一、银杏叶提取物防治肝纤维化的实验研究（论文文献综述）
阮亮[1]（2020）在《银杏叶提取物对博来霉素致小鼠皮肤纤维化的保护作用及机制》文中认为研究背景与目的系统性硬化症（Systemic sclerosis,SSc）是一种慢性自身免疫性疾病,以局限性或弥漫性皮肤增厚和纤维化为特征,可影响血管和心、肺、肾等内脏器官。SSc最常累及皮肤,皮肤纤维化是其典型的临床表现,除影响患者的美观、肢体结构和功能等,疾病的持续进展还会引起心理疾病,严重影响患者的生活质量。皮肤纤维化的病因和发病机制尚不明确,目前认为是由于大量间质细胞（成纤维细胞、肌成纤维细胞）积聚和增殖导致胶原蛋白为主的细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）大量生成和沉积所造成的,研究显示,上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）是这些间质细胞的重要来源。在皮肤组织纤维化和上皮间质转化过程中,大量细胞因子参与其中,TGF-β1是调节细胞生长、分化、ECM生成和积聚的关键分子,诱导纤维化和EMT的发生,促使皮肤组织成纤维细胞向肌成纤维细胞转化。Smad通路是TGF-β1发挥生物学作用最重要的信号通路。大量研究表明,TGF-β1/Smad信号通路的异常活化是皮肤组织纤维化和EMT发生的关键。因此,抑制TGF-β1/Smad信号通路的异常活化进而阻断EMT,可为皮肤纤维化的治疗提供新的途径。银杏叶提取物（ginkgo bioba leaf extract,Gb E）是从银杏叶片中提取的一种化合物,其主要活性成分为银杏黄酮和萜烯内酯。本课题组多年的研究发现,银杏叶提取物具有抗炎、抗氧化、免疫调节等活性。近年来,在动物模型和临床研究中Gb E均显示出抗纤维化特性,逐步将其引入了抗纤维化领域。本课题旨在通过构建博来霉素（Bleomycin,BLM）诱导的小鼠皮肤纤维化模型,研究Gb E对皮肤纤维化的保护作用,探讨银杏叶提取物抗纤维化特性与氧化应激、上皮间质转化的关系以及银杏叶提取物对TGF-β1/Smad信号通路的调控作用。方法将100只雌性BALB/c小鼠随机分为五组:分别是正常对照组、模型组、Gb E低剂量保护组（50mg/kg/d）、Gb E中剂量保护组（100mg/kg/d）和Gb E高剂量保护组（200mg/kg/d）,每组20只。背部皮下注射BLM（500μg/m L）建立硬皮病小鼠皮肤纤维化模型（每天1次,每次100μL,共计28天）,Gb E各剂量组操作同上,正常对照组小鼠皮下注射同体积PBS溶液;注射（BLM/PBS）2小时后,Gb E各剂量组按照相应浓度给予Gb E灌胃,正常对照组和模型组给予等体积蒸馏水灌胃（每天1次,每次200μL,共计28天）。（1）观察各组小鼠的一般情况,包括精神状态、活动、毛发生长、饮食、体重变化等;HE染色和Masson染色观察各组小鼠注射部位皮肤组织病理学变化,测定真皮厚度,计算胶原容积分数（Collagen volume fraction,CVF）,检测皮肤组织羟脯氨酸（Hydroxyproline,HYP）含量,实时荧光定量聚合酶链式反应（Quantitative Real Time-Polymerase Chain Reaction,qRT-PCR）法和免疫印迹法（Western blotting,WB）检测皮肤组织Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的mRNA水平和蛋白表达量;（2）测定各组小鼠皮肤组织丙二醛（Malondialdehyde,MDA）含量、8-异前列素F2α（8-iso-prostaglandin F2α,8-iso-PGF2α）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidise,GPx）活性;（3）应用qRT-PCR法检测各组小鼠皮肤组织E-钙黏素（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的mRNA水平;应用免疫组织化学方法（Immunohistochemistry,IHC）观察各组小鼠皮肤组织E-钙黏素（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达情况;WB法检测各组小鼠皮肤组织上述蛋白的表达量;（4）应用qRT-PCR法检测正常对照组、模型组、银杏叶提取物高剂量保护组小鼠皮肤组织TGF-β1、Smad7、Smad3的mRNA水平,WB法检测上述各组小鼠皮肤组织TGF-β1、Smad7、Smad3及p-Smad3的蛋白表达量。结果（1）银杏叶提取物对博来霉素致小鼠皮肤纤维化的影响:正常对照组小鼠精神状态、食欲、活动以及毛发生长情况等均正常,体重增长良好。模型组小鼠表现出活动减少、食欲减退,注射部位皮肤弹性降低,逐渐增厚变硬,毛发生长减少或无法再生,与对照组相比,体重下降明显,差异有统计学意义（P<0.05）,银杏叶提取物各处理组小鼠活动、食欲、皮肤硬度等均有不同程度的改善。与模型组相比,中剂量和高剂量保护组小鼠体重明显增加,差异有统计学意义（P<0.05）。皮肤组织病理学检查:HE染色和Masson染色结果显示,对照组小鼠注射部位皮肤组织结构完整清晰,无明显炎性细胞浸润和胶原沉积;模型组小鼠皮肤组织结构紊乱,真皮层厚度明显增加（P<0.05）,胶原纤维明显增粗、膨大,数量明显增多,真皮及真皮下层的血管壁增厚,部分血管管腔变窄甚至闭塞,周围可见大量炎性细胞浸润,皮下附属器减少。与硬皮病模型组相比,银杏叶提取物低剂量保护组小鼠皮肤组织病理学变化无明显缓解,而中、高剂量组小鼠皮肤病理变化显着改善。具体变现为:小鼠皮肤真皮层变薄（P<0.05）,炎性细胞浸润显着减少,胶原沉积明显减少,胶原容积分数显着下降（P<0.05）。皮肤组织HYP含量检测:与对照组比较,模型组小鼠皮肤组织羟脯氨酸含量明显增加（P<0.05）;应用银杏叶提取物后,皮肤组织HYP含量出现不同程度下降,其中,中、高剂量组小鼠皮肤组织羟脯氨酸含量明显减少（P<0.05）。皮肤组织Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA、蛋白表达情况:模型组小鼠皮肤组织COLⅠ、COLⅢmRNA和蛋白表达水平相比较于对照组明显升高（P<0.05）;银杏叶提取物能够抑制COLⅠ、COLⅢmRNA和蛋白的表达,其中,中、高剂量组抑制作用明显（P<0.05）。（2）银杏叶提取物对皮肤纤维化小鼠氧化应激的影响:皮肤组织MDA和8-iso-PGF2α含量检测:与对照组相比,模型组小鼠皮肤组织MDA和8-iso-PGF2α含量比对照组明显升高（P<0.05）;与模型组相比,银杏叶提取物各剂量组小鼠皮肤组织MDA和8-iso-PGF2α含量均有所下降,其中,中、高剂量组下降明显（P<0.05）。皮肤组织GPx活性检测:与对照组相比,模型组小鼠皮肤组织GPx活性比对照组明显降低（P<0.05）;与模型组相比,银杏叶提取物各剂量组小鼠皮肤组织GPx活性均有所增加,其中,中、高剂量组明显升高（P<0.05）。（3）银杏叶提取物对皮肤纤维化小鼠上皮间质转化的影响:免疫组织化学染色和蛋白质免疫印迹结果显示,与正常对照组相比,模型组小鼠皮肤组织E-cadherin的蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,Vimentin和α-SMA的表达明显上升（P<0.05）;银杏叶提取物中、高剂量组比模型组E-cadherin的表达明显升高（P<0.05）,Vimentin和α-SMA的表达明显下降（P<0.05）。qRT-PCR结果显示,与正常对照组相比,模型组小鼠皮肤组织E-cadherin的mRNA水平明显降低（P<0.05）,Vimentin和α-SMA的mRNA水平明显升高（P<0.05）;银杏叶提取物中、高剂量组比模型组E-cadherin的mRNA水平明显升高（P<0.05）,Vimentin和α-SMA的mRNA水平明显下降（P<0.05）。（4）银杏叶提取物对皮肤纤维化小鼠TGF-β1/Smad信号通路的影响与正常对照组相比,模型组小鼠注射部位皮肤组织TGF-β1、Smad3的mRNA水平明显升高（P<0.05）,Smad7 mRNA水平明显降低（P<0.05）;与模型组相比,银杏叶提取物保护组TGF-β1的mRNA水平明显降低（P<0.05）,Smad7的mRNA水平明显升高（P<0.05）,Smad3 mRNA水平无明显改变（P>0.05）。与正常对照组相比,模型组小鼠注射部位皮肤组织TGF-β1、Smad3及p-Smad3蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,Smad7蛋白表达水平明显降低（P<0.05）;与模型组相比,银杏叶提取物保护组TGF-β1和p-Smad3蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,Smad7蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,Smad3蛋白水平无明显改变（P>0.05）。结论（1）通过局部皮下注射博来霉素成功复制小鼠皮肤纤维化模型,该模型与临床SSc患者的皮肤组织病理学改变极为相似,表现为真皮厚度明显增加,胶原纤维增多、增粗、均质化,成纤维细胞增多,Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达水平明显升高。同时,在博来霉素诱导的小鼠皮肤纤维化模型中,存在明显的氧化应激反应和上皮间质转化（EMT）现象,并伴有TGF-β1/Smad信号通路的异常活化。（2）银杏叶提取物（Gb E）通过上调GPx活性,提高机体的抗氧化能力,同时降低MDA和8-iso-PGF2α,抑制脂质过氧化作用,纠正了氧化/抗氧化的失衡状态,表明Gb E能够通过减轻体内的氧化应激状态改善皮肤组织纤维化。（3）银杏叶提取物通过下调TGF-β1的表达和降低Smad3的磷酸化并上调Smad7的表达,抑制了TGF-β1/Smad信号通路,有效阻断了TGF-β1/Smad信号通路介导的EMT现象,上皮间质转化逆转之后,皮肤组织中肌成纤维细胞数量减少,胶原蛋白为主的细胞外基质合成随之减少,继而改善皮肤组织纤维化。
邵作乔[2]（2019）在《银杏叶提取物对UUO大鼠肾组织TGF-β1、BMP-7表达的影响》文中进行了进一步梳理目的:通过建立单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction,UUO）大鼠肾间质纤维化动物模型,观察银杏叶提取物（Ginkgo biloba leaf extract,GBE）对肾间质纤维化大鼠肾组织中转化生长因子β1（Transforming growth factor-β1,TGF-β1）、骨形态发生蛋白-7（Bone morphogenetic protein 7,BMP-7）表达的影响,探讨在肾纤维化过程中银杏叶提取物对其干预作用及可能的作用机制,从而阐明银杏叶提取物肾保护作用的机制。方法:筛选（体重约200±10g,6周龄）的72只雄性SPF级Wistar大鼠,随机分为3组,每组24只,A组为正常对照组（对照组,Sham组）,M组为UUO模型组（模型组,UUO组）,R组为银杏叶提取物治疗组（治疗组,GBE组）。分别于单侧输尿管梗阻术后第3天、7天、14天随机分批取出梗阻侧肾组织,分别为N3,N7,N14组,每组各8只。M组、R组大鼠均以10%水合氯醛腹腔注射麻醉,常规消毒,于左侧背部脊柱旁1.5cm、肋下1cm行纵形切口,逐层切开皮肤、皮下组织、肌肉、壁腹膜和脏腹膜等各层,沿左肾下极寻找左侧输尿管,4#线双道结扎左侧输尿管中上1/3上下,然后从中剪断。A组大鼠只剥离输尿管,不剪断输尿管,余过程同前。在第3、7、14天末分批处死大鼠,将肾组织取出,通过HE、Masson染色观察病理改变,免疫组化染色观察大鼠肾组织中BMP-7、TGF-β1的表达情况,应用图像分析系统软件Image-Pro Plus6.0进行半定量分析。治疗组以100mg/kg/d银杏叶提取物,对照组及模型组以等容的0.9%生理盐水,按照1次/天频率,于制模手术前1天开始给药灌胃。实验期间各组大鼠自由进水,标准饮食,在恒温恒湿的环境生长。结果:1、HE染色结果:UUO组术后第3天时,大鼠肾组织开始出现肾小管损伤,随着梗阻时间的延长,肾小管进行性扩张,炎性细胞浸润逐渐增多,部分小管萎缩、破坏增多,严重者甚至萎缩,肾小管间质损伤评分（TIS）逐渐增高,差别有统计学意义（P<0.05）。Sham组肾组织无明显病理性改变,与Sham组对应的时间点相比较,UUO组TIS增高,差别有统计学意义（P<0.05）;与UUO组对应的时间点相比较,GBE组肾小管损伤减轻,TIS降低,差别有统计学意义（P<0.05）。2、Masson染色结果:UUO组术后第3天时,间质纤维开始增多,随着梗阻时间的延长,肾间质胶原纤维沉积面积逐渐增大,出现弥漫增生的纤维结缔组织,肾间质纤维化面积比（RIF指数）逐渐升高,差别有统计学意义（P<0.05）。Sham组间质胶原纤维蓝绿染面积较小,无肾间质纤维化表现,与Sham组对应的时间点相比较,UUO组肾间质纤维化指数增高,差别有统计学意义（P<0.05）。与UUO组对应的时间点相比较,GBE组间质纤维化程度均有一定程度改善,RIF指数降低,差别有统计学意义（P<0.05）。3、免疫组化结果:（1）免疫组化检测显示TGF-β1蛋白表达部位主要位于肾小管上皮细胞,随着梗阻时间的延长,UUO组大鼠肾组织TGF-β1蛋白的表达逐渐增多,各时间点差别有统计学意义（P<0.05）;与Sham组对应的时间点相比较,UUO组TGF-β1蛋白的表达逐渐增多,差别有统计学意义（P<0.05）;与UUO组对应的时间点相比较,GBE组TGF-β1蛋白的表达有所下降,差别有统计学意义（P<0.05）;（2）免疫组化检测显示BMP-7蛋白主要表达在肾小管上皮细胞及肾间质,随着梗阻时间的延长,UUO组BMP-7蛋白的表达逐渐减少,各时间点差别有统计学意义（P<0.05）;与Sham组对应的时间点相比较,UUO组BMP-7蛋白的表达减少,差别有统计学意义（P<0.05）;与UUO组对应的时间点相比较,GBE组BMP-7蛋白的表达增加,差别有统计学意义（P<0.05）。结论:1.在UUO大鼠肾间质纤维化中,TGF-β1蛋白表达升高,提示TGF-β1参与肾间质纤维化过程。2.应用银杏叶提取物后,TGF-β1蛋白表达下降,BMP-7蛋白表达增加,肾纤维化程度减轻,提示银杏叶提取物具有肾保护作用。
陈姗[3]（2019）在《荔枝核总黄酮对大鼠肝星状细胞TGF-β1/Smads通路及PPAR-r/c-Ski通路的影响》文中研究表明目的:荔枝核总黄酮对大鼠肝星状细胞增殖抑制作用,并从TGF-β1/Smad通路及PPAR-r/c-Ski通路探讨荔枝核总黄酮抗肝纤维化的可能作用机制。方法:体外培养大鼠肝星状细胞,分为空白对照组、TFL浓度20ug/ml组、40ug/ml组、80ug/ml组、160ug/ml组、320ug/ml组,分别干预48h后,运用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况;再设置为空白组、秋水仙碱对照组、TFL低剂量组、TFL中剂量组、TFL高剂量组ELISA法检测各组细胞上清液中PPAR-r、c-Ski的含量;qPCR法检测各组TGF-β1、Smad3/4 mRNA的表达。结果:CCK-8结果显示,随着TFL作用浓度的增加,药物对细胞的增殖的抑制率增高;ELISA结果显示,与空白组比较,各组细胞上清液中PPAR-r、c-Ski的含量均显着升高（P<0.01）,并在TFL高剂量组中含量达到最高（P<0.01）;与秋水仙碱对照组比较,TFL高剂量组中的细胞上清液PPAR-r、c-Ski含量均高于秋水仙碱对照组（P<0.01）,TFL中剂量组中的细胞上清液PPAR-r含量相对高于秋水仙碱对照组（P<0.05）,TFL中剂量组中的细胞上清液c-Ski含量高于秋水仙碱对照组（P<0.01）,TFL低剂量组中的细胞上清液PPAR-r含量低于秋水仙碱对照组（P<0.01）,TFL低剂量组中的细胞上清液c-Ski含量相对高于秋水仙碱对照组（P<0.05）;qPCR结果显示,与空白组比较,各组细胞中TGF-β1、Smad3/4 mRNA的表达量均显着降低（P<0.01）,并在TFL高剂量组中达到最低（P<0.01）;与秋水仙碱对照组比较,TFL高剂量组中的细胞中TGF-β1、Smad3/4 mRNA的表达量均明显低于秋水仙碱对照组（P<0.01）,TFL中剂量组中的细胞中Smad3 mRNA的表达量明显低于秋水仙碱对照组（P<0.01）,TFL中剂量组中的细胞中TGF-β1、Smad4mRNA的表达量相对低于秋水仙碱对照组（P<0.05）,TFL低剂量组中的细胞中TGF-β1mRNA的表达量相对低于秋水仙碱对照组（P<0.05）,TFL低剂量组中的细胞中Smad3/4 mRNA的表达量相对高于秋水仙碱对照组（P<0.05）。结论:荔枝核总黄酮能够抑制大鼠肝星状细胞增殖,降低细胞外基质分泌,该机制可能与增加大鼠肝星状细胞上清液中PPAR-r、c-Ski的含量,抑制TGF-β1、Smad3/4 mRNA表达有关。
邵作乔,刘洁薇,聂磊,李晶,王丽敏[4]（2018）在《银杏叶提取物抗纤维化机制研究述评》文中指出银杏叶作为活血化瘀的传统中药,可以通过不同途径、不同分子水平发挥抗纤维化作用,但其抗纤维化机制仍需深入研究。目前尚有如下问题需要解决:（1）虽然已有相当多的实验证实银杏叶提取物从各种途径发挥抗纤维化作用,但相关临床试验较少,临床疗效有待证实,尚需大样本临床试验证实;（2）银杏叶提取物主要成分为黄酮苷和萜烯内酯,各成分的具体抗纤维化机制不明,在不同脏器抗纤维化中发挥作用是否存在差异有待进一步研究;（3）银杏叶提取物水溶性较差,口服生物利用度较低,不同成分之间细胞通透性存在差异,需要研究如何提高银杏叶提取物生物利用度;（4）相关研究发现,银杏叶提取物抗纤维化作用呈剂量依赖性,剂量过大出现不良反应,严重者可出现脏器损害,需进一步探究其合理临床剂量,避免出现毒性反应;（5）银杏叶提取物有效成分较复杂,具有多种生理活性,临床报道已经有皮肤、消化、神经、血液等系统不良反应,具体机制未明,应警惕临床不良反应。
李泽鑫[5]（2018）在《发酵中药对斜带石斑鱼肝脏健康的影响》文中研究指明1.发酵中药对斜带石斑鱼肝细胞氧化损伤的保护作用实验以过氧化氢（H2O2）诱导斜带石斑鱼离体培养的肝细胞,建立石斑鱼H2O2氧化损伤模型,探究银杏叶、甘草等10种单方发酵产物对斜带石斑鱼离体肝细胞的保护作用。用发酵中药处理斜带石斑鱼肝细胞H2O2氧化损伤模型8 h后测定细胞活力（CCK-8）、肝细胞抗氧化指标（T-AOC、GSH-PX、MDA）以及培养液中胞内酶（AST、ALT、LDH）活性。结果显示,细胞活力在H2O2的作用下显着下降（P<0.05）,肝细胞受损后培养液中的AST、ALT和LDH含量也随之升高（P<0.05）,肝细胞的抗氧化指标（T-AOC、GSH-PX）在H2O2作用下显着降低（P<0.05）;经过发酵中药和H2O2共同处理后,发酵银杏叶和发酵甘草的AST和ALT都显着低于其他各组（P<0.05）,在发酵银杏叶和发酵甘草的作用下肝细胞的T-AOC、GSH-PX与其他各组相比显着升高（P<0.05）,其MDA的含量显着降低（P<0.05）。综合上述结果,表明与其它发酵中药相比,发酵银杏叶与发酵甘草对H2O2诱导的石斑鱼肝细胞氧化损伤有着较强的保护作用。2.饲料添加发酵中药对石斑鱼生长性能、肝脏健康的影响实验以添加0.25%、0.5%发酵银杏叶和0.25%、0.5%发酵甘草的饲料投喂斜带石斑鱼幼鱼,通过测定斜带石斑鱼生长性能相关指标:WGR、SGR、HIS、SR;石斑鱼血浆生化指标:ALT、AST、AKP、T-CHO、TP;石斑鱼肝脏抗氧化的相关指标:SOD、GSH-PX、CAT、MDA;以及肝脏中抗氧化酶基因的表达量:SOD mRNA、GSH-PX mRNA、CAT mRNA,探究发酵中药对石斑鱼生长性能、肝脏健康的影响。结果发现,饲料中添加发酵银杏叶和发酵甘草对斜带石斑鱼的生长性能均没有显着影响（P>0.05）。添加0.5%发酵银杏叶和0.25%、0.5%发酵甘草能显着降低石斑鱼血浆中ALT和AST的含量（P<0.05）;添加发酵银杏叶和发酵甘草都能显着提高斜带石斑鱼肝脏抗氧化酶的活性（SOD、GSH-PX、CAT）,显着降低肝脏中MDA的含量（P<0.05）,其中以添加0.5%发酵银杏叶的一组效果最为显着。添加0.25、0.5%的发酵银杏叶和0.5%的发酵甘草三组能显着上调石斑鱼肝脏中SOD、CAT、GSH-PX基因的表达量（P<0.05）,其中以添加0.5%的发酵银杏叶效果最佳。结果表明,饲料中添加发酵银杏叶和发酵甘草各组都能提高石斑鱼肝脏的抗氧化能力,其中添加0.5%的发酵银杏叶对肝细胞的保护效果较好。3.发酵中药对急性亚硝酸盐胁迫下石斑鱼血浆生化指标、肝脏抗氧化的影响。实验以添加发酵银杏叶和发酵甘草的饲料投喂斜带石斑鱼幼鱼,探究发酵中药对急性亚硝酸盐胁迫下石斑鱼血浆生化指标、肝脏抗氧化的影响。亚硝酸盐胁迫后,饲料中添加0.25%、0.5%的发酵银杏叶和0.25%的发酵甘草三组的存活率显着高于对照组（P<0.05）。在添加的各类药物组中,亚硝酸盐胁迫后,饲料中添加0.5%的发酵银杏叶能显着降低血浆中的AST的含量（P<0.05）,添加0.5%的发酵银杏叶和0.25%、0.5%发酵甘草能显着降低血浆中的ALT含量（P<0.05）,添加0.25%、0.5%的发酵银杏叶和0.5%的发酵甘草能显着降低血浆中的HSP70含量（P<0.05）,其中添加0.5%发酵银杏叶达到各组中最低。亚硝酸盐胁迫后,饲料中添加发酵银杏叶和发酵甘草都是显着提高肝脏的SOD、GSH-PX的活性,其中添加0.5%的发酵银杏叶组其胁迫后肝脏中的SOD的活性最高（P<0.05）,添加0.5%发酵银杏叶和0.25%、0.5%发酵甘草对石斑鱼肝脏的GSH-PX、T-AOC有显着提高的效果（P<0.05）,添加发酵银杏叶和发酵甘草都能减少石斑鱼在胁迫环境下肝脏中MDA的含量（P<0.05）。结果表明,添加0.5%的发酵银杏叶有助于石斑鱼抗亚硝酸盐胁迫,提高石斑鱼胁迫环境下肝脏的抗氧化能力。综上所述,在10种中药发酵制剂中,发酵银杏叶和发酵甘草能显着提高肝细胞的存活率、能较好的对石斑鱼肝细胞的氧化损伤模型起到保护作用;饲料中添加发酵银杏叶和发酵甘草各组中,添加0.5%的发酵银杏叶其对肝脏的保护作用最好;在亚硝酸盐胁迫下,添加0.5%的发酵银杏叶对石斑鱼的存活率、肝脏抗氧化能力的提升最佳。
王媛媛[6]（2016）在《银杏叶提取物抗四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化的分子机制研究》文中研究指明目的:肝纤维化是机体对各种慢性肝损伤所进行的修复反应,具有可逆性。若慢性肝损伤持续存在和发展,肝纤维化则可恶化为不可逆的肝硬化。银杏叶提取物（GBE）是从干燥的银杏叶中提取出来的物质,具有抗氧化、清除自由基和抗血小板凝聚等多种药理学作用。近几年来,有研究发现GBE在抗肝纤维化方面也具有很好的活性。本课题将通过动物实验进一步明确GBE对大鼠肝纤维化的抑制作用并探讨其发挥抗肝纤维化作用的分子机制。方法:将48只健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组（对照组）、灌胃建模组（模型组）、GBE高剂量给药组（高剂量组）和GBE低剂量给药组（低剂量组）,每组12只。除了对照组外,其余各组大鼠通过每周两次50%CC14/花生油溶液（1mL·kg-1）灌胃,诱导建立肝纤维化模型。在建模的同时,高剂量组按体质量每天一次腹腔注射GBE 30mg·kg-1低剂量组按体质量每天一次腹腔注射GBE 15 mg·kg-1。8周后,采用全自动生化分析仪检测大鼠肝功能指标总胆红素（TBIL）、天冬氨酸转氨酶（AST）及丙氨酸转氨酶（ALT）和化学发光法检测肝纤维化指标透明质酸（HA）、IV型胶原蛋白（IV-C）、层黏连蛋白（LN）及III型前胶原肽（PIIINP）。同时观察大鼠肝脏形态,采集肝组织样品。HE染色和Masson染色对肝组织作病理学检查;Western blot实验技术检测肝组织中核蛋白（NF-κB）、质蛋白（NF-κB 和 IκBα）以及总蛋白（p38MAPK、p-p38MAPK、Bcl-2、Bax和Caspase-3）的表达水平;免疫组化平行实验考察GBE对大鼠肝组织中p38MAPK、NF-κB、Bcl-2 和 Bax 蛋白表达的影响;半定量 RT-PCR 和 Real-time PCR 检测 HSCs 激活因子（Colla1、Colla2、MMP-1、TIMP-1、α-SMA 和 Desmin）和炎症相关因子（Cox-2、IL-1β、IL-6、TNF-α 和 TGF-β）,考察 GBE 对 HSCs和炎症的影响。结果:1.50%CC14/花生油溶液（1mL·kg-1）灌胃8周后,与对照组相比,模型组大鼠的体重明显降低（P<0.05）,肝重明显增加（P<0.05）。与模型组相比,低剂量组大鼠的体重明显增加（P<0.05）,肝重无明显差异（P>0.05）,高剂量组大鼠的体重明显增加（P<0.05）,肝重明显降低（P<0.05）。与低剂量组相比,高剂量组大鼠体重明显增加（P<0.05）,肝重明显降低（P<0.05）。高剂量组大鼠肝重与对照组无明显差异（P>0.05）。2.各组大鼠肝脏指数（肝重/体重）计算结果显示,与对照组相比,模型组肝脏指数明显升高（P<0.05）。与模型组相比,低剂量组和高剂量组肝脏指数均明显降低（P<0.05）。与低剂量组相比,高剂量组肝脏指数明显降低（P<0.05）。高剂量组肝脏指数明显高于对照组（P<0.05）。3.肝功能指标（TBIL/AST/ALT）检测结果显示,与对照组相比,模型组肝功能明指标显增加（P<0.05）。与模型组相比,GBE给药（高剂量组和低剂量组）能明显降低肝功能指标（P<0.05）。与低剂量组相比,高剂量组肝功能指标明显降低（P<0.05）。4.肝纤维化指标（HA/IV-C/LN/PⅢNP）检测结果显示,与对照组相比,模型组肝纤维化指标明显增加（P<0.05）。与模型组相比,GBE给药（高剂量组和低剂量组）能明显降低肝纤维化指标（P<0.05）。与低剂量组相比,高剂量组高剂量组肝纤维化指标明显降低（P<0.05）。5.对大鼠肝组织作病理学检查显示,模型组较其它各组胶原沉积明显增加,肝纤维化程度明显加深（P<0.05）。GBE给药（高剂量组和低剂量组）后,胶原沉积明显减少,肝纤维化程度明显改善,并且随着GBE剂量增加,肝纤维化程度也明显改善（P<0.05）,但仍然没有恢复到对照组水平。6.Western blot实验技术检测结果显示,GBE给药能够有效地降低p38MAPK和p-p38MAPK的蛋白水平（P<0.05）,表明GBE能够抑制肝纤维化大鼠p38MAPK信号途径。GBE给药能够有效地降低核内蛋白（NF-κB）和增加胞质蛋白（NF-κB、IκBα）水平（P<0.05）,表明GBE能够调节肝纤维化大鼠NF-κB/IκBα信号途径。GBE给药能够有效地增加Bcl-2蛋白水平（P<0.05）,同时降低Bax和Caspase-3蛋白水平（P<0.05）,表明GBE能够调节肝纤维化大鼠Bcl-2/Bax信号途径。7.免疫组化平行实验结果显示,GBE给药能够有效地降低p38MAPK、Bax和NF-κB蛋白水平（P<0.05）,同时增加Bcl-2蛋白水平（P<0.05）,这与Western blot结果一致,表明GBE能够调节肝纤维化大鼠p38MAPK信号途径、NF-κB/IκBα信号途径和Bcl-2/Bax信号途径。8.HSCs 激活标志因子（Colla1、Colla2、MMP-1、TIMP-1、α-SMA 和 Desmin）RNA水平检测结果显示,GBE给药能够有效地降低肝纤维化大鼠HSCs激活因子RNA水平（P<0.05）,表明GBE能够抑制肝纤维化过程中HSCs的激活。9.炎症相关因子（Cox-2、IL-1β、IL-6、TNF-α和TGF-β）RNA水平检测结果显示,GBE给药能够有效地降低肝纤维化大鼠炎症相关因子RNA水平（P<0.05）,表明GBE能够抑制肝纤维化过程中的炎症反应。结论:GBE对CC14诱导的大鼠肝纤维化具有有效的抑制作用。其潜在的作用机制可能包括:GBE抑制p38MAPK信号途径,调节NF-κB/IκBα信号途径,从而有效地抑制炎症和肝星状细胞激活。同时,GBE也能够抑制Bcl-2/Bax信号途径,从而抑制肝细胞凋亡。
胡祖超,扶小华,戴东[7]（2015）在《抗氧化剂治疗肝纤维化的研究进展》文中研究指明肝纤维化是肝内弥漫性纤维组织沉积,是多种慢性肝损伤的共同后果,持续发展则成为肝硬化甚至肝癌。肝星状细胞（HSC）的活化使细胞外基质（ECM）的产生与降解不平衡,是导致肝纤维化发生发展的重要环节。氧化应激反应与肝脏的纤维化密切相关,作为一种重要的机制参与到HSC的活化和ECM的沉积,因此,抗氧化剂作为一种重要的治疗肝纤维化药物成为研究热点。笔者就近几年抗氧化剂治疗肝纤维化的研究进展进行综述。
贺琴,李敬会,谭华炳[8]（2013）在《银杏叶提取物防治肝脏损害的实验研究进展》文中研究表明随着疫苗的使用,生活方式的改变,导致肝脏损害原因多样化,这为多靶点、多机制防治疾病的中药提供了空间。在防治肝脏损害方面,中医药显示了较大的优势。中药（欧美国家称为植物药）银杏叶及其银杏叶提取物（EGB）得到国内外广泛研究,现将其防治肝脏损害的实验研究进展综述如下。1药理研究银杏叶为银杏科植物银杏的叶。银杏叶性味甘苦涩平,有益心敛肺、化湿止泻等功效。《中药志》记载它能"敛肺气,平喘咳,止带浊"。EGB主要药用成分为黄酮（FGb）、萜类内酯、聚异戊烯醇类。黄酮类又分为黄酮、双黄酮和儿茶素等3类化
苏青[9]（2013）在《银杏叶提取物对糖尿病大鼠肾脏tTG的影响及有效成分体外筛选》文中研究说明近年来一些研究显示银杏叶提取物（ginkgo bioba extract，GBE）可改善糖尿病肾脏功能和结构变化，但机制还不是很清楚。组织型转谷氨酰胺酶（tissue transglutaminases，tTG）可催化蛋白质谷氨酰胺残基或聚胺与赖氨酸残基之间的转谷氨酰胺反应，使蛋白质交联，从而抵抗基质降解酶的水解作用，引起细胞外基质积聚，而糖尿病肾病（Diabeticnephropathy，DN）基本病变是细胞外基质积聚。糖尿病病人及动物模型肾小球中tTG表达和活性显着增加，提示tTG参与其细胞外基质积聚的过程。本研究目的即探讨银杏叶提取物的肾脏保护作用是否与tTG有关及其中的机制，并分别从细胞增殖和ECM积聚的角度对GBE的不同成分进行筛选。实验一（第2章）银杏叶提取物对糖尿病大鼠肾脏tTG表达的影响链脲佐菌素（Streptozotocin，STZ）（50mg/kg）复制糖尿病大鼠模型，部分给予GBE100mg/kg，正常大鼠做为空白对照，12w后观察GBE对糖尿病大鼠的干预作用。结果显示与糖尿病组比较，给予GBE的大鼠尿蛋白降低（P<0.05），PAS染色阳性物质（主要为细胞外基质成分）减少，tTG的表达明显降低（P<0.01）。提示GBE的肾脏保护作用可能与下调tTG有关。实验二（第3章）银杏叶提取物对高糖诱导的大鼠系膜细胞tTG过表达的影响及TGF-β、CTGF在其中的作用机制体外培养大鼠肾小球系膜细胞HBZY-1，通过ELISA检测高糖和不同浓度GBE作用下HBZY-1细胞组织型转谷酰胺酶（tissue transglutaminases，tTG）、转化生长因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）、结缔组织生长因子（connective tissue growth-factor，CTGF）、胶原Ⅳ（collagen，ColⅣ）、纤连蛋白（fibronectin，FN）含量，结果显示GBE在低浓度（0.39μg/ml）就对tTG、TGF-β、CTGF、FN、Col Ⅳ表达有降低作用，大致呈剂量依赖性，且分析发现FN、ColⅣ含量均与tTG、TGF-β、CTGF均密切相关。Western Blot实验也发现GBE能抑制tTG蛋白表达，且这种作用呈剂量依赖。为了探讨tTG与TGF-β、CTGF的关系，我们用RNA干扰技术分别沉默高糖培养的HBZY-1细胞TGF-β、CTGF表达，结果显示阴性siRNA组tTG表达水平无改变，TGF-βsiRNA干扰后显着降低高糖诱导的tTG蛋白表达（P<0.01），CTGFsiRNA干扰后tTG蛋白表达变化不明显，GBE+TGF-βsiRNA较TGF-βsiRNA干扰组tTG蛋白变化不明显GBE+CTGF siRNA较CTGF siRNA干扰组tTG蛋白明显降低（P<0.01），提示高糖诱导的tTG蛋白过表达主要由TGF-β1介导，而银杏叶提取物的干预作用也主要由TGF-β1所介导。实验三（第4章）银杏叶提取物有效成分筛选首先用MTT法检测浓度分别为0、3.125μg/ml、6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml的各种银杏叶提取物成分（总银杏叶提取物、总黄酮、总内酯、总黄酮水解物、槲皮素、山奈酚、异鼠李素、银杏内酯A、B、C）对高糖（30Mm）诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响，结果显示除苷元成分槲皮素，山奈酚，异鼠李素及总黄酮水解物外，其它各种组分包括总银杏叶提取物、总黄酮、总内酯、内酯A、B、C均无强的细胞抑制作用，总银杏叶提取物（金纳多）仅在高浓度状态下（50μg/ml）对系膜细胞的增殖起抑制作用，总黄酮的增殖抑制作用要强于总银杏叶提取物，25μg/ml即有抑制作用，内酯C在50μg/ml可抑制增殖外，对于这些无强抑制细胞增殖作用的组分，我们又检测了它们对高糖作用下的系膜细胞ECM积聚的影响，实验浓度设计为0、0.05、0.5、5、50μg/ml，总银杏叶提取物（金纳多）、总黄酮在一定浓度范围内（0.5～50μg/ml）对高糖作用下的系膜细胞ECM积聚有缓解作用。总内酯仅在50μg/ml时对ColⅣ含量有抑制作用，内酯A、B无明显抑制ECM积聚的作用，内酯C仅在50μg/ml时对ColⅣ和FN含量有所抑制。根据研究结果得出以下结论：（1）银杏叶提取物对糖尿病大鼠肾脏具有保护作用。（2）银杏叶提取物能缓解糖尿病大鼠肾脏ECM积聚，机制可能与其下调tTG的表达有关。（3）银杏叶提取物（金纳多）抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞ECM积聚（0.39μg/ml-50μg/ml），并且呈浓度依赖性。ECM成分FN、Col Ⅳ的含量与tTG、TGF-β、CTGF含量均密切相关。（4）高糖诱导的系膜细胞tTG蛋白过表达主要由TGF-β介导，而银杏叶提取物对tTG的干预作用也主要由TGF-β所介导。（5）银杏叶提取物（金钠多）仅在高浓度状态下（50μg/ml）抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖而低浓度（自0.5μg/ml起）时抑制系膜细胞ECM积聚。（6）银杏叶提取物中总黄酮在抑制细胞增殖和ECM积聚方面起主要作用，总内酯无明显效果。总黄酮作用方式同样是高浓度状态下对肾脏系膜细胞增殖有抑制作用，低浓度（自0.5μg/ml起）时抑制肾脏系膜细胞ECM含量。（7）苷元抑制系膜细胞增殖的作用远远强于糖苷。苷元单体槲皮素，山奈酚，异鼠李素及总黄酮水解物明显抑制肾脏系膜细胞增殖，并且具有浓度依赖性。创新点：1.本研究首次从tTG诱导ECM积聚的角度来研究银杏叶提取物对大鼠糖尿病肾病的保护作用，并应用RNA干扰技术来探讨TGF-β、CTGF与tTG的在糖尿病肾病中的作用机制。研究显示银杏叶提取物能缓解大鼠糖尿病肾脏ECM积聚，机制与其下调tTG的表达有关。而银杏叶提取物对tTG的干预作用主要由TGF-β所介导。2.本实验首次从高糖培养的系膜细胞增殖和ECM积聚角度对银杏叶提取物不同成分进行筛选，结果发现总银杏叶提取物在高浓度时（50μg/ml）以抑制细胞增殖作用为主，低浓度（自0.5μg/ml起）时以抑制ECM积聚作用为主，GBE中起主要作用的是银杏黄酮，并且苷元的作用远远大于糖苷。
王剑锋[10]（2013）在《四逆散加味对肝纤维化大鼠肝组织中TGF-β1及RhoA相关信号的调控研究》文中研究说明研究目的与意义肝纤维化是多种慢性肝病的共同病理基础,是肝硬化必经的早期可逆阶段,及时干预,可以不发展到肝硬化阶段,如不及时治疗可进展为肝硬化,肝硬化难以逆转。因此,探讨肝纤维化的发病机制、开发有效的治疗肝纤维化的药物对预防慢性肝病的进一步发展十分重要,对早期逆转肝纤维化具有重要的临床价值。近年来,我国的中医药在肝纤维化防治研究中显示出较为光明的发展前景,目前已经报导一大批中药制剂具有抗肝纤维化作用,但针对这些中药制剂的研究很多局限于动物实验和初步临床观察,缺少分子水平作用机制的系统研究,不利于中医药现代化发展的需要,因此,急需深入地研究、探索更为安全有效的抗肝纤维化的复方中药。本课题组前期临床观察中,根据肝纤维化具有“肝郁脾虚络瘀”的病机特点,采用四逆散加味方治疗肝纤维化患者120例,证实四逆散加味方能显着改善肝功能、降低肝纤维化指标、改善肝组织结构,提示其有明显的抗纤维化作用,但其详细的分子机制仍不清,目前国内外鲜见有报道对其深入研究。因此,有必要结合“肝主疏泄”理论深入研究肝纤维化发生、发展的机制,并对四逆散加味、四逆散拆方配伍,治疗肝纤维化的机制进行系统研究。四逆散是疏肝理气的基础方,在临床中虽有良好的疏肝解郁功效,但也有其不足,结合多年临床治病经验体会,发现运用四逆散加味治疗效果明显优于四逆散。本研究以肝主疏泄为理论依据,在前期临床和实验研究得出四逆散加味对肝纤维化有确切疗效的基础上,深入研究四逆散拆方及其加味方抗肝纤维化的作用机制。观察不同剂量的四逆散加味、四逆散配伍组方对免疫损伤性肝纤维化大鼠模型的影响,探索四逆散加味及其配伍抗肝纤维化作用的分子机制,为该方的临床应用和新药开发提供实验依据。研究方法本论文分为理论研究和实验研究两部分。理论研究部分是在系统整理中医学对肝纤维化认识古今相关文献的基础上,结合现代医学对肝纤维化的研究进展,重点探讨了肝纤维化的中医病因病机,肝纤维化的中医治疗研究现状,肝纤维化的免疫学发病机制,四逆散加味方的组方配伍思想,为四逆散加味抗肝纤维化提供理论依据。实验研究部分首先采用猪血清诱导免疫损伤性肝纤维化模型,并采用血清生化、光镜观察及免疫印迹、RT-PCR、免疫组化等分子生物学技术检测观察了四逆散、四逆散加味方治疗肝纤维化的效用；四逆散、四逆散加味方对肝组织中TGFβ1信号通路、Rhoa信号通路的调控,为四逆散加味方的临床应用及新药开发提供实验依据。研究结论及意义本研究以肝主疏泄理论为指导,采用四逆散加味方对肝纤维化大鼠模型进行治疗,得到如下结论：1.肝主疏泄理论是防治肝纤维化的重要理论,以该理论为指导的四逆散加味方对大鼠肝纤维化模型具有良好的治疗作用。2.四逆散加味方具有良好的保护肝细胞,抗炎、降酶改善肝功能的作用。四逆散加味中剂量组、四逆散加味预防组对肝纤维化模型大鼠血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、GGT、ALP活性有显着降低作用,且能明显降低肝纤维化模型大鼠血清HA、Ⅲ型胶原的含量,体现了四逆散加味方“疏肝理气,健脾益气,软坚散结”功效和“肝主疏泄”理论的科学性。3.四逆散加味方能降低大鼠组肝组织中TGFβ1、TGFRmRNA和蛋白表达量、HA蛋白表达量,其机制可能通过多种途径,减少TGF-β1产生及TGFR表达以减少肝星状细胞活化,对TGFβ1信号通路产生调控作用,减少ECM的生成和HA的产生,而起到抗肝纤维化和保护肝细胞损伤的作用。4.四逆散加味方能下调肝纤维化模型大鼠组肝组织中Rhoam基因和蛋白表达量、a-SMA蛋白表达量,且以四逆散加味中剂量组、四逆散加味预防组Rhoam基因和蛋白表达量、a-SMA蛋白表达量下调更为显着。证实四逆散加味治疗肝纤维化的可能作用机制是通过下调RhoA基因和蛋白表达,对RhoA/ROCK通路的产生调控作用,减少a-SMA蛋白表达,抑制肝星状细胞的活化与迁移,而起到保护肝细胞,进而发挥抗肝纤维化的作用。
二、银杏叶提取物防治肝纤维化的实验研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、银杏叶提取物防治肝纤维化的实验研究（论文提纲范文）
（1）银杏叶提取物对博来霉素致小鼠皮肤纤维化的保护作用及机制（论文提纲范文）
| 英文缩略词 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1.前言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 主要化学试剂 |
| 2.2 主要仪器 |
| 2.3 动物饲养及分组处理 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.5 统计学分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 一般情况 |
| 3.2 银杏叶提取物对博来霉素致小鼠皮肤纤维化的影响 |
| 3.3 银杏叶提取物减轻皮肤纤维化小鼠氧化应激 |
| 3.4 银杏叶提取物抑制皮肤纤维化小鼠上皮间质转化 |
| 3.5 银杏叶提取物对皮肤纤维化小鼠TGF-β1/Smad信号通路的影响 |
| 4.讨论 |
| 5.结论 |
| 全文小结 |
| 创新点与局限性 |
| 7.参考文献 |
| 8.个人简历 |
| 9.致谢 |
| 10.综述 环境暴露与系统性硬化症:系统综述与荟萃分析 |
| 参考文献 |
（2）银杏叶提取物对UUO大鼠肾组织TGF-β1、BMP-7表达的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 英文缩写 |
| 攻读学位期间发表的学术成果 |
| 附图 |
（3）荔枝核总黄酮对大鼠肝星状细胞TGF-β1/Smads通路及PPAR-r/c-Ski通路的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 主要实验试剂 |
| 1.2 主要仪器设备 |
| 1.3 主要实验试剂配制 |
| 1.4 实验细胞样本 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 HSC细胞培养 |
| 2.2 细胞计数方法 |
| 2.3 实验分组 |
| 2.4 CCK-8 法检测不同浓度TFL作用下HSC的生长活力 |
| 2.5 各实验组中细胞上清液里的PPARr、c-Ski含量 |
| 2.6 qPCR法检测细胞内TGF-β1、Smad3/4 m RNA的表达 |
| 3.结果 |
| 3.1 HSC细胞的生长活力 |
| 3.2 各组细胞上清液中PPAR-r、c-Ski的含量比较 |
| 3.3 各组细胞中TGF-β1、Smad3/4 m RNA的表达比较 |
| 4.讨论 |
| 4.1 现代医学与肝纤维化 |
| 4.2 中医药与肝纤维化 |
| 4.2.1 中医与肝纤维化 |
| 4.2.2 中药与肝纤维化 |
| 4.3 TFL抗肝纤维化的研究 |
| 4.4 PPARγ-c-Ski通路与肝纤维化 |
| 4.5 TGF-β1/Smads信号通路与肝纤维化 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 略缩词表 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历及攻读学位期间发表的学术论文 |
（4）银杏叶提取物抗纤维化机制研究述评（论文提纲范文）
| 1 银杏叶提取物与肺纤维化 |
| 2 银杏叶提取物与肝纤维化 |
| 3 银杏叶提取物与肾纤维化 |
| 4 银杏叶提取物与心肌纤维化 |
| 5 讨论 |
（5）发酵中药对斜带石斑鱼肝脏健康的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 主要符号表 |
| 第1章 引言 |
| 1.1 文献综述 |
| 1.1.1 水产养殖鱼类肝脏疾病形成原因 |
| 1.1.2 中药在水产养殖中应用 |
| 1.1.3 中药发酵的优势 |
| 1.1.4 中药的保肝功能和作用机制 |
| 1.1.5 基于细胞培养的药物筛选模型 |
| 1.2 本实验的研究目的和意义 |
| 1.3 研究内容 |
| 第2章 发酵中药对石斑鱼肝细胞氧化损伤的保护作用 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 试验鱼的饲养与管理 |
| 2.1.2 药品与试剂 |
| 2.1.3 发酵中药的制备 |
| 2.1.4 H_2O_2诱导斜带石斑鱼肝细胞损伤模型的建立 |
| 2.1.5 试验分组设计 |
| 2.1.6 细胞生长活性检测 |
| 2.1.7 生化指标的检测 |
| 2.1.8 数据处理 |
| 2.2 结果分析 |
| 2.2.1 10种发酵中药对斜带石斑鱼肝细胞活力的影响 |
| 2.2.2 发酵中药对石斑鱼肝细胞AST、ALT、LDH活性和ALT/AST的影响 |
| 2.2.3 发酵中药对石斑鱼肝细胞GSH-PX、T-AOC和 MDA的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 饲料添加发酵中药对石斑鱼生长性能、肝脏健康的影响 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 药品与试剂 |
| 3.1.3 发酵中药的制备 |
| 3.1.4 实验饲料的制备 |
| 3.1.5 养殖管理 |
| 3.1.6 样品采集 |
| 3.1.7 样品测定 |
| 3.1.8 肝脏总RNA提取和荧光定量PCR |
| 3.1.9 数据处理 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 饲料中添加发酵银杏叶和发酵甘草对石斑鱼生长性能的影响 |
| 3.2.2 饲料中添加发酵银杏叶和发酵甘草对石斑鱼血浆生化指标的影响 |
| 3.2.3 饲料中添加发酵银杏叶和发酵甘草对石斑鱼肝脏抗氧化指标的影响 |
| 3.2.4 饲料中添加发酵银杏叶和发酵甘草对石斑鱼肝脏抗氧化相关基因表达量的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 在亚硝酸盐胁迫下饲料中添加发酵银杏叶和发酵甘草对石斑鱼成活率、肝脏健康的影响 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 药品与试剂、发酵中药的制备、饲料的制备、养殖管理 |
| 4.1.2 分组与亚硝酸盐胁迫的操作 |
| 4.1.3 样品采集 |
| 4.1.4 样品测定 |
| 4.1.5 数据处理 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 饲料中添加发酵银杏叶、发酵甘草对斜带石斑鱼亚硝酸盐胁迫成活率的影响 |
| 4.2.2 饲料中添加发酵银杏叶、发酵甘草对斜带石斑鱼亚硝酸盐胁迫血液生化指标的影响 |
| 4.2.3 亚硝酸盐胁迫下饲料中添加发酵银杏叶、发酵甘草对斜带石斑鱼肝脏抗氧化相关指标的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 全文总结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 在学期间研究成果 |
（6）银杏叶提取物抗四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化的分子机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 缩略词表 |
| 第一部分 大鼠分组、给药和建立肝纤维化模型 |
| 1.材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 主要仪器设备 |
| 1.1.2 药物和主要试剂 |
| 1.1.3 实验动物 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 大鼠分组和处理 |
| 1.2.2 大鼠基本情况观察 |
| 1.2.3 大鼠血清提取和分离 |
| 1.2.4 大鼠肝脏组织样品采集和形态观察 |
| 1.2.5 大鼠肝脏指数计算 |
| 1.2.6 统计学分析 |
| 2.结果 |
| 2.1 大鼠实验期间的基本情况 |
| 2.2 大鼠肝脏形态和肝脏指数的变化 |
| 3.讨论 |
| 第二部分 银杏叶提取物对CCl4致大鼠肝纤维化血清学指标的影响 |
| 1.材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 主要仪器设备 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 血清肝功能指标(TBIL、ALT和 AST)的检测 |
| 1.2.1.1 TBIL的检测 |
| 1.2.1.2 ALT的检测 |
| 1.2.1.3 AST的检测 |
| 1.2.2 血清肝纤维化指标(HA、LN、IV-C和 PIIINP)的检测 |
| 1.2.2.1 HA的检测 |
| 1.2.2.2 LN的检测 |
| 1.2.2.3 IV-C的检测 |
| 1.2.2.4 PIIINP的检测 |
| 1.2.3 统计学分析 |
| 2.结果 |
| 2.1 GBE对大鼠肝功能的影响 |
| 2.2 GBE对大鼠肝纤维化的影响 |
| 3.讨论 |
| 第三部分 银杏叶提取物对大鼠肝脏组织病理学的影响 |
| 1.材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 主要仪器设备 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 组织石蜡包埋和切片制作 |
| 1.2.2 HE染色 |
| 1.2.3 Masson染色 |
| 1.2.4 肝纤维化程度评价 |
| 1.2.5 统计学分析 |
| 2.结果 |
| 2.1 HE染色结果 |
| 2.2 Masson染色结果 |
| 2.3 肝纤维化评价结果 |
| 3.讨论 |
| 第四部分 银杏叶提取物抗大鼠肝纤维化机制的研究 |
| 1.材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 主要仪器设备 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 主要试剂的配制 |
| 1.2.2免疫组织化学实验 |
| 1.2.3 蛋白印迹杂交(Westernblot)实验 |
| 1.2.4 统计学分析 |
| 2.结果 |
| 2.1 GBE对 p38MAPK信号通路的影响 |
| 2.2 GBE对 NF-кB/IкBα信号通路的影响 |
| 2.3 GBE对 Bcl-2/Bax信号通路的影响 |
| 3.讨论 |
| 第五部分 银杏叶提取物抑制炎症和HSCs的激活 |
| 1.材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 主要仪器设备 |
| 1.1.2 主要试剂 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 引物设计及合成 |
| 1.2.2 RNA抽提(Trizol法) |
| 1.2.3 逆转录合成c DNA |
| 1.2.4 实时荧光定量PCR |
| 1.2.5 半定量PCR |
| 1.2.6 琼脂糖凝胶电泳 |
| 1.2.7 统计学分析 |
| 2.结果 |
| 2.1 GBE在抗肝纤维化过程中对炎症的影响 |
| 2.2 GBE在抗肝纤维化过程中对HSCs激活的影响 |
| 3.讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表的论文 |
（7）抗氧化剂治疗肝纤维化的研究进展（论文提纲范文）
| 1肝纤维化的病因 |
| 2氧化应激 |
| 3抗氧化剂药物 |
| 3.1 硒 |
| 3.2维生素E |
| 3.3丙丁酚 |
| 3.4雌激素 |
| 3.5植物源性的抗氧化 |
（8）银杏叶提取物防治肝脏损害的实验研究进展（论文提纲范文）
| 1 药理研究 |
| 2 EGB防治非酒精性脂肪性肝病 (NAFLD) 作用 |
| 3 EGB防治急性肝损伤作用 |
| 4 EGB抗肝纤维化作用 |
| 5 EGB对肝脏缺血再灌注、肝脏移植中的应用 |
| 6 展望 |
（9）银杏叶提取物对糖尿病大鼠肾脏tTG的影响及有效成分体外筛选（论文提纲范文）
| 前言 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第1章 综述 |
| 1.1 组织型转谷氨酰胺酶（tTG）与糖尿病肾病 |
| 1.1.1 组织型转谷氨酰胺酶（tTG）的结构与分布 |
| 1.1.2 tTG的生物学性质 |
| 1.1.3 tTG与纤维化疾病 |
| 1.1.4 组织型转谷氨酰胺酶（tTG）与糖尿病肾病 |
| 1.2 银杏叶提取物与糖尿病肾病 |
| 1.2.1 银杏叶提取物的主要活性成分 |
| 1.2.2 银杏黄酮的药理作用 |
| 1.2.3 银杏内酯的药理作用 |
| 1.2.4 银杏叶提取物的药理作用及临床应用 |
| 第2章 实验一：银杏叶提取物对糖尿病大鼠肾脏tTG 表达的影响 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 主要试剂与仪器 |
| 2.1.2 糖尿病(DM)模型的制备及分组处理 |
| 2.1.3 PAS 染色评估肾脏 ECM 含量 |
| 2.1.4 免疫组化检测 tTG 在大鼠肾组织中的表达 |
| 2.1.5 Western Blot 检测各组大鼠肾脏 tTG 蛋白表达 |
| 2.1.6 统计学处理 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.2.1 血清、尿生化指标测定 |
| 2.2.2 PAS 染色光镜观察 |
| 2.2.3 免疫组化检测各组大鼠肾脏 tTG 表达 |
| 2.2.4 Western Blot 检测各组大鼠肾脏 tTG 蛋白表达水平 |
| 2.3 讨论 |
| 第3章 实验二：银杏叶提取物对高糖诱导的大鼠系膜细胞tTG 过表达的影响及 TGF- β、 CTGF 在其中的作用机制 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 主要试剂与仪器 |
| 3.1.2 肾小球系膜细胞的培养与传代 |
| 3.1.3 ELISA检测银杏叶提取物对高糖作用下的HBZY-1大鼠肾小球系膜细胞tTG、TGF-β、CTGF、FN、Col Ⅳ含量的影响 |
| 3.1.4 Western Blot 检测银杏叶提取物各组份对高糖诱导的肾小球系膜细胞tTG蛋白表达水平 |
| 3.1.5 TGF-β、CTGF siRNA 转染 |
| 3.1.6 western blot 检测 TGF-β、CTGF 干扰后tTG的含量 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 银杏叶提取物对高糖作用下的 HBZY-1 大鼠肾小球系膜细胞tTG 、 TGF- β、 CTGF 、 FN 、 Col Ⅳ含量的影响 |
| 3.2.2 Western Blot 检测银杏叶提取物各组份对高糖诱导的肾小球系膜细胞tTG蛋白表达水平 |
| 3.2.3 Western Blot 检测TGF-β、CTGF siRNA 转染后tTG表达 |
| 3.3 讨论 |
| 第4章 实验三：银杏叶提取物有效成分的体外筛选 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 主要试剂与仪器 |
| 4.1.2 银杏叶提取物成分分离制备 |
| 4.1.3 肾小球系膜细胞的培养与传代 |
| 4.1.4 MTT检测银杏叶提取物的各组分在不同浓度对细胞增殖的影响 |
| 4.1.5 ELISA检测含量为9.5%含量为9.5%含量为9.5%银杏叶提取物各组分对HBZY-1大鼠肾小球系膜细胞FN、Col Ⅳ含量的影响 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 银杏叶提取物各组分对HBZY-1大鼠肾小球系膜细胞形态的影响 |
| 4.2.2 银杏叶提取物各组分对高糖作用下的大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响 |
| 4.2.3 银杏叶提取物各组分对 HBZY-1 大鼠肾小球系膜细胞 FN、Col Ⅳ含量的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（10）四逆散加味对肝纤维化大鼠肝组织中TGF-β1及RhoA相关信号的调控研究（论文提纲范文）
| 目录 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词 |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 一、肝纤维化的中医病因病机探讨 |
| (一) 肝纤维化与古代相关病名的区别与联系 |
| (二) 肝纤维化的病因病机研究 |
| 二、肝纤维化的中医治疗研究 |
| (一) 肝纤维化辨证分型研究 |
| (二) 肝纤维化的治则治法研究 |
| (三) 抗肝纤维化复方的实验研究 |
| (四) 单味中药治疗肝纤维化的实验研究 |
| 三、从“肝主疏泄”论治肝纤维化的理论基础探讨 |
| (一) 肝纤维化与肝主疏泄 |
| (二) 肝失疏泄与四逆散 |
| (三) 治疗肝纤维化对四逆散加味的原因分析 |
| 四、肝纤维化发生的免疫学机制探讨 |
| (一) HSC的活化是肝纤维化的基础,HSC成为抗纤维化研究的靶标 |
| (二) 参与ECM合成的信号转导通路,将成为抗肝纤维化药物研究的新靶点 |
| 五、四逆散加味组方配伍思想分析 |
| (一) 四逆散病位、病机定位 |
| (二) 四逆散组方配伍分析 |
| (三) 四逆散拓展运用 |
| (四) 四逆散加味组方分析 |
| (五) 四逆散加味与肝纤维化 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一：四逆散加味干预大鼠免疫性肝纤维化作用的药效学研究 |
| 实验二：四逆散加味对肝纤维化大鼠TGFβ1相关信号表达的影响 |
| 实验三：四逆散加味对肝纤维化大鼠Rhoa相关信号表达的影响 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 附录 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
四、银杏叶提取物防治肝纤维化的实验研究（论文参考文献）
- [1]银杏叶提取物对博来霉素致小鼠皮肤纤维化的保护作用及机制[D]. 阮亮. 安徽医科大学, 2020(01)
- [2]银杏叶提取物对UUO大鼠肾组织TGF-β1、BMP-7表达的影响[D]. 邵作乔. 佳木斯大学, 2019(03)
- [3]荔枝核总黄酮对大鼠肝星状细胞TGF-β1/Smads通路及PPAR-r/c-Ski通路的影响[D]. 陈姗. 广西中医药大学, 2019(03)
- [4]银杏叶提取物抗纤维化机制研究述评[J]. 邵作乔,刘洁薇,聂磊,李晶,王丽敏. 中医学报, 2018(08)
- [5]发酵中药对斜带石斑鱼肝脏健康的影响[D]. 李泽鑫. 集美大学, 2018(01)
- [6]银杏叶提取物抗四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化的分子机制研究[D]. 王媛媛. 上海交通大学, 2016(03)
- [7]抗氧化剂治疗肝纤维化的研究进展[J]. 胡祖超,扶小华,戴东. 中国普通外科杂志, 2015(07)
- [8]银杏叶提取物防治肝脏损害的实验研究进展[J]. 贺琴,李敬会,谭华炳. 中国老年学杂志, 2013(21)
- [9]银杏叶提取物对糖尿病大鼠肾脏tTG的影响及有效成分体外筛选[D]. 苏青. 吉林大学, 2013(09)
- [10]四逆散加味对肝纤维化大鼠肝组织中TGF-β1及RhoA相关信号的调控研究[D]. 王剑锋. 南京中医药大学, 2013(04)