用VDJTOOLS软件,从“F2”、“R”和“D”三个度量对TCRVβ序列相似性比较发现,KO与WT的CD4+TEM在D度量中最为分散。KO-CD8+TCM与WT相比三个度量都较为集中。（8）KO-CD4+TEM与WT-CD4+TEM相比,酪氨酸下调,而苯丙胺酸、天冬酰胺、结氨酸上调（P<0.05）。KOCD8+TCM与WT-CD8+TCM相比天冬氨酸下调,色氨酸上调（P<0.05）。（9）在CD4+TEM与CD8+TCM两个细胞群中,WT和KO的第6、7位置上的氨基酸疏水性无明显差异。疏水指数和半胱氨酸指数,在WT和KO组中均无统计学差异。（10）TCRVβ序列长度在KO组和WT组的CD4+TEM或CD8+TCM中均无统计学差异。结论:WASp缺陷导致CD4+TEM的TCRVβ多样性受限是内源性的,而对CD8+TCM的TCRVβ多样性影响较小。WASp缺陷可导致CD4+TEM和CD8+TCM在TRB的V、D、J亚基因取用、V-J及V-D-J基因组合、TCRVβ序列相似性和氨基酸组成上的差别,但未对TCRVβ疏水性和序列的长度造成显着影响。第二部分WAS蛋白缺陷对T细胞胸腺输出的影响及机制研究背景:T细胞起源于骨髓,发育成熟在胸腺,其中TRB的V/D/J重排也在胸腺中完成。TCR重组切除环（TRECs）稳定存在于胸腺输出细胞中,可作为胸腺输出的分子标记。Wiskott-Aldrich综合征（WAS）又称湿疹、血小板减少伴免疫缺陷综合征,可按临床表现分为典型WAS、间歇性X连锁血小板减少症（IXLT）、X连锁血小板减少症（XLT）和X连锁粒细胞减少症（XLN）。WASp是肌动蛋白骨架重构的重要调节因子。T细胞功能缺陷是导致Wiskott-Aldrich综合征（WAS）患者免疫缺陷的最重要原因之一。有研究结果证实,WAS患儿有随年龄增长出现逐渐加重的T细胞减少症,多项研究提示其原因可能为T细胞早期发育轻微受损、T细胞活化、增殖能力下降,以及T细胞凋亡增多等。Jilkina等人,检测了两名WAS患儿的TRECs拷贝数,并发现患者的TRECs与健康供者相比正常,提示WASp缺陷并未影响胸腺输出功能。但由于纳入的病人数量受限,WASp缺陷是否导致胸腺输出功能减低,从而影响初始T细胞的数量,还需进一步明确,胸腺输出缺陷与肌动蛋白之间的关系仍需深入研究。目的:本研究以年幼的WAS患儿、XLT患儿及WASKO小鼠为模型,以明确WASp缺陷对T细胞胸腺输出的影响,并探索胸腺输出与肌动蛋白之间的关系。方法:利用一代基因测序方法检测WAS基因,明确致病基因的突变位点。纳入4名典型WAS患儿、4名XLT患儿及年龄相匹配的健康体检儿童。采用流式细胞分析技术（FCM）测定患者或健康供者WASp蛋白在单个核细胞（PBMCs）中的表达情况。通过FCM检测WAS患儿或健康供者外周血中的T细胞亚群占比情况,包括CD4+T细胞、CD8+T细胞及初始T细胞等。采用定量RT-PCR方法检测患者或健康体检及WASKO/WT小鼠外周血TRECs拷贝数。利用磁珠分选患者或健康体检儿童外周血T细胞,进而采用共聚焦显微成像技术,检测T细胞在PMA和离子霉素刺激0 min、5min和30min时F-actin的MFI、TFI和亚细胞定位情况。FCM也用于同时检测T细胞在PMA和离子霉素刺激0 min、5min和30min时F-actin的MFI水平。结果:典型WAS患儿组CD4+T细胞和初始CD8+T细胞数量明显减少（P<0.05）。与健康体检儿童相比,典型WAS患儿和XLT患儿的PBMC中WASp表达降低（分别为P<0.01和P<0.05）。典型WAS患儿和XLT患儿的WASp表达水平无统计学差异。典型WAS患儿与同龄健康体检儿童（HC1）相比,外周血的TRECs拷贝数降低（P<0.05）。XLT患儿与同龄健康体检儿童（HC2）相比,外周血的TRECs拷贝数降低（P<0.05）。典型WAS患儿与XLT患儿相比,外周血的TRECs拷贝数无统计学差异。WASKO小鼠与WT小鼠相比外周血的TRECs拷贝数降低（P<0.01）。用NIS-Elements AR3.2软件分析发现,无论刺激或无刺激状态下WAS患儿的T细胞膜上和细胞质中F-actin的MFI和TFI均较对照组显着减少（P<0.01）,且典型WAS比XLT患儿降低的更为明显（P<0.01）。从3D图像的侧面和底部观察分析发现,健康儿童的T细胞F-catin的TFI显着高于XLT患儿（P<0.001）,XLT患儿也高于典型WAS患儿（P<0.01）。用FCM检测发现,在刺激或无刺激状态下XLT患儿和典型WAS患儿T细胞F-actin的MFI水平均下降,且与XLT患儿相比典型WAS患儿下降得更为明显（P<0.01）。结论:本研究结果提示WASp缺陷影响T细胞的胸腺输出功能。基于现阶段从患者外周血T细胞获得的结果,提示在T细胞活化过程中F-actin的变化与WASp表达水平相关。我们推测微丝骨架的分布异常是胸腺输出功能受损的一个影响因素。但尚不清楚其主要影响了T细胞在胸腺发育中的哪一阶段。
武小亮,韩娟,王靖,卢林纲[3]（2019）在《外周血T细胞受体删除环（TRECs）定量测定在评估骨髓移植术后免疫重建中的应用概况及进展》文中研究说明骨髓移植成功的关键在于移植后免疫系统的重建状况,特别是T细胞数量及功能的重建。T细胞受体删除环（TRECs）作为胸腺近期输出naive T细胞含量的标志,在细胞中十分稳定,可作为评价胸腺近期的输出功能及T细胞免疫重建状况的指标。鉴于TRECs对评价骨髓移植术后免疫重建状况具有重要现实意义,该文就TRECs的定量检测及其在评价骨髓移植后免疫重建状况中的应用概况及进展进行综述。
肖超[4]（2019）在《中国汉族人群血液AR-CpGs的筛选、验证及个体年龄推断研究》文中认为研究背景年龄是具有生物学基础的个体特征。当参考样本和DNA数据库均无法提供匹配信息时,通过准确推断生物样本的年龄,可以缩小未知嫌疑人的搜索范围、提供附加信息来更好地预测未知嫌疑人的外部可见特征。理论上,个体年龄推断在以下方面具有法医学应用价值:（1）在没有目击者证词和DNA数据库记录的情况下指导警方开展调查;（2）辅助身份不明遗体的鉴定;（3）为法律事务和欺诈事件等提供年龄信息;（4）改善年龄相关表型的预测。目前,人类学家和法医技术人员可以通过测量和分析骨骼或牙齿上各种年龄相关的形态变化来推断个体年龄,但是这些形态学方法仅适用于活体或遗骸存在的情形。然而,犯罪者遗留的生物证据极不可能是体液（如血液、精液和唾液）、脱落细胞、毛发或组织块以外的样本。因此,必须找到其他适用于这些样本的年龄推断方法。近二十年来,研究人员先后报道了多种与年龄相关的生物标记物,如天冬氨酸外消旋化、线粒体DNA缺失、信号结合T细胞受体删除环、端粒长度、晚期糖基化终末产物和mRNA。可是这些方法还存在推断精度低、检测结果准确性、可重复性差以及易受环境因素影响等不足。越来越多的证据表明,人类基因组特定位点的DNA甲基化（DNA methylation,DNAm）水平与年龄具有显着相关性,被称为“表观遗传学时钟”。近来研究表明,年龄相关CpG位点的年龄推断能力显着优于mRNA、信号结合T细胞受体删除环和端粒长度。目前,已有多个研究基于不同甲基化分析平台开发了可用于血液、唾液、口腔拭子、精液或更广泛组织的年龄推断模型,进一步证实了DNAm是法医学个体年龄推断中最有前景的生物标记物。研究已证实CpG标记的甲基化具有群体差异,但是目前绝大多数报道以欧洲起源人群或白种人为研究对象,即使有少数针对汉族人群的研究,也缺少系统性。鉴于此,本研究旨在采用Infinium MethylationEPIC芯片在全基因组范围内筛选中国汉族人群血液特异性的年龄相关CpG位点,并构建基于焦磷酸测序技术的个体年龄推断方法,以期为法医学个体年龄推断奠定研究基础。本研究主要包括以下三个部分:第一部分:年龄相关CpG位点的筛选目的筛选适用于中国汉族人群的年龄相关CpG位点以及450K芯片覆盖范围外的年龄相关CpG位点。方法通过自诉病史或常规体检募集中国汉族无关健康志愿者42名,其中青年组（1825岁）、中年组（3545岁）和老年组（5565岁）各14名且每组的男性和女性各占一半。使用Illumina Infinium MethylationEPIC（850K）芯片分析这些志愿者全血基因组DNA中约853,307个CpG位点的甲基化状态。按照下述原则过滤探针和样本:（1）信号强度低于平均背景信号的探针（detection P-values>0.01）;（2）在≥5%的样本中beads数小于3的探针;（3）有效探针比例小于98%的样本;（4）SNP位点对照探针。计算样本中有效CpG位点的甲基化β值后,使用BMIQ（beta mixture quantile dilation）法对β值进行归一化,并根据归一化后的β值,采用limma包和step-up Hochberg方法分别计算组间差异比较的P值和校正P值。然后,以P值小于0.01或校正P值小于0.05为条件,分别从男性样本、女性样本和总样本中筛选具有统计显着性的差异甲基化位点（differentially methylated positions,DMPs）,并以各年龄组两两比较的交集作为年龄相关CpG标记集合。最后,以老年组和青年组之间甲基化β值的差值的绝对值大于0.15为条件,挑选出用于后续验证的男性和女性候选CpG位点。此外,通过与已有文献进行比对以及使用850K数据对现有模型进行评估,反过来证实数据的可靠性。结果所有42个样本通过质控标准。以P值小于0.01或校正P值小于0.05为条件,在总样本的中年组与青年组（校正P值<0.05）、老年组与青年组（校正P值<0.05）和老年组与中年组（P值<0.01）之间分别筛选到20,378个,56,584个和5,281个具有统计显着性的DMPs。在男性样本的中年组与青年组（校正P值<0.05）、老年组与青年组（校正P值<0.05）和老年组与中年组（P值<0.01）之间分别筛选到1,030个,14,453个和5,686个具有统计显着性的DMPs。在女性样本的中年组与青年组（P值<0.01）、老年组与青年组（校正P值<0.05）和老年组与中年组（P值<0.01）之间分别筛选到9,956个,1,291个和3,626个具有统计显着性的DMPs。取交集后,在总样本、男性样本和女性样本中分别筛选到785个、68个和151个在三次组间比较中均具有统计显着性的年龄相关CpG位点。所有这些CpG位点的甲基化β值随着年龄增长而逐渐增加或减少。进一步分析表明,除Y染色体外,所有染色体上都存在年龄相关CpG位点。值得注意的是,大多数年龄相关CpG位点不属于450K芯片,特别是在单独分析男性样本时,高达60%。大约三分之二的CpG位点的甲基化β值随年龄增长呈下降趋势。特别地,68个男性年龄相关CpG位点中只有1个位点的甲基化β值随年龄增长呈上升趋势,而其余67个均表现出下降趋势。总样本、男性样本和女性样本的年龄相关CpG位点共享了5个位点,分别是cg16867657（ELOVL2）、cg10501210（C1orf132）、cg12899747、cg07504615和cg21599943。更重要的是,男性样本与女性样本之间的交集也只有这5个位点。考虑到可能存在的性别差异,最终以老年组和青年组之间甲基化β值的差值的绝对值大于0.15为条件,分别挑选出25个男性和24个女性年龄相关CpG位点。除去共有的3个CpG位点（cg16867657、cg10501210、cg12899747）外,这些候选位点中有18个850K芯片特有的CpG位点以及28个450K位点。相关分析显示,这些位点的Spearman相关系数的绝对值在0.750.95范围内。文献检索结果显示,28个450K位点中,12个位点被报道为年龄相关CpG位点,9个位点无相关报道,其余7个位点与其他疾病、吸烟或长寿相关。经过综合分析,剔除了与吸烟相关的候选位点cg04885881。更重要的是,这些位点中仅有3个位点与现有汉族群体研究的CpG位点重叠。通过使用Park模型:Age=39.73167+(5423（cg04208403）×（-0.28914）+(12（cg16867657）×1.19242+102（cg19283806）×（-0.69994）,确定了850K DNAm数据的有效性。结论发现在450K覆盖区域外存在其他年龄CpG位点。选择了25个男性候选CpG位点和23个女性候选CpG位点用于下一步的验证。此外,在小样本芯片分析中,组间差异比较方法可用于年龄相关CpG位点的筛选。第二部分:焦磷酸测序方法的建立与候选CpG位点的验证目的建立用于候选CpG位点甲基化分析的焦磷酸测序方法和进一步筛选出用于建立年龄推断模型的CpG位点或区域。方法根据候选CpG位点的侧翼序列和引物设计原则,使用PyroMark Assay Design软件2.0版本设计PCR扩增引物和焦磷酸测序引物。按照制造商的说明,使用QIAamp DNA Blood Mini Kit、EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit和PyroMark PCR Kit完成基因组DNA的提取、1000 ng基因组DNA的亚硫酸氢盐转化和PCR扩增。通过优化PCR扩增的退火温度以及焦磷酸测序的测序引物,建立可用于分析位于41个片段中137个CpG位点甲基化水平的焦磷酸测序方法。选取中国汉族无关健康个体60名,其中青年组（1823岁）、中年组（3843岁）和老年组（5561岁）各20名且每组的男性和女性各占一半。实际年龄等于样本采集日期距身份证、出生证明或户口簿上记载的出生日期的天数除以365,并保留2位小数。使用已建立的41个焦磷酸测序体系分别对30名男性和30女性的外周血基因组DNA进行检测。使用PyroMark Q24 Advanced 3.01软件提取甲基化数据,并利用统计软件计算每个CpG位点的甲基化β值与个体年龄之间的Spearman相关系数。最后,以相关系数的绝对值大于0.75作为条件完成候选CpG位点的进一步筛选。结果由于女性候选位点cg04875128位于CpG密集区域,难以设计合适引物,而男性候选位点cg13108341多次优化失败,因此共建立了可用于检测41个基因组区域内共137个CpG位点的焦磷酸测序方法。相关分析结果显示,以相关系数绝对值大于0.65为标准,20个女性候选区域（包括22个候选位点）中共有14个区域至少包含一个满足条件的CpG位点。相应地,24个男性区域（包括24个候选位点）中则有16个区域满足条件。如果将相关系数阈值调整为0.70、0.75和0.80,在女性候选区域中,分别有12个、8个和5个目标区域满足条件,而男性候选区域则分别有11个、9个和5个目标区域满足条件。此外,与焦磷酸测序数据相比,基于450K数据的相关系数明显偏大。最终以相关系数绝对值大于0.75作为筛选标准,分别挑选了8个女性候选区域（F1cg16867657,F2cg22454769,F3cg06279276,F4cg07547549,F5cg10501210,F9cg27030854,F11cg11584042和F14cg26947034）和8个男性候选区域（M1cg16867657,M2cg02844688,M3cg18738190,M4cg03372207,M10cg10501210,M12cg13552692,M18cg17675043和M24cg17740900）用于下一步的大样本验证和模型构建。结论建立的41个焦磷酸测序体系可用于对应区域的甲基化检测分析。此外,证实了位于8个男性和8个女性候选区域内的CpG位点具有显着的年龄相关性,可作为候选位点用于后续年龄推断模型的构建。第三部分:多元线性回归模型的建立目的从候选区域内挑选与年龄显着相关的CpG位点,并构建年龄推断模型。方法使用已优化的焦磷酸测序体系分别对141名女性个体（380岁）外周血样本中8个候选区域内的51个CpG位点和167名男性个体（185岁）外周血样本中9个候选区域内的41个CpG位点进行甲基化定量分析。根据DNAm数据分别计算每个CpG位点与实际年龄的Spearman相关系数。随后,从每个候选区域内选择一个相关系数最大的CpG位点用于构建分别针对男性、女性和不分性别的多元线性回归模型。首先,基于全部样本的DNAm数据,构建包含所有入选CpG位点的多元线性回归模型,并使用逐步回归测试各位点的相对重要性。然后,将整个样本按照7:3的比例进行随机分割,其中70%的样本作为训练集,30%的样本作为测试集。以校正R2、马洛斯Cp值和贝叶斯信息准则BIC值为参考指标,使用最优子集选择法构建模型,并计算平均绝对偏差（mean absolute deviation,MAD）、均方误差（mean squared error,MSE）、均方根误差（root mean square error,RMSE）和平均绝对百分比误差（mean absolute percentage error,MAPE）,以用于衡量模型的预测性能。将整个样本分为五个年龄组:018岁、1830岁、3040岁、4050岁、>50岁,分别计算回归模型在训练集和测试集中±5岁范围内的预测准确率。最后,使用k折交叉验证法对模型进行评估。结果相关分析结果显示,男性候选区域M1、M2、M3、M4、M8、M10、M12、M24和女性候选区域F2在男性样本中与实际年龄的相关系数绝对值的范围分别为0.89290.9570、0.79630.8017、0.57890.8256、0.8379、0.77480.8183、0.80160.9228、0.89280.9234、0.9143和0.06390.9242。女性候选区域F1、F2、F3、F4、F5、F9、F11和F14在女性样本中与实际年龄的相关系数绝对值的范围分别为0.87420.9483、0.04090.8982、0.63600.7903、0.44760.7682、0.74560.9053、0.7397、0.81860.8189和0.8852。男性和女性共有候选区域ELOVL2（M1或F1）、C1orf132（M10或F5）和FHL2（F2）在总样本中与实际年龄的相关系数绝对值的范围分别为0.89600.9478、0.77680.9151和0.01780.9136。其中,相关系数最大的CpG位点在这三组分析中均位于ELOVL2基因内。经初步测试,发现部分候选区域内相关系数最大的CpG位点在回归模型中所起的作用相对较小。以校正R2、马洛斯Cp值和贝叶斯信息准则BIC值为参考指标,选择了6个（cg17740900、cg19283806、M21、M108、F23和M16）、4个（F22、F46、F55和F17）和3个（ELOVL27、FHL22和C1orf1328）CpG位点分别用于构建男性模型、女性模型和联合模型。在男性模型（校正R2=0.9529）中,训练集的MAD、MSE、RMSE和MAPE分别为2.6568,12.0906,3.4772和11.9565%;测试集的MAD、MSE、RMSE和MAPE分别为3.0826、16.6841、4.0846和17.3213%。该模型在训练集和测试集中±5岁的预测准确率分别为87.07%和86.27%;预测年龄与实际年龄的Spearman相关系数分别为0.98088和0.97622。10次10折交叉验证的校正后R2、MAD、MSE、RMSE和MAPE分别为0.9544±5.8613E-5、2.9026±0.5555岁、14.6939±6.2751、3.7495±0.8011和0.1352±0.0650。在女性模型（校正R2=0.9373）中,训练集的MAD、MSE、RMSE和MAPE分别为2.9627岁、13.3577、3.6548和2.1281%,测试集的MAD、MSE、RMSE和MAPE分别为3.0521岁、17.2682、4.1555和11.4948%。该模型在训练集和测试集中±5岁的预测准确率分别为85.71%和76.74%;预测年龄与实际年龄的Spearman相关系数分别为0.96503和0.95681。10次10折交叉验证的校正R2、MAD、MSE、RMSE和MAPE分别为0.9312±6.6451E?5、3.1103±0.7211岁、15.8586±7.1785、3.8925±0.8451和0.1249±0.0475。在联合模型（校正R2=0.9317）中,训练集的MAD、MSE、RMSE和MAPE分别为3.1875岁、16.2752、4.0342和13.0524%;测试集的MAD、MSE、RMSE和MAPE分别为3.2506岁、17.9997、4.2426和13.7312%。该模型在训练集和测试集中±5岁的预测准确率分别为77.67%和78.49%;预测年龄与实际年龄的Spearman相关系数分别为0.96405和0.97026。10次10折交叉验证的校正R2、MAD、MSE、RMSE和MAPE分别为0.9352±2.3084E-5、3.2483±0.3998岁、17.2531±4.1733、4.1233±0.5043和0.1423±0.0440。将三个模型应用于训练集和测试集时,均发现老年个体（>50岁）的预测准确率出现下降。另一方面,使用联合模型进行样本预测时,虽然发现实际年龄与预测年龄的差值分布在男性和女性之间有显着差异（Man-Whitney检验:P=0.00482;Kruskal-Wallis方差分析:P=0.00481;Kolmogorov-Smirnov检验:P=0.01382）,但是将性别纳入联合模型并不会明显改善预测准确率。值得注意的是,男性模型中包含了一个新位点cg17740900。结论鉴定了可用于开发年龄推断模型的多个CpG位点。建立了三个MAD约3.0岁的年龄推断模型,为后续研究和实践奠定了基础。
徐祺玲[5]（2019）在《ISG15突变家系临床及免疫特征及CⅡTA突变致MHCⅡ类分子缺陷病的免疫学研究》文中认为第一部分ISG15突变家系临床及免疫特征目的:探讨我国一ISG15基因突变家系中2例患儿的临床与免疫学特征。方法:总结2例在重庆医科大学附属儿童医院就诊来自同一家系的ISG15基因突变患儿的临床资料、实验室检查,全外显子结合Sanger测序分析患儿及其亲缘ISG15基因序列,密度梯度离心法提取外周血中性粒细胞,流式细胞术及免疫荧光法检测其内ISG15蛋白表达,PCR法检测IFN-γ-IL12轴功能,鲁米诺化学发光法检测中性粒细胞产生活性氧簇功能。结果:患儿1,男,1岁9月,1月起病,表现为反复呼吸道感染,患儿2,女,3月,1月起病,表现为全身皮肤的化脓性感染。免疫球蛋白水平及淋巴细胞分类计数、NBT检测均正常。2例患儿来自同一家系（父母为近亲结婚）,ISG15基因c.420C>A纯合突变,父母均为杂合突变,为未报道新发突变。2例患儿中性粒细胞内ISG15蛋白表达明显降低,中性粒细胞产生外源性活性氧簇的功能受损,内源性活性氧蔟无明显差异,患儿2 IFN-γ-IL12轴功能基本正常。经抗感染治疗两患儿临床症状改善,患儿1现基本同健康同龄儿,患儿2皮肤破溃愈后形成较多菲薄瘢痕,1岁6月龄时因异物吸入意外死亡。结论:经临床分析、基因及蛋白检测,确诊同一家系2例ISG15突变致免疫缺陷病患儿,为未报道新发突变。不同于既往报道病例较为一致的结核易感性及I型干扰素病表现,该家系患儿临床表现为以反复呼吸道和皮肤软组织细菌感染为主的新表型,且同一基因型的表现型具有异质性。免疫学检测发现IFN-γ-IL12轴功能基本正常,中性粒细胞产生外源性活性氧簇的功能受损,提示ISG15蛋白在中性粒细胞中起重要功能,其表达缺失可能与中性粒细胞产生胞外氧自由基障碍和反复细菌感染存在一定关系,其具体发病机制尚待进一步研究。第二部分CⅡTA突变致MHCⅡ类分子缺陷病的免疫学研究目的:探讨1例CⅡTA基因突变所致MHCⅡ类分子缺陷病A组患儿临床与分子特征。方法:总结1例在重庆医科大学附属儿童医院就诊的MHCⅡ类分子缺陷病患儿的临床资料、实验室检查,Sanger测序分析患儿CⅡTA基因序列、PCR法检测T细胞受体长度多样性,流式细胞术检测HLA-DR蛋白表达。结果:患儿男,2岁,3月起病,表现为反复腹泻、呼吸道感染、持续CMV感染、卡介苗病、重度营养不良,Ig G、Ig A下降、Ig M升高,CD4+T细胞比例下降但数量正常、CD4/CD8比例倒置。CⅡTA基因复合杂合突变,c.3223C>T来源于父亲;c.1240del C来源于母亲,为未报道新发突变。患儿B细胞和单核细胞表面的HLA-DR表达明显降低,T细胞功能轻度受损。确诊后患儿行单倍体造血干细胞移植,因发生严重的移植物抗宿主病死亡。结论:经临床分析、免疫学筛查、基因及流式细胞术检测,确诊MHCⅡ类分子缺陷患儿1例,其母源突变c.1240del C既往未见报道。反复多病原感染伴有CD4+细胞比例和（或）数量下降需警惕该病可能,综合临床与实验室检查行MHCⅡ蛋白表达及基因测序可确诊该病,造血干细胞移植是目前根治的唯一办法,但成功率较其他联合免疫缺陷病低。
潘克女,张永乐,张钧,左中宝,俞哲,刘寿荣[6]（2019）在《TaqMan-MGB探针实时荧光PCR法检测T细胞受体重排删除环评估慢性乙型肝炎患者胸腺近期输出功能》文中研究说明目的:建立一种快速、准确检测T细胞受体重排删除环（TRECs）的方法,用来评价慢性乙型肝炎患者胸腺输出功能。方法:根据T细胞受体（TCR）基因序列设计引物与探针,建立TaqMan-MGB双标记探针技术定量测定外周血中TRECs的含量,通过重复性、敏感性、准确性实验评价该方法的可靠性;并将此技术应用于慢性乙型肝炎中型（CHB）患者中评价胸腺输出功能。结果:通过多次试验成功建立了检测TRECs含量的TaqMan-MGB双标记探针实时荧光定量检测方法,并对5×105copies的质粒进行10倍法稀释,最低检出可达50 copies;对6. 18 Lg copies/106PBMCs和3. 54 Lg copies/106PBMCs高低浓度标本同一批次进行25次检测结果平均值为6. 08±0. 14,3. 52±0. 18 Lg copies/106PBMCs批内变异系数分别为2. 26%,5. 12%,对这两份标本连续5 d重复20次试验结果平均值为6. 10±0. 23,3. 51±0. 22 Lg copies/106PBMCs批间变异系数分别为3. 85%、6. 27%;用双蒸水代替模板进行检测无目的基因扩增。35例健康成年人外周血TRECs平均含量为5. 62±1. 38 Lg copies/106PBMCs,45例同年龄段CHB患者外周血TRECs平均含量为4. 09±0. 97 Lg copies/106PBMCs,两者差异存在统计学意义（t=11. 25,P <0. 05）。结论:Taq Man-MGB双标记探针时荧光定量PCR技术检测TRECs特异性强,灵敏度高,重复性好;成年CHB中型患者外周血TRECs含量明显低于同龄健康人群,TRECs可用于CHB患者胸腺功能的评估。
潘克女[7]（2019）在《TRECs和CD31淋巴细胞计数评估慢性乙型肝炎患者胸腺新近输出功能的研究》文中研究指明研究目的:1、建立TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR技术,检测外周血中T细胞受体重排删除环（TRECs）的含量。2、探讨T细胞受体重排删除环（TRECs）的含量与CD31+调节性T淋巴细胞检测在评价慢性乙型肝炎患者胸腺新近输出功能的临床应用价值。研究方法:1、根据T细胞受体（TCR）基因序列设计引物与探针,建立TaqMan-MGB标记探针技术定量检测外周血中TRECs的含量,通过重复性、敏感性、准确性实验评价该方法的可靠性。2、选择105例慢性乙型肝炎患者和30例健康体检者分为四组:轻度慢性乙型肝炎患者（Mild HBV）组35例、中度慢性乙型肝炎患者（Moderate CHB）组35例,重度慢性乙型肝炎患者（Severe CHB）组35例,健康对照（HCs）组30例,利用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMC）,采用CD31作为胸腺新近输出功能的细胞表面标志物,通过流式细胞分析法检测各组外周血中CD31+Treg/Treg细胞的百分比,应用TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR技术检测PBMC中T细胞受体重排删除环（TRECs）的数量,采用Spearman相关性检验分析CD31+Treg/Treg百分比与PBMC中TRECs数量间的相关性。同时进行常规CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+检测,对三组慢性乙型肝炎患者进行ALT,HBV-DNA及乙肝免疫标志物检测。研究结果:1.通过多次试验成功建立了检测TRECs含量的TaqMan-MGB标记探针实时荧光定量检测方法,并对5×105Copies的质粒进行10倍法稀释,最低检出限可达50 Copies;对6.18ULgCopies/106BMCs 和 3.54 LgCopies/106PBMCs 高低浓度标本同一批次进行25次检测结果平均值为6.08±0.14,3.52±0.18Lg Copies/106BMCs批内变异系数分别为2.26%,5.12%,对这两份标本连续4天重复20次试验结果平均值为 6.10±0.23,3.51±0.22LgCopies/106PBMCs 批间变异系数分别为 3.85%,6.27%;对已确认阳性的解脲支原体DNA,沙眼衣原体DNA,疱疹病毒2型DNA,淋球菌 DNA,HBVDNA（UUDNA,CTDNA,HSV2DNA,NGDNA,HBVDNA）各5例以及双蒸水代替模板进行检测均无目的基因扩增。2.四组PBMC中TRECs数量比较severe CHB组PBMC中TRECs数量为3.53±0.66 LgCopies/106PBMC,明显低于 mild CHB 组 4.57±0.52 LgCopies/106PBMC,p<0.001 和 HCs 组 4.82±0.75 LgCopies/106PBMC,p<0.001;Moderate CHB 组 PBMC 中 TRECs 数量为 4.08±0.58 LgCopies/106PBMC,较 Severe CHB 组高,较mild CHB组低;Mild CHB组PBMC中TRECs数量虽然低于HCs组两组间差异无统计学意义（p>0.05）。3.四组CD31+Treg/Treg百分比的比较severe CHB组外周血CD31+Treg/Treg 百分比为（12.25%±2.35%）,明显低于 mild CHB 组（16.35%±3.35%,p=0.002）和 HCs 组（17.75%±3.82%,p<0.001）;Moderate CHB 组外周血 CD31+Treg/Treg百分比为（14.38%±2,77%）,介于 Severe CHB 组与 mild CHB 组之间;Mild CHB组外周血CD31+Treg/Treg百分比虽然低于HCs组,但两组间差异无统计学意义（p=0.098）。4.四组CD3+、CD4+、CD8+淋巴细胞百分比的比较 外周血CD3+、CD4+、CD8+淋巴细胞百分比各组间略有不同,在severe CHB组中CD4+淋巴细胞百分比最低,CD8+淋巴细胞百分比最高,moderate CHB表现的次之;但CD3+、CD4+、CD8+淋巴细胞百分比在四组中无统计学差异p>0.05;CD4+/CD8+比值moderate CHB组和severe CHB组明显低于mild CHB组和HCs组并且存在统计学差异p<0.05,而在mild CHB组和HCs组中无统计学差异p>0.05。5.105份慢性乙型肝炎患者根据ALT值、HBVDNA含量、HBeAg阴阳分组在ALT<2ULN组和ALT≥2ULN组,两组间TRECs数量比较呈现ALT≥2ULN组的TRECs含量明显低于ALT<2ULN组,存在统计学差异p<0.05;CD31+Treg/Treg百分比同样在ALT≥2ULN组低于ALT<2ULN组,两组数据存在统计学差异p<0.05;HBVDNA<102IU/ml,102≤HBVDNA<105 IU/ml,HBVDNA>105 IU/ml三组,三组间TRECs数量和CD31+Treg/Treg百分比均无统计学差异p>0.05;HBeAg阳性组和HBeAg阴性组,两组间TRECs数量和CD31+Treg/Treg百分比均无统计学差异p>0.05。6.105份标本外周血CD31+Treg/Treg百分比与PBMC细胞中TRECs数量呈正相关（r=0.551,p=0.014）。研究结论:1.成功建立了 TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR技术检测外周血TRECs含量。2.CD31+Treg/Treg、TRECs含量在慢性乙型肝炎中度患者和重度患者中是减少的,表明慢性乙型肝炎中度和重度患者的胸腺新近输出功能降低。3.CD31+Treg/Treg、TRECs 含量与 ALT 活性有关,与 HBVDNA 含量、HBeAg阴阳无关。4.CD31+Treg/Treg与TRECs含量呈正相关,是评价胸腺新近输出功能的新指标。
王坤,韩俊永,陈金烟,刘慎敏,薛士杰,金静君[8]（2018）在《造血干细胞移植后免疫重建早期T细胞受体删除环的检测分析》文中进行了进一步梳理背景:目前对于造血干细胞移植后的免疫监测缺乏直接明确的检测指标,利用不断改良的实时定量荧光PCR技术监测T细胞受体删除环（T-cell receptor excision circle,TREC或signal joint T-cell receptor excision circle,sjTREC）拷贝数来反映胸腺新近功能,从而评估免疫重建水平,指导预后治疗。目的:检测造血干细胞移植患者免疫重建早期T细胞受体删除环水平,分析移植方式、年龄、疾病类型、性别等因素的影响。方法:采用Taq Man探针,实时定量荧光PCR技术检测29例健康正常人,19例造血干细胞移植前患者,6例造血干细胞移植后患者的外周血1 000个细胞中所含sjTREC拷贝数。结果与结论:（1）正常对照组1 000个细胞中所含sjTREC拷贝数为26.99±29.3,随年龄增加而降低,男女性别sjTREC水平无明显差异;患者组移植前sjTREC水平低于正常对照组且差异有显着性意义（P=0.006）;（2）6例患者移植后1个月时sj TREC水平上升,移植后6个月时sjTREC水平下降;（3）移植后6个月时2例HLA半相合亲缘移植与4例HLA全相合非亲缘移植患者sjTREC水平接近;（4）结果表明,移植前患者胸腺功能严重受损,在移植后1个月出现短暂上升后下降的趋势可能与胸腺应激性反应相关;亲缘与非亲缘移植、男性与女性、不同年龄患者等单因素分析未见明显差异,但移植后sjTREC水平上升反映了移植后胸腺新近输出功能的变化,体现了免疫重建受多种因素的影响。
王琛,张永乐,潘克女,吕铁锋[9]（2018）在《慢性乙型肝炎患者外周血TRECs与CD45+T淋巴细胞亚群检测的临床意义》文中研究表明目的探讨慢性乙型肝炎患者外周血中T细胞受体重排删除环（TRECs）含量以及CD4+CD45RA+、CD4+CD45RO+、CD8+CD45RA+、CD8+CD45RO+T淋巴细胞亚群表达的临床意义。方法流式细胞技术与实时荧光定量PCR技术分别检测32例轻度慢乙肝患者、42例中度慢乙肝患者、38例重度慢乙肝患者以及30例健康对照人群外周血中TRECs的含量以及CD4+CD45RA+、CD4+CD45RO+、CD8+CD45RA+、CD8+CD45RO+T淋巴细胞亚群表达。结果慢性乙型肝炎患者中轻、中、重组以及健康对照组间相比CD3+/CD4+/CD8+、CD4+CD45RA+、CD4+CD45RO+变化均无明显差异（P>0.05）;CD8+CD45RA+均有不同程度的下降,尤其在重度组中下降最为明显,具有统计学差异（P<0.05）,CD8+CD45RO+存在明显的升高,同样在重度组中升高最为显着具有统计学差异（P<0.05）;TRECs含量慢乙肝组较正常对照组明显降低（P<0.05）;在慢性乙型肝炎患者中轻、中、重慢乙肝组间TRECs含量也存在统计学差异（P<0.05）。结论 TRECS是胸腺近期输出功能指标,能够反映慢性乙型肝炎近期免疫功能,外周血TRECS与CD45+T淋巴细胞亚群联合检测较常规CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群更能全面了解慢性乙型肝炎的进展及预后。
王坤,金静君,杨婷,韩俊永,陈金烟,薛士杰,刘慎敏[10]（2017）在《荧光定量PCR检测T细胞受体删除环在亲缘与非亲缘异基因造血干细胞移植后免疫重建早期的应用》文中认为目的检测接受亲缘与非亲缘的异基因造血干细胞移植（allogeneic hemopoietic stem cell transplant,alloHSCT）的恶性血液病患者免疫重建早期T细胞受体删除环（signal joint T-cell receptor excision circle,sjTREC）的水平,分析供受者间亲缘关系对免疫重建早期的影响。方法采用TaqMan探针,Real-Time PCR技术,对6例（2例亲缘,4例非亲缘）allo-HSCT恶性血液病患者在移植前及移植后6个月的外周血sjTREC进行绝对定量检测。结果每1 000个细胞中各组sjTREC水平分别为:亲缘组移植前（17.05±22.28）拷贝,移植后（24.26±25.50）拷贝;非亲缘组移植前（6.74±12.85）拷贝,移植后（28.30±19.12）拷贝。结论两组患者移植后的sjTREC水平较移植前均有所上升,但无论移植前后两组之间的差异均不明显,提示在allo-HSCT患者移植后的免疫重建受诸多因素共同影响,供者是否具有亲缘关系在小样本检测中未发现明显差异。
二、T细胞受体删除环定量检测的意义及应用现状（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、T细胞受体删除环定量检测的意义及应用现状（论文提纲范文）
（1）4例重组激活基因1突变免疫缺陷患儿的临床及免疫学分析（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 局限 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述:移植后淋巴增殖性疾病的靶向药物治疗 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及学术活动 |
（2）WAS蛋白缺陷对记忆T细胞受体多样性和胸腺输出功能的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 WAS蛋白缺陷对记忆T细胞受体多样性的影响 |
| 前言 |
| 第一节: 高通量测序分析技术研究WASKO/WT小鼠模型中各亚群T细胞受体多样性 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 结论 |
| 第二节: UMI定量高通量测序分析技术研究WASKO/WT小鼠骨髓移植嵌合模型中记忆T细胞受体多样性 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 结论 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 WAS蛋白缺陷对T细胞胸腺输出的影响及机制研究 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 结论 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 攻读学位期间参加的学术活动 |
（3）外周血T细胞受体删除环（TRECs）定量测定在评估骨髓移植术后免疫重建中的应用概况及进展（论文提纲范文）
| 1 TRECs形成机理 |
| 2 TRECs代表的含义 |
| 3 TRECs的测定方法概述 |
| 4 TRECs在评估移植后免疫重建中的应用 |
| 4.1 骨髓移植后免疫重建的评价 |
| 4.2 TRECs作为判断移植后免疫重建的指标 |
| 4.3 TRECs作为移植后疗效评价指标 |
| 5 结语 |
（4）中国汉族人群血液AR-CpGs的筛选、验证及个体年龄推断研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 附：技术路线图 |
| 第一部分 年龄相关CpG位点的筛选 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 焦磷酸测序方法的建立与候选CpG位点的验证 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 多元线性回归模型的建立 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 法医学个体年龄推断的研究进展与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 A 攻读学位期间发表论文目录 |
| 附录 B 甲基化芯片检测用样本信息 |
| 附录 C 基因组DNA提取 |
| 附录 D DNA亚硫酸氢盐转化 |
| 附录 E 不同样本组间比较前20个DMPs |
（5）ISG15突变家系临床及免疫特征及CⅡTA突变致MHCⅡ类分子缺陷病的免疫学研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分 ISG15 突变家系临床及免疫特征 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 CⅡTA突变致MHCⅡ类分子缺陷病的免疫学研究 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 文献综述：去αβT/B细胞的造血干细胞移植治疗原发性免疫缺陷病. |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间的研究成果及发表的学术论文目录 |
（6）TaqMan-MGB探针实时荧光PCR法检测T细胞受体重排删除环评估慢性乙型肝炎患者胸腺近期输出功能（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 资料 |
| 1.1.1 研究对象 |
| 1.1.2 仪器与试剂 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 标本处理 |
| 1.2.2 引物设计 |
| 1.2.3 实时荧光定量PCR检测TRECs反应体系的配比及扩增条件 |
| 1.3 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 TaqMan-MGB双标记探针PCR定量方法性能评价 |
| 2.1.1 反应体系的特异性和准确性 |
| 2.1.2 灵敏度 |
| 2.1.3 重复性 |
| 2.1.4 标准曲线参数 |
| 2.2 健康对照者与慢性乙型肝炎中型患者TRECs含量的比较 |
| 3 讨论 |
（7）TRECs和CD31淋巴细胞计数评估慢性乙型肝炎患者胸腺新近输出功能的研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 中英文缩略词 |
| 第一部分 TaqMan-MGB探针实时荧光PCR法检测T细胞受体重排删除环方法的建立 |
| 1 研究背景 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 2.3 统计学处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 TaqMan-MGB双标记探针PCR定量方法性能评价 |
| 3.2 健康对照者与慢性乙型肝炎患者TRECs含量的比较 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 TRECs含量与CD31调节性T细胞检测在评价慢性乙型肝炎患者胸腺新近输出功能的临床应用价值 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 2.3 统计学处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 外周血CD3~+、CD4~+、CD8~+淋巴细胞比例各组间的比较 |
| 3.2 外周血CD4~+CD25~+CD31~+T淋巴细胞比率各组间的比较 |
| 3.3 外周血PBMC中TRECs含量在各组间的比较 |
| 3.4 105例CHB患者根据ALT值、HBVDNA含量、HBeAg阴阳分组 |
| 3.5 105份CHB标本外周血CD31~+ Treg/ Treg百分比与PBMC细胞中TRECs数量呈正相关(r=0.551,p=0.014)数据见图2.9 |
| 4 讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 |
（8）造血干细胞移植后免疫重建早期T细胞受体删除环的检测分析（论文提纲范文）
| 文章快速阅读: |
| 文题释义: |
| 0引言Introduction |
| 1 对象和方法Subjects and methods |
| 1.1 设计 |
| 1.2 时间及地点 |
| 1.3 对象 |
| 1.4 方法 |
| 1.4.1 外周血基因组DNA提取 |
| 1.4.2 造血干细胞移植患者植入证据检测 |
| 1.4.3 标准品制备 |
| 1.4.4 实时定量荧光PCR |
| 1.5 主要观察指标 |
| 1.6 统计学分析 |
| 2 结果Results |
| 2.1 造血干细胞移植病例植入存活状况 |
| 2.2 标准品制备 |
| 2.2.1 构建重组质粒p MD20T-sj TREC-RAG2及鉴定结果 |
| 2.2.2 标准品曲线 |
| 2.3 sj TREC水平的比较分析 |
| 2.3.1 正常健康人群sj TREC平均水平 |
| 2.3.2 移植前、移植后外周血中sj TREC平均水平比较 |
| 3 讨论Discussion |
（9）慢性乙型肝炎患者外周血TRECs与CD45+T淋巴细胞亚群检测的临床意义（论文提纲范文）
| 1 对象与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 仪器与试剂 |
| 1.3 方法 |
| 1.3.1 流式细胞仪检测淋巴细胞计数 |
| 1.3.2 实时荧光定量PCR检测TRECs |
| 1.4 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 淋巴细胞亚群在慢性乙型肝炎轻度、中度、重度及健康对照组间比较 |
| 2.2 TRECs含量在慢性乙型肝炎轻度、中度、重度及健康对照组间比较 |
| 3 讨论 |
（10）荧光定量PCR检测T细胞受体删除环在亲缘与非亲缘异基因造血干细胞移植后免疫重建早期的应用（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 一般资料: |
| 1.2 方法: |
| 1.2.1 样本收集及主要仪器: |
| 1.2.2 标准品的制备: |
| 1.2.3 构建质粒: |
| 1.2.4 Real-Time PCR检测sjTREC拷贝数: |
| 2 结果 |
| 2.1 标准品质粒pMD20T-sjTREC-RAG2的构建及鉴定: |
| 2.2 标准品曲线: |
| 2.3 Real-Time PCR绝对定量扩增结果: |
| 3 讨论 |
四、T细胞受体删除环定量检测的意义及应用现状（论文参考文献）
- [1]4例重组激活基因1突变免疫缺陷患儿的临床及免疫学分析[D]. 魏于斯. 重庆医科大学, 2020(02)
- [2]WAS蛋白缺陷对记忆T细胞受体多样性和胸腺输出功能的影响及机制研究[D]. 李文言. 重庆医科大学, 2020(01)
- [3]外周血T细胞受体删除环（TRECs）定量测定在评估骨髓移植术后免疫重建中的应用概况及进展[J]. 武小亮,韩娟,王靖,卢林纲. 现代检验医学杂志, 2019(04)
- [4]中国汉族人群血液AR-CpGs的筛选、验证及个体年龄推断研究[D]. 肖超. 华中科技大学, 2019(01)
- [5]ISG15突变家系临床及免疫特征及CⅡTA突变致MHCⅡ类分子缺陷病的免疫学研究[D]. 徐祺玲. 重庆医科大学, 2019(01)
- [6]TaqMan-MGB探针实时荧光PCR法检测T细胞受体重排删除环评估慢性乙型肝炎患者胸腺近期输出功能[J]. 潘克女,张永乐,张钧,左中宝,俞哲,刘寿荣. 中国免疫学杂志, 2019(07)
- [7]TRECs和CD31淋巴细胞计数评估慢性乙型肝炎患者胸腺新近输出功能的研究[D]. 潘克女. 浙江大学, 2019(03)
- [8]造血干细胞移植后免疫重建早期T细胞受体删除环的检测分析[J]. 王坤,韩俊永,陈金烟,刘慎敏,薛士杰,金静君. 中国组织工程研究, 2018(29)
- [9]慢性乙型肝炎患者外周血TRECs与CD45+T淋巴细胞亚群检测的临床意义[J]. 王琛,张永乐,潘克女,吕铁锋. 中国现代医生, 2018(23)
- [10]荧光定量PCR检测T细胞受体删除环在亲缘与非亲缘异基因造血干细胞移植后免疫重建早期的应用[J]. 王坤,金静君,杨婷,韩俊永,陈金烟,薛士杰,刘慎敏. 福建医药杂志, 2017(05)