一、缺氧、氧化损伤对培养人TEC整合素α3表达的影响（论文文献综述）
樊飞燕,张运克[1]（2021）在《益气活血中药联合骨髓间充质干细胞促进缺血性脑卒中血管新生的作用与机制》文中研究表明背景:骨髓间充质干细胞具有促进血管新生的作用,治疗缺血性脑卒中效果良好,益气活血类中药在促进血管新生方面亦存在显着疗效。目的:综述益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞促进缺血性脑卒中血管新生的机制,以期为缺血性脑卒中的研究及治疗提供参考。方法:以"bone marrow mesenchymal stem cells,angiogenesis,ischemic stroke,traditional chinese medicine"为英文关键词,以"骨髓间充质干细胞,血管新生,缺血性脑卒中,中药"为中文关键词,检索2009至2020年期间收录在PubMed、中国知网、万方数据库中的文献,纳入血管新生相关机制及中药联合骨髓间充质干细胞促进血管新生相关的文献,排除重复与相关性弱的文献,对145篇文献进行总结分析。结果与结论:（1）梳理了骨髓间充质干细胞、血管新生的定义及血管新生的机制;（2）总结了益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞促进血管新生的相关因子及信号通路,如血管内皮生长因子、脑源性神经营养因子、碱性成纤维细胞生长因子、缺氧诱导因子1α、血管生成素、整合素αvβ3、基质金属蛋白酶9及Wnt信号通路、Notch信号通路、PI3K/Akt信号通路和SDF-1/CXCR4信号轴;（3）总结发现益气活血类中药与骨髓间充质干细胞联合应用能增强血管新生作用,提升缺血性脑卒中的治疗效果。
李彬彬[2]（2020）在《RCCS模拟微重力对人表皮干细胞生长特性和代谢组学影响的研究》文中提出背景和目的随着载人航天技术的迅猛发展,航天员在太空中驻留的时间将不断延长,伴随而来的意外创伤风险亦随之增加。应激损伤和创伤是航天员在航天飞行任务中的主要威胁之一,最常见的创伤为皮肤软组织损伤。研究发现,皮肤创伤的修复过程中有多种细胞参与,其中表皮干细胞具有干细胞的一般特征即自我更新和分化潜能,其在皮肤创伤和应激损伤与修复过程中可增殖分化为表皮各种细胞。因此,研究失重环境对表皮干细胞生长特性和代谢组学的影响具有重要意义。有关失重环境对人表皮干细胞影响的研究鲜有报道。本研究采用微重力旋转细胞培养系统（the rotary cell culture system,RCCS）模拟细胞所处微重力环境,研究微重力对人表皮干细胞（human epidermal stem cells,h Ep SCs）增殖、细胞周期及超微结构和代谢组学的影响,为失重环境下皮肤软组织应激损伤和创伤及修复的应对策略以及人表皮干细胞在航天医学中的应用提供理论依据。研究方法体外培养人表皮干细胞,应用RCCS系统模拟微重力环境培养细胞。选取4至10代处于对数生长期的h Ep SCs随机分为正常重力对照组（normal gravity,NG）和模拟微重力组（simulated microgravity,SMG）。经1 d、3 d和5 d培养后收集两组细胞进行实验检测。应用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪技术检测细胞生长周期,蛋白印迹法和RT-PCR法检测细胞周期和相关蛋白以及基因的表达,透射电镜法观察细胞的超微结构,应用UHPLC-LTQ-MS技术和KEGG数据库进行代谢组学检测分析。每组三个生物学重复。结果（1）CCK-8法检测结果显示,在失重环境下培养1 d、3 d和5 d后,SMG组细胞增殖能力较NG组受到明显的抑制（P<0.05）;同时,SMG组各时相细胞的增殖能力呈现逐渐降低的趋势,且1 d与3 d、5 d以及3 d和5 d之间相比有统计学差异（P<0.05）。（2）流式细胞仪检测结果显示,与NG组相比,SMG组细胞在1 d和5 d时G0/G1期细胞比例降低,而S期细胞的比例增高,差异具有统计学意义（P<0.05）。另外,在3 d时,SMG组G0/G1期细胞的比例增加,而S期和G2/M期细胞的比例降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。（3）蛋白质印记法和RT-PCR法检测结果显示,培养1 d和5 d时SMG组与NG组细胞的cyclin B1表达相比无显着性差异（P>0.05）,而培养3 d时SMG组cyclin B1表达较NG组相比增加,差异具有统计学意义（P<0.05）。SMG组细胞培养1 d和5 d时cyclin D3表达较NG组增加,而3 d组则降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。（4）透射电镜观察结果显示,与NG组相比,SMG组在培养1 d和3 d后细胞胞质内出现大量的次级溶酶体、线粒体和空泡结构,而在5 d后这些物质明显减少。（5）代谢组学分析发现,细胞培养1 d和3 d后,与NG组比较,SMG组中有57种共同差异代谢物,其中23种代谢物显着下调,34种差异代谢物显着上调;进一步分析发现,这些差异代谢物主要为磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、溶血卵磷脂、神经酰胺、D-色氨酸和二十二碳六烯酸等;进行KEGG化合物分类,其主要分为磷脂类、糖脂类、脂肪酸类和氨基酸类等;KEGG通路富集分析发现涉及多条通路,包括氨基酸代谢途径、脂质代谢途径、膜转运途径、神经营养蛋白信号途径等。结论在RCCS模拟微重力环境下,人表皮干细胞的细胞增殖、细胞周期和超微结构发生显着变化,细胞周期蛋白cyclin B1和cyclin D3表达波动明显,涉及细胞代谢网络和基因调控的细胞代谢组学表达谱也发生明显改变。
胡淑鸿[3]（2018）在《Sema7A调控动脉粥样硬化斑块形成的机制和转化研究》文中指出动脉粥样硬化是一种多因素共同作用的慢性血管炎症性疾病过程,脂质代谢障碍为动脉粥样硬化的病变基础,病变发生时,脂质在炎症受损的血管内皮下沉积,伴随炎症细胞的浸润于沉积,逐步形成动脉粥样硬化斑块,一旦斑块破裂,斑块内容物释放与循环血中的白细胞和血小板互相黏连形成动脉血栓复合物,血栓会引起血管腔狭窄或堵塞,导致心肌梗死、冠心病、缺血性中风等恶性临床事件,是人类致死致残的常见病因。动脉粥样硬化是心血管疾病高发病率的主要原因,而心血管疾病已成为我国居民疾病的头号死因。因此,深入透彻研究动脉粥样硬化的发病过程和分子机制,加强动脉粥样硬化的预防和治疗,将有利于降低心血管疾病的疾病发病率,进一步改善和提高我国人民的身体健康和生活质量。正常情况下,覆盖于血管腔的内皮细胞感受来自于血流的物理、化学和生物的刺激,并对这些刺激做出反应,以保护血管的完整性,维持血管稳态。当血管发生血液扰动流时内皮细胞发生表型改变,表现为通透性增加,细胞因子释放和白细胞粘附,血管壁内皮细胞这些结构和功能变化,大大增加了对动脉粥样硬化的易感性。然而,迄今为止血液扰动流导致血管功能变化的分子机制还不十分清楚。旗语家族semaphorins最早被发现是调控神经生长的导向分子,然而近来的研究表明参与多种生理病理功能。我们继报道了Sema4D参与动脉粥样硬化后,最近又发现该家族的另一成员Sema7A的敲除可显着延缓动脉粥样硬化斑块的形成,尤其对血液扰动流出现的主动脉弓部调控作用尤为明显。然而,Sema7A参与动脉粥样硬化的机制尚不清楚。本文我们发现Sema7A响应血管血液扰动流,在血管内皮细胞表达上调、通过与其相应的受体α1β1相互作用,促进动脉粥样硬化;在探索转化医学应用方面,我们发现Sema7A血清水平与动脉粥样硬化血栓性脑卒中相关,提示其在相关疾病中作为生物标志物的潜在应用前景。目的:探究轴突导向分子Sema7A调控动脉粥样硬化发生发展的分子机制,为动脉粥样硬化的临床干预提供理论依据。研究方法:本项目将利用多种基因敲除小鼠,结合细胞与分子生物学技术,研究Sema7A促进动脉粥样硬化发病机制,探索轴突导向分子对动脉粥样硬化发生发展过程中内皮细胞表型变化以及炎症细胞浸润的影响以及Sema7A在临床上动脉粥样硬化的诊断和治疗的转化研究。1.内皮细胞Sema7A分子表达与血液扰动流和内皮细胞功能之间的调控作用。（1）血管内皮Sema7A的表达规律。前期发现Sema7A的敲除可以显着减少主动脉的脂质沉积和动脉粥样硬化斑块的形成,并且斑块的减少主要集中在主动脉弓部,即血液扰动流出现的位置。为了检测Sema7A是否响应血液扰动流,我们检测血管暴露在血液扰动流的主动脉弓部以及血液稳定层流的降主动脉干部内皮细胞中Sema7A的表达水平。同时我们将通过在体的颈动脉部分结扎模型和体外内皮细胞的震荡流模型人为构建更纯粹的血液扰动流模型,确定Sema7A的表达与血液扰动流之间的联系与规律,为下一步的实验计划和设计做铺垫。（2）内皮Sema7A分子表达的转录调控。我们发现在血液扰动流区域,血管内皮细胞Sema7A蛋白及m RNA水平较层流区域显着上调,提示转录调控在Sema7A表达中发挥重要作用。通过Qiagen数据库分析Sema7A基因序列,发现其启动子区域包含多个血流剪切力相关转录因子的结合位点,推测这些转录因子可能介导了血液扰动流下Sema7A表达的上调,因此我们将研究转录因子调控Sema7A表达活性的变化与影响。（3）血液扰动流情况下,Sema7A缺失对或高表达对内皮细胞粘附分子表达的影响。选择素selectins,粘附分子ICAM-1,VCAM-1是介导白细胞滚动、粘附和浸润的主要粘附分子,血液扰动流情况下,Sema7A缺失或高表达可能对主要粘附分子的表达有影响,我们将通过蛋白质组学实验以及配受体作用实验对Sema7A调控粘附分子的作用方式及机制进行探究。2.Sema7A敲除对白细胞滚动、粘附和浸润,以及对动脉粥样硬化斑块形成的影响。（1）Sema7A细胞特异性敲除对Sema7A及其受体α1β1介导的白细胞滚动、粘附和浸润的影响。通过在体以及体外诱导炎症模型,检测炎症条件下白细胞在内皮层内的滚动粘附浸润情况。并利用α1β1特异性阻断抗体以及Sema7A敲除细胞,进而论证内皮层上白细胞滚动粘附与Sema7A及其受体α1β1的相互作用密不可分。（2）利用骨髓移植结合颈动脉斑块模型,分析各组处理鼠间斑块形成过程的不同。利用小鼠喂食高脂饲料构建动脉粥样硬化诱导模型结合实验室现已掌握的颈动脉部分结扎手术模型,观测不同来源Sema7A对动脉粥样硬化斑块形成的影响,进而探究不同来源的Sema7A对动脉粥样硬化形成过程的不同作用。3.Sema7A与临床急性动脉粥样硬化血栓性卒中（AAS）患者关系。鉴于Sema7A通过对血液扰动流的响应及其介导白细胞浸润等一系列的病理作用参与动脉粥样硬化的发生发展,因此以Sema7A为靶点进行转化应用方面的研究十分必要。在脑动脉粥样硬化或颈动脉粥样硬化患者中,易损斑块的破裂可能导致急性血栓形成,阻止血液供应到大脑。这种称为急性动脉粥样硬化血栓性卒中（AAS）的疾病是危及生命的心血管疾病之一,为了探索Sema7A与临床急性动脉粥样硬化血栓性卒中之间的联系。我们检测健康对照组与急性动脉粥样硬化血栓性卒中组患者血清中可溶性Sema7A水平,通过校正已知心血管危险因素和基线协变量（包括体重指数,低密度脂蛋白胆固醇,高密度脂蛋白胆固醇,甘油三酯,总胆固醇,空腹血糖,吸烟和饮酒状态）后,衡量血清Sema7A水平升高是否是急性动脉粥样硬化血栓性卒中的独立危险因素,进而为Sema7A的临床应用提供实验基础和理论依据。结果:1.通过硅片启动子分析并在人类和小鼠Sema7A启动子区域中鉴定了c AMP反应元件结合蛋白（CREB）的潜在结合位点,CREB是已知对剪切应激反应的转录因子。利用信号通路抑制剂我们发现内皮Sema7A分子的转录表达受PKA-CREB信号传导调控,且这些数据表明抑制PKA/CREB信号传导可能是血液扰动流诱导的内皮Sema7A表达的潜在机制。2.主动脉弓部以及结扎的左颈动脉即血液扰动流情况下Sema7A的表达上调可以显着上调此处粘附分子ICAM-1以及VCAM-1的表达。3.利用过表达细胞系,我们阐明的内皮Sema7A的表达上调可以通过受体α1β1活化粘着斑激酶信号通路及下游NFκB信号通路,启动粘附分子ICAM-1/VCAM-1的转录上调,促进白细胞的滚动与粘附。4.内皮细胞上表达的Sema7A在动脉粥样硬化斑块形成过程中发挥重要作用,利用骨髓移植结合颈动脉斑块模型,我们发现内皮Sema7A特异性敲除可以显着减少动脉粥样硬化斑块脂质的沉积。5.我们测量了AAS患者和年龄和性别匹配的健康对照中血清Sema7A的水平。与对照组相比,AAS患者血清Sema7A水平显着升高。校正已知心血管危险因素和基线协变量（包括体重指数,总胆固醇,甘油三酯,低密度脂蛋白胆固醇,高密度脂蛋白胆固醇,空腹血糖,吸烟和饮酒状态）后,AAS患者血清Sema7A水平仍然升高很明显,这个结果表明Sema7A是急性动脉粥样硬化血栓性卒中的独立危险因素,并可能成为一种新的诊断标志物。结论:1.Sema7A受血液扰动流调控表达上调,通过受体整合素α1β1介导内皮细胞间的相互作用,导致粘附分子表达上调和内皮功能紊乱,进而促进白细胞滚动粘附和动脉粥样硬化的发展。2.临床急性动脉粥样硬化血栓性卒中（AAS）病人血清中Sema7A的水平显着升高,是AAS的独立危险因素。3.靶向Sema7A可能为临床性动脉粥样硬化的病程诊断及有效治疗提供重要的理论基础及有力的实验依据。
王珊[4]（2016）在《整合素在间充质干细胞肺阻塞中的作用及对迁徙的影响》文中认为间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）具有多分化潜能、强大的旁分泌作用和低免疫原性等优点。动物试验研究显示,MSCs对多种组织损伤具有修复作用,表现出治疗多种重大疾病的应用前景,目前全球有多个MSCs治疗心肌梗塞和脑中风的临床试验在进行。对于MSCs的移植,静脉注射具有安全性高和容易操作等优点,是目前干细胞移植最常用的途径;但研究表明,体外培养的MSCs在静脉注射后到达靶器官的数量极少,绝大多数细胞不能通过肺循环而滞留在肺脏中,并很快死亡,严重影响其对靶器官的修复效果。然而造成MSCs肺滞留的原因和机制并不清楚。对MSCs肺滞留分子机制的研究将有助于研发减少MSCs肺阻塞提高其到达损伤器官数量的方法,对MSCs应用于临床治疗具有重大意义。在本论文中,流式细胞仪和蛋白质免疫印迹分析显示经体外连续贴壁培养的MSCs表面的很多整合素如integrinβ1,α5和αVβ3的表达水平都显着升高,而免疫荧光染色和流式细胞仪分析整合素的配体纤维粘连蛋白和玻连蛋白均在正常小鼠肺血管内皮细胞的表面表达。使用功能性阻断抗体阻断MSCs表面的integrinβ1,α5和αVβ3,使MSCs在静脉注射后在小鼠肺脏中的滞留量显着降低,多种检测方法如荧光定量PCR和组织学分析均验证了此结果;MSCs肺滞留量显着降低的同时伴随着在血液循环中的水平增加,并有更多的MSCs迁徙到小鼠心肌梗塞的心脏和耳朵发炎区域。本论文研究还发现,将连续传代并贴壁培养的MSCs经过短时间的三维立体培养,很多整合素的表达水平显着下降,静脉注射后在肺脏中的滞留量大幅度降低。我们的研究结果表明,整合素的过多表达和活化是MSCs肺滞留的一个重要因素。综上所述,本研究证明了传统贴壁培养的MSCs表面整合素过多表达和活化,产生过度的粘附能力,导致其静脉注射后粘附在肺血管壁上。使用特异性功能阻断抗体阻断整合素的功能或者将MSCs经过三维立体培养降低整合素的表达可以大幅度降低MSCs在肺中的滞留量,并增加MSCs在血液循环和到达缺血心肌和炎症组织的数量。因此本研究提示,通过降低MSCs表面整合素的功能是降低其肺阻塞,增加其损伤组织到达量的有效方法,对MSCs临床治疗具有重大的科学意义。
张伟[5]（2014）在《补阳还五汤、血府逐瘀汤联合EPC对血管内皮损伤修复作用的比较研究》文中研究说明目的:本研究在中医活血化瘀理论及细胞疗法新技术指导下,探讨益气活血方和行气活血方联合输注内皮祖细胞（EPC）对大鼠血管内皮功能障碍的修复作用及其机制。方法:以内皮损伤的SD大鼠为受试对象,选择益气活血之补阳还五汤、行气活血之血府逐瘀汤为被试因素,研究两方分别联合EPC输注后,对大鼠内皮损伤模型血管内皮损伤的修复作用。在明确两方能促进EPC修复损伤血管内皮的基础上,从诱导EPC归巢和促进分化两方面,以SDF-1/CXCR-4轴、整合素分子αvβ3、αvβ5及PI3K/Akt信号通路为切入点,研究两类活血方促进EPC修复受损血管内皮的作用机制。结果:1.采用优化密度梯度离心法获取EPC,对7d、14d、21d的细胞表面标志物CD34/CD133进行检测,结果显示双抗的表达率分别为16.9%、22.6%、19.71%。采用DAPI标记结果显示EPC的标记率达到95%以上。2.SD大鼠高脂饲料喂养3个月,辅以维生素D腹腔注射可造成大鼠血脂升高,血管内膜增厚,部分可见血管呈粥样硬化样改变,细胞衰老检测血管内皮有阳性表达。药物干预4周后,与模型组比较,各实验组细胞衰老情况均有改善,补阳还五汤联合EPC组、血府逐瘀汤联合EPC组和单独输注EPC组改善尤为明显,内皮衰老检测为阴性。3.与M组比较,b、y及B、E组均有下调总胆固醇及甘油三酯的作用（P<0.05）;b、y及B、E组均能上调高密度脂蛋白的水平。与E组比较,b、y及B、E组在下调总胆固醇及甘油三酯的作用显着（P<0.05）。与单用药物组比较,B、E组能下调甘油三酯的表达,上调高密度脂蛋白表达（P<0.05）。与C组比较,M组的血钙浓度显着增加（P<0.01）;各药物组与M组比较血钙浓度显着降低（P<0.05）;E组与B、X组相比,后者血钙下降更为明显（P<0.05）。两方单用相互比较,在调节甘油三酯和高密度脂蛋白方面,b组作用不及y组（P<0.05）,但两方联合EPC后在调节血脂和血钙方面,B组的作用亦整体优于X组,特别是在下调总胆固醇、甘油三酯和上调高密度脂蛋白方面具有统计学意义（P<0.05）。补阳还五汤与EPC在调节总胆固醇方面具有相加作用;在调节高密度脂蛋白和甘油三酯方面,两类活血方联合EPC有协同作用。4.与M组比较,各实验组eNOS表达均显着提高,其中B、X、E组表达显着增强（P<0.01）,b、y组表达增强（P<0.05）。与E组比较,两类活血方联用EPC组的eNOS蛋白水平增加明显（P<0.05）。与单用药物组比较两类活血方联用EPC组eNOS蛋白水平显着提高（P<0.05）。补阳还五汤、血府逐瘀汤在上调eNOS表达方面与EPC具有相加作用。5.与M组比较,B组SDF-1蛋白表达显着增加（p<0.01）,X组SDF-1蛋白表达有所增加（p<0.05）;与E组及单用中药组相比,B、X组SDF-1蛋白表达增加（p<0.05或p<0.01）;与C组比较,M组及其余各实验组CXCR4的表达均有所下降（p<0.05）,与M组比较各实验组CXCR4的表达无显着性差异。两方单用相互比较无显着差异,但联用EPC后,B组上调SDF-1蛋白的作用显着高于X组（p<0.05）。在上调血管SDF-1的表达方面,补阳还五汤联合EPC具有协同作用,血府逐瘀汤联合EPC具有相加作用。6.与M组比较,各组αvβ3的表达增加（p<0.05）,其中B组显着增加（p<0.01）;与E组比较,单用两类活血方组αvβ3降低（p<0.05）;与b组比较,B组αvβ3的表达增加（p<0.05）。与M组比较,各实验组αvβ5的表达增加（p<0.05）,但各实验组之间的比较无差异（p>0.05）。两方单用相互比较差异不大,但联用EPC后,B组在上调αvβ3的表达方面显着优于X组（p<0.05）。在调节αvβ3的表达方面,补阳还五汤联合EPC具有相加作用。7.与M组比较,b组、B组、X组PI3K蛋白表达增强（p<0.05）;与单独药物组比较,B、X组PI3K蛋白表达增强（p<0.01或p<0.05）;与E组比较,B、X组PI3K蛋白表达增强（p<0.05）。与M组比较,各实验组p-AKT表达增强（p<0.05或p<0.01）;与E组比较,B、X组p-AKT表达显着增强（p<0.01）;与单用两类活血方组比较,B、X组p-AKT表达显着增强（p<0.01）。两方单用相互比较,b组在上调PI3K蛋白表达方面略高于组（p<0.05）,但两方联用EPC后比较无差异。补阳还五汤和血府逐瘀汤联合EPC在上调PI3K、磷酸化Akt蛋白方面均有协同作用。结论:1.优化后的密度梯度离心法能成功获取EPC,原代培养14天的EPC细胞为输注的最佳时机,EPC用DAPI标记可进行长效示踪。2.两类活血方能显着促进EPC修复损伤的血管内皮。两方比较补阳还五汤的修复作用优于血府逐瘀汤。3.补阳还五汤和血府逐瘀汤一是可通过上调SDF-1和avβ3的表达促进EPC的归巢,二是可通过激活PI3K/Akt信号通路,促进EPC分化与增殖,从而达到修复损伤血管内皮的作用。
周华军[6]（2011）在《凝血酶启动脑出血后血管新生的作用机制研究》文中认为背景和目的：脑出血（intracerebral hemorrhage, ICH）是一种常见且严重的脑卒中类型,其具有很高的发病率、致死率和致残率。但是目前除了外科手术清除血肿和内科脱水降颅内压外,尚无其它有效的治疗方法来改善脑出血造成的神经功能缺失。血管新生是指从原有的血管上生出新的毛细血管。本课题组近年来首次证实胶原酶诱导的脑出血血肿区存在明显的血管新生,可能为损伤神经元的修复、突触重建创造良好的微环境,并有利于药物直达病灶,充分发挥药物效应。然而脑出血后血管新生的启动机制尚不明确。凝血酶（thrombin）是一种多功能丝氨酸蛋白酶。体内外实验均证实凝血酶具有促进肿瘤血管新生的作用,并能上调许多血管新生调控因子的表达。目前关于凝血酶对脑出血后血管新生的作用国内外尚未见报道。因此,本研究拟从凝血酶角度探讨脑出血后血管新生的启动机制,并进一步研究凝血酶对血管新生调控因子缺氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-la, HIF-1α）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）、促血管生成素-1（angiopoietin-1, Ang-1）、Ang-2、基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase, MMP-2）、MMP-9和整合素（integrin） avβ3表达的影响,以初步阐明凝血酶启动脑出血后血管新生的作用机制,将为临床和基础探索治疗脑出血提供新的观念和思路。方法：本研究主要分为2个部分。（1）立体定位向脑内苍白球注入大鼠自体动脉血（100μL）复制脑出血模型。假手术组注入等体积生理盐水。脑出血+水蛭素组在注入自体动脉血同时注入水蛭素5U。腹腔注射5-溴-2’-脱氧尿苷（5-bromo-2-deoxyuridine, BrdU）进行标记。采用免疫组织化学方法检测脑出血后BrdU+/von Willebrand factor+（vWF）标记的新生血管密度变化及HIF-1α、VEGF、Ang-1、Ang-2、MMP-2、MMP-9和整合素av(33的时空分布。分别运用荧光定量PCR和Western blot技术检测脑出血后HIF-1α、VEGF、Ang-1、Ang-2、MMP-2、MMP-9和整合素αvβ3 mRNA和蛋白表达。（2）1U凝血酶立体定位注入右侧苍白球制作凝血酶模型,并腹腔注射BrdU标记。采用免疫组化方法检测凝血酶损伤区BrdU-/vWF+标记新生血管密度变化和HIF-1α、VEGF、Ang-1、Ang-2、MMP-2、MMP-9和整合素αvβ3的时空分布。结果：免疫组化结果显示：假手术组各时间点未见BrdU、HIF-1α、Ang-2、MMP-2、MMP-9和整合素αvβ3的表达,偶见散在微弱的VEGF和Ang-1阳性血管。脑出血后3天血肿周围即可以见到BrdU+/vWF+标记的细胞核,且持续增高至14天。在血肿周围可见大量HIF-1α、VEGF、Ang-1、Ang-2、MMP-2、MMP-9和整合素avP3阳性血管；且HIF-1αVEGF、Ang-1、Ang-2、MMP-2、MMP-9和整合素αvβ3均表达于vWF阳性的血管内皮细胞；荧光定量PCR结果显示：脑出血后3天VEGF. Ang-1、Ang-2、MMP-2、MMP-9、整合素αv和β3 mRNA表达均较假手术组明显升高。VEGF. Ang-1、整合素αv和(33 mRNA的表达持续增高至14天,而Ang-2、MMP-2和MMP-9 mRNA的表达随后开始下降。HIF-1αmRNA在各组各时间点之间的表达无明显差异。Western blot结果显示：脑出血后3天HIF-1α、VEGF、Ang-1、Ang-2蛋白表达也较假手术组明显增高。HIF-1α和Ang-2蛋白表达从7天开始明显降低,VEGF和Ang-1蛋白表达则持续增高至14天。在采用水蛭素干预后,BrdU+/vWF+标记的细胞核明显减少,而且血肿周围组织HIF-1α、VEGF、Ang-1、Ang-2、MMP-2、MMP-9和整合素αvβ3的表达均明显降低。应用1U凝血酶注入大鼠苍白球,在其损伤区可检测到BrdU标记的vWF阳性扩张血管,且双标细胞核逐渐增多,一直持续到7天。同时在凝血酶损伤区周围存在HIF-1α、VEGF、Ang-1、Ang-2、MMP-2、MMP-9和阳性整合素αvβ3阳性血管段。结论：1.凝血酶是启动脑出血后血管新生的主要因素之一。2.凝血酶可能通过上调HIF-1α、VEGF、Ang-1、Ang-2、MMP-2、MMP-9和整合素αvβ3的表达,从而启动脑出血后血管新生过程。
辛冰牧[7]（2008）在《调节肾组织免疫微环境预防和逆转肾纤维化》文中研究表明慢性肾病导致终末肾病（ESRD）仍然是威胁公众健康的主要疾病。肾纤维化不仅是所有慢性肾病的基本病理改变,也是慢性肾病导致ESRD的主要原因。肾纤维化表现为细胞外基质过度积聚,进行性取代肾实质组织因而导致肾功能进行性降低。大量的研究表明,免疫反应在肾纤维化的形成和发展中发挥了重要作用,调节免疫反应可能是改变肾纤维化病程的重要途径。我们使用单侧输尿管结扎肾纤维化模型,分别探讨了具有免疫调节作用的真菌多糖CFX和TLR9激动剂CpG的潜在抗肾纤维化作用和机制。体外实验发现,发酵真菌多糖复合物CFX不仅活化肾小管上皮细胞TLRs,同时也有抗氧化应激反应的作用。造模前7天给予CFX（3g/kg/天）,明显预防UUO诱导的肾纤维化病变。CFX防止UUO所致肾纤维化的作用与其抑制UUO引起的炎症反应、减轻UUO肾脏的氧化应激损伤、降低成纤维细胞的活化、减少促纤维化细胞因子的分泌、阻断TGF-β1/Smad3、TAK及p38信号通路以及抑制凋亡信号的活化等相关。我们的研究证明CFX对已形成的肾纤维化也有显着抑制作用。UUO后第4天以不同剂量的CFX（3g/kg或1g/kg）治疗动物至UUO后14天,CFX上调脾脏组织Th1/Th2比值；治疗至UU021天时,CFX明显减少CD206+M2型巨噬细胞数量。CFX降低肾脏促纤维化和抑制性细胞因子TGF-β1的表达,降低其信号分子Smad3的表达及活性,增加IFN-γ/TGF-β1表达比值；抑制抑制性信号分子Stat3的表达。CFX的抗纤维化作用还与其调节多种炎症信号包括MAPKs及NF-KB活性相关。在第二部分工作中,使用同样的肾纤维化动物模型,我们研究了TLR9配基CpG对UUO诱导的肾纤维化病变的作用。我们发现造模前给予刺激Thl免疫反应的CpG显着降低受损肾脏组织的巨噬细胞浸润,显着抑制肾组织表达的促纤维化细胞因子TGF-β1和PAI-1,抑制Th2型细胞因子IL-13的表达,明显减轻肾纤维化病变程度。即使在形成确定的纤维化病变后再给予CpG也能显着逆转UUO诱导的肾纤维化病变。TLR9配基CpG逆转UUO诱导的肾纤维化病变与其调节组织免疫微环境作用相关：UUO诱导肾纤维化主要是由于它导致肾脏组织形成抑制性Th2和M2细胞免疫微环境,CpG显着抑制肾组织Th2细胞因子表达,降低抑制性信号分子Stat3的表达,调节与Th1/Th2平衡相关的MAPK信号表达。我们的研究表明,使用免疫激动剂改变纤维化组织免疫微环境是防治组织纤维化的新途径和方法,具有免疫刺激作用的CFX和TLR9激动剂具有极大潜力开发成为逆转肾纤维化、防治慢性肾病,特别是ESRD的药物。
朱洁[8]（2008）在《FAK信号通路在脉络膜新生血管发生中的作用》文中研究指明研究背景脉络膜新生血管（choroidal neovascularization,CNV）是年龄相关性黄斑变性（age related macular degeneration,AMD）导致视力丧失的最主要的原因之一,其发病机制至今尚不十分清楚。视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE）细胞可以通过调节自身多种基因的表达,对缺氧和代谢变化等周围环境的刺激产生快速的应答。在CNV发生的启始阶段,RPE细胞分泌细胞因子和生长因子,促进CNV的生成。随后,增生的脉络膜血管穿破Bruch膜生长至RPE和/或视网膜下,形成CNV。CNV的发生机制十分复杂,受到生长因子和细胞黏附信号等多种因素的影响。参与调控CNV生成的RPE细胞接受多种来源的信号,如可溶性细胞因子信号和细胞外基质（extracellular matrix,ECM）信号等。黏着斑激酶（focal adhesion kinase,FAK）,一种非受体型酪氨酸激酶,在细胞骨架和整合素/细胞因子受体信号的链接中发挥重要的作用,并参与调控细胞增生、存活、移行和分化等细胞进程。ECM和可溶性细胞因子均可活化FAK。进来的研究还表明,FAK参与了新生血管的应答,并且在病理性视网膜新生血管发生中发挥重要的调控作用。然而,FAK在CNV发生中的作用尚未见相关报道。目的和内容探讨FAK在CNV发生中的作用,进一步阐明CNV的发生机制。在建立激光诱导的大鼠CNV模型基础上,观察FAK的表达与CNV生成的相关性;体外观察多种已知与CNV生成相关的危险因素的作用下,培养的人RPE细胞中FAK的表达;运用小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）特异性抑制RPE细胞FAK的表达,观察FAK信号通路在CNV发生中的作用。方法⑴激光击穿Bruch膜,建立挪威（Brown Norway,BN）大鼠CNV模型。分别于激光光凝后1、3、7和14天,免疫荧光和Western blot方法观察大鼠CNV中FAK的表达;⑵体外原代培养人RPE细胞,分别暴露于缺氧、H2O2氧化衰老、ECM成分和吞噬光感受器外节膜盘（out segment of photoreceptors,POS）等刺激因素。Western blot方法观察RPE细胞中FAK的表达;⑶运用siRNA技术特异性抑制RPE细胞FAK的表达,RT-PCR、Western blot和ELISA等方法观察缺氧条件下RPE细胞缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的表达;⑷原代培养牛脉络膜微血管内皮细胞（choroidal endothelial cells,CEC）,建立RPE-CEC共培养体系。采用MTT和结晶紫染色等方法观察特异性抑制FAK表达的RPE细胞对CEC增生和移行的影响。结果⑴在激光诱导的BN大鼠CNV生成早期（光凝后1d、3d）,RPE-脉络膜复合体中FAK表达显着升高,随后表达逐渐下降。免疫荧光检测显示,FAK的表达上调主要定位于参与CNV生成的RPE细胞中;⑵体外实验表明,目前已知的多种与CNV生成相关的影响因素,如缺氧、氧化衰老、POS代谢产物在胞内堆积以及Bruch膜破裂导致的RPE与ECM成分的接触等,均可不同程度上调RPE细胞内FAK的表达;⑶成功构建了pSilencer/FAK表达载体,通过脂质体介导转染RPE细胞可有效下调FAK的表达。运用siRNA特异性抑制RPE细胞FAK的表达后,可以显着抑制缺氧诱导的RPE细胞HIF-1α和VEGF的表达上调;⑷成功原代培养牛CEC细胞,利用细胞共培养体系观察到RPE细胞与CEC共培养可以刺激CEC的增生和移行,缺氧条件下刺激作用增强。而运用siRNA特异性抑制RPE细胞FAK的表达后,可以显着抑制缺氧条件下RPE细胞对CEC增生和移行的诱导作用。结论本研究首次证实FAK信号参与了激光诱导的大鼠CNV的生成,提示CNV发生早期,活化的RPE细胞内FAK表达的上调参与CNV生成的调控。体外实验表明,多种已知与CNV生成相关的刺激因素均可不同程度上调RPE细胞FAK的表达,进一步提示FAK在CNV发生过程中可能发挥重要调控作用。特异性抑制RPE细胞FAK的表达,可以显着抑制缺氧诱导的RPE细胞HIF-1α和VEGF的表达上调,并进而抑制CEC增生和移行,进一步明确了FAK对CNV生成的调控作用。综上,FAK信号参与了CNV生成过程的调控,此类研究在国内外尚未见报道。针对FAK的siRNA可以抑制CNV生成,这将为临床防治CNV性疾病提供新思路。
刘楠[9]（2007）在《党参成分对大鼠脑微血管内皮细胞缺氧/缺糖损伤的保护作用与机制》文中认为1实验目的脑是人体对缺氧最为敏感的器官,脑组织缺血（ischemia）,将会导致局部脑组织及其功能的损害。微血管内皮细胞是脑缺血性损害的重要靶点之一。微血管内皮细胞是血脑屏障重要组成部分,缺血后的脑微血管内皮细胞损伤直接导致血脑屏障破坏,引起脑血管通透性增高和血管源性脑水肿,并最终导致脑神经细胞损伤。近年来,有学者提出了“神经血管单元”的概念。“神经血管单元”由神经细胞、内皮细胞、星形胶质细胞三类主要细胞及位于它们周围的维持大脑组织完整性的细胞外基质组成,在脑缺血后应作为一个整体来综合考虑。既往缺血性脑血管病的研究一直主要集中于神经细胞,而对内皮细胞的关注不够。研究发现仅仅激活内源性神经再生的效果并不满意,如果更加重视对内皮细胞的保护,可能取得更好的临床疗效。所以,研究缺血后脑血管内皮细胞的损伤机制并寻找出行之有效的减轻损害的方法,对于缺血性脑血管病的预防及治疗有重要的意义。中风病为现代医学重大疾病之一,现代医学治疗尚不理想。由于对缺血性中风病急性期起关键作用的病理因素和病理环节认识不同,中医治疗多强调祛痰、调化瘀、痰瘀同治、调通腑、清热解毒,多以祛邪为主要治则,忽略了对人体正气的顾护。为此,本课题组提出了中风病急性期的“扶正护脑”治则,主张在祛邪护脑治疗的同时及早采用扶正固本法则,顾护人体正气,拓宽了缺血性中风病急性期的中医治疗思路。在中风病急性期采用“扶正护脑”治则及其治法方药,符合仲景“未虚先防,已虚防变”的治疗思想。中药党参,为扶正固本、益气类的临床常用代表药。既往临床和实验研究证实了桔梗科党参及其成分有较好的脑保护作用,本实验室以往研究证明党参3种成分:党参总皂苷、党参皂苷L-1、党参SFE提取物对大鼠脑神经元、星形胶质细胞缺氧/缺糖损伤具有显着保护作用。本课题采用大鼠脑微血管内皮细胞缺氧/缺糖模型模拟缺血损伤,以LDH、NO、SOD、MDA、细胞坏死率、凋亡率、凋亡蛋白酶Caspase-3活化等指标评价确定党参3种成分:党参总皂苷、党参皂苷L-1、党参SFE提取物对脑微血管内皮细胞缺氧/缺糖损伤的影响,探讨3种党参成分对脑微血管内皮细胞缺氧/缺糖损伤的保护作用,并初步探索了其作用机制,为中风病急性期“扶正护脑”治则和中药党参成分用于中风病急性期临床治疗提供初步实验依据,为中医药治疗中风病急性期开辟了一个新的思路。2实验方法2.1原代分离、纯化、培养大鼠脑微血管内皮细胞,并采用形态学、免疫细胞化学（Ⅷ因子相关抗原阳性）技术鉴定细胞。2.2通过形态学观察和MTT实验,检测不同终浓度的党参总皂苷、党参皂苷L-1、党参成分SFE提取物,分别在正常培养状态下对大鼠脑微血管内皮细胞活性的影响,并确定各药物的最佳浓度。2.3采用化学方法检测缺氧/缺糖损伤细胞上清液LDH漏出率（常规生化学方法）、NO（硝酸还原酶法）和MDA的含量（硫代巴比妥酸法）以及SOD的活力（黄嘌呤氧化酶法）。2.4采用Hoechst 33342和PI双染法荧光显微镜检测缺氧/缺糖损伤后不同终浓度的不同党参成分对细胞的凋亡率和坏死率的影响。2.5采用免疫细胞化学方法和图象半定量分析技术测定缺氧/缺糖损伤后不同终浓度的不同党参成分对大鼠脑微血管内皮细胞Caspase-3表达的平均光密度。2.6实验结果采用SPSS10.0进行数据统计和方差分析。3.实验结果3.1通过两次过筛法选得微血管段,从微血管段消化下来的细胞单层融合生长,Ⅷ因子相关抗原阳性,证实我们分离培养的细胞为大鼠脑微血管内皮细胞;3.2细胞存活率（%）:与模型组比较,尼莫地平组、党参总皂苷中、低终浓度组、党参皂苷L-1低终浓度组,党参成分SFE提取物低终浓度组有显着疗效,与模型组比较（P<0.01）;3.3原位双染法细胞坏死率（%）与凋亡率（%）:3.3.1坏死率（%）:与模型组比较,尼莫地平组、党参总皂苷中、低终浓度组、党参皂苷L-1低终浓度组、党参成分SFE提取物低终浓度组有差异,差异具有显着统计学意义。与模型组比较（P<0.01）;3.3.2凋亡率（%）:①与模型组比较,尼莫地平组、党参总皂苷中终浓度组、党参皂苷L-1低终浓度组,有差异,差异具有显着统计学意义。与模型组比较（P<0.01）;②与模型组比较,党参皂苷L-1中终浓度组、党参成分SFE提取物低终浓度组有差异,差异具有统计学意义。与模型组比较（P<0.05）;3.4 LDH漏出率（%）:①与模型组比较,尼莫地平组、党参总皂苷中、低终浓度组、党参皂苷L-1低终浓度组、党参成分SFE提取物低终浓度组有差异,差异具有显着统计学意义。与模型组比较（P<0.01）;②与模型组比较,党参皂苷L-1中终浓度组、党参成分SFE提取物中终浓度组有差异,差异具有统计学意义。与模型组比较（P<0.05）;3.5 NO含量（μmol/L）:与模型组比较,尼莫地平组、党参总皂苷中、低终浓度组、党参皂苷L-1低终浓度组,党参成分SFE提取物低终浓度组有差异,差异具有显着统计学意义。与模型组比较（P<0.01）;3.6 SOD活性（U/mL）和MDA含量（nmol/mL）:3.6.1 SOD活性（U/mL）:①与模型组比较,尼莫地平组、党参总皂苷中终浓度组、党参皂苷L-1低终浓度组、党参成分SFE提取物低终浓度组有差异,差异具有显着统计学意义。与模型组比较（P<0.01）;②与模型组比较,党参总皂苷低终浓度组、党参皂苷L-1中终浓度组、党参成分SFE提取物中终浓度组有差异,差异具有统计学意义。与模型组比较（P<0.05）;3.6.2 MDA含量（nmol/mL）:①与模型组比较,尼莫地平组、党参总皂苷中终浓度组、党参皂苷L-1低终浓度组、党参成分SFE提取物低终浓度组有差异,差异具有显着统计学意义。与模型组比较（P<0.01）;②与模型组比较,党参总皂苷低终浓度组、党参皂苷L-1中终浓度组、党参成分SFE提取物中终浓度组有差异,差异具有统计学意义。与模型组比较（P<0.05）;3.7 caspase-3蛋白表达表达的影响:①与模型组平均光密度比较,尼莫地平组、党参总皂苷中、低终浓度组、党参皂苷L-1中、低终浓度组、党参成分SFE提取物低终浓度组有差异,差异具有显着统计学意义。与模型组比较（P<0.01）;②与模型组平均光密度比较,党参成分SFE提取物中终浓度组有差异,差异具有统计学意义。与模型组比较（P<0.05）。4实验结论大鼠脑微血管内皮细胞缺氧/缺糖模型能很好的模拟脑缺血损伤。缺氧/缺糖损伤能显着提高细胞上清液LDH的漏出率、NO和MDA含量,同时能显着降低SOD的活力;能够显着增加细胞的死亡率、凋亡率及凋亡蛋白酶Caspase-3的活性。而中药党参的有效成分可以阻断上述损伤机制,保护脑微血管内皮细胞,减轻脑组织缺血/缺氧性的损伤。实验结果说明:①党参总皂苷中、低终浓度组,党参皂苷L-1低终浓度组,党参成分SFE提取物低终浓度组有显着疗效,与模型组比较（P<0.01）;②党参皂苷L-1中终浓度组,党参成分SFE提取物中终浓度组也有疗效,但不如上述组,与模型组比较（0.01<P<0.05）;③党参总皂苷高终浓度组,党参皂苷L-1高终浓度组无保护作用,与模型组比较（P> 0.05）;④并且党参成分SFE提取物高终浓度组可能还会加重缺氧/缺糖对大鼠脑微血管内皮细胞的损伤,与模型组比较（P<0.01）。
孙秀梅[10]（2006）在《实验性牙齿移动过程中牙周组织中整合素αVβ3的表达变化及弱激光照射的影响》文中研究指明目的:通过原位杂交方法检测正畸加力后不同时间牙周组织中整合素αVβ3的表达,探讨整合素αVβ3在实验性牙移动牙周组织改建中的作用,结合已有的系列研究进一步揭示弱激光促进正畸牙周组织改建的机理。方法:35只大耳白兔随机分为7组。除对照组外,均以兔上颌切牙为支抗牙,80 g力拉上颌第一磨牙向近中移动。用He-Ne激光照射兔右侧颊部皮肤,除1天、3天组分别照射1次、3次外,其余各组连续照射5次,每天1次。分别于0、1、3、5、7、14、21天经多聚甲醛灌注后处死动物。制作组织切片,行HE染色及原位杂交染色。用图像分析法进行半定量分析。结果:在未加力组及加力各组牙周组织中整合素αVβ3均有表达。未加力组与加力组各时相骨细胞均为阴性表达,破骨细胞、成骨细胞前体及成熟的成骨细胞不同程度阳性表达。未加力组成纤维细胞弱阳性表达,少量新生的毛细血管内皮细胞阳性表达,成熟血管内皮细胞未见表达。加力组加力1天整合素αVβ3表达开始升高,至第5天达高峰。与未照射侧相比,照射侧压力区第1天时整合素αVβ3表达明显低于对照侧,而在第3天到第5天时明显高于未照射侧;照射侧张力区从第1天到第5天时整合素αVβ3表达较未照射侧明显升高。另外成牙骨质细胞、破牙骨质细胞及马拉萨斯上皮剩余细胞也表达整合素αVβ3。结论:整合素αVβ3参与了正畸牙周组织的血管化与骨改建的过程,弱激光照射能有效地促进正畸牙周组织中整合素αVβ3的表达,从而促进正畸牙周组织的血管化及骨改建过程。整合素αVβ3参与牙骨质的改建,参与马拉萨斯上皮功能。
二、缺氧、氧化损伤对培养人TEC整合素α3表达的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、缺氧、氧化损伤对培养人TEC整合素α3表达的影响（论文提纲范文）
（1）益气活血中药联合骨髓间充质干细胞促进缺血性脑卒中血管新生的作用与机制（论文提纲范文）
| 0引言Introduction |
| 1 资料和方法Data and methods |
| 1.1 文献检索和筛选要求 |
| 1.2 文献筛选标准 |
| 1.3 质量评估及数据的提取 |
| 2 结果Results |
| 2.1 血管新生的概念和影响因素 |
| 2.2 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对缺血性脑卒中血管新生的影响 |
| 2.2.1 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对血管内皮生长因子及血管内皮生长因子A的影响 |
| 2.2.2 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对缺氧诱导因子1α的影响 |
| 2.2.3 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对血管生成素的影响 |
| 2.2.4 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对脑源性神经营养因子的影响 |
| 2.2.5 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对碱性成纤维细胞生长因子的影响 |
| 2.2.6 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对整合素αvβ3的影响 |
| 2.2.7 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对基质金属蛋白酶9的影响 |
| 2.2.8 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对Wnt信号通路的影响 |
| 2.2.9 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对Notch信号通路的影响 |
| 2.2.1 0 益气活血类中药联合骨髓间充质干细胞对PI3K/Akt信号通路的影响 |
| 3 小结Conclusions |
（2）RCCS模拟微重力对人表皮干细胞生长特性和代谢组学影响的研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 RCCS模拟微重力对人表皮干细胞的细胞增殖、细胞周期和细胞超微结构的影响 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 第二部分 RCCS模拟微重力环境下人表皮干细胞代谢组学的研究. |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
| 综述一 表皮干细胞的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 失重环境对消化系统创伤和应激损伤及修复研究进展 |
| 参考文献 |
（3）Sema7A调控动脉粥样硬化斑块形成的机制和转化研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 1 动脉粥样硬化概述、发病学说及调控因素 |
| 1.1 动脉粥样硬化概述 |
| 1.2 动脉粥样硬化发病机制学说 |
| 1.3 动脉粥样硬化中各炎症细胞的作用 |
| 2 血流剪切力与动脉粥样硬化 |
| 3 轴突导向分子与动脉粥样硬化的关系 |
| 3.1 轴突导向分子及其受体的概念 |
| 3.2 轴突导向分子Semaphorin7A的结构与功能 |
| 3.3 Semaphorin7A在炎症反应中的作用 |
| 3.4 Sema7A在动脉粥样硬化中的作用的初步探究 |
| 材料与方法 |
| 一、实验材料 |
| 1.实验小鼠 |
| 2.实验试剂 |
| 3.En face染色 |
| 4.Western Blot |
| 5.基因克隆 |
| 6.骨髓移植（BMT，bone marrow transplantation） |
| 7.冰冻切片 |
| 8.免疫荧光染色 |
| 9.Elisa试剂盒 |
| 10.其他主要试剂及耗材 |
| 二、实验仪器 |
| 三、实验方法 |
| 3.1 动脉粥样硬化小鼠模型的建立 |
| 3.2 组织样本制备组织RNA、蛋白提取 |
| 3.3 颈动脉的动脉粥样硬化斑块分析(苏丹红Ⅳ染色) |
| 3.4 Enface染色 |
| 3.5 颈动脉部分结扎手术 |
| 3.6 嵌合子小鼠制备-小鼠骨髓移植手术 |
| 3.7 颈动脉内皮-白细胞粘附实验 |
| 3.8 胸主动脉内皮-单核细胞粘附实验 |
| 3.9 肠系膜白细胞滚动与粘附实验 |
| 3.10 内皮细胞培养和流动腔设置 |
| 3.11 人Sema7AcDNA克隆 |
| 3.12 Sema7A过表达HUVECs构建 |
| 3.13 细胞免疫荧光(LCMS) |
| 3.14 流式细胞术 |
| 3.15 静态条件下体外THP-1细胞与HUVEC的粘附 |
| 3.16 人源动脉粥样硬化斑块内Sema7A免疫荧光染色 |
| 3.17 统计分析 |
| 3.18 人类样品ELISA检测 |
| 结果 |
| 第一章 Sema7A参与动脉粥样硬化的机制的研究 |
| 1.1 Sema7A响应血液扰动流,在血液扰动流处高表达,而在血液稳定层流处相对低表达 |
| 1.2 Sema7A敲除减少血液扰动流诱导的内皮细胞ICAM-1和VCAM-1表达,白细胞滚动粘附和动脉粥样硬化斑块形成 |
| 第二章 Sema7A参与调控内皮细胞表型变化的机制研究 |
| 2.1 Sema7A过表达通过β1整合素途径增强HUVECs中ICAM-1和VCAM-1的表达和单核细胞-内皮细胞相互作用 |
| 2.2 内皮细胞Sema7A在促进ApoE-/-小鼠的白细胞粘附和斑块形成中起主要作用 |
| 第三章 Sema7A与动脉粥样硬化临床性研究 |
| 分析讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 |
| 参加的国际/内会议及摘要 |
| 参加的科研课题及基金项目 |
| 中英文缩略词 |
| 致谢 |
（4）整合素在间充质干细胞肺阻塞中的作用及对迁徙的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要英文缩略词对照表 |
| 第1章 前言 |
| 1.1 间充质干细胞及整合素的概述 |
| 1.1.1 间充质干细胞简介 |
| 1.1.2 间充质干细胞的体外培养 |
| 1.1.3 整合素概述 |
| 1.2 干细胞的移植方法及存在问题 |
| 1.3 间充质干细胞静脉注注射后在体内的分布 |
| 1.4 整合素在间充质干细胞中的表达水平研究 |
| 1.5 间充质干细胞的迁徙 |
| 1.6 整合素对迁徙的影响 |
| 1.7 间充质干细胞肺滞留的机制 |
| 1.8 研究目的和内容 |
| 1.8.1 研究目的 |
| 1.8.2 研究内容 |
| 1.9 论文结构 |
| 第2章 实验材料与方法 |
| 2.1 实验小鼠 |
| 2.2 主要实验材料 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 细胞生物学实验方法 |
| 2.3.2 分子生物学实验方法 |
| 2.3.3 动物模型实验方法 |
| 第3章 整合素在间充质干细胞中的表达 |
| 3.1 本章引言 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 三维立体培养的间充质干细胞的生长潜能及存活性的分析 |
| 3.2.2 间充质干细胞表面整合素的表达分析 |
| 3.2.3 间充质干细胞和白细胞对于FAK和p-FAK的表达分析 |
| 第4章 整合素的配体在内皮细胞的表达 |
| 4.1 本章引言 |
| 4.2 整合素的配体在内皮细胞表面的表达 |
| 4.2.1 纤维粘连蛋白和玻连蛋白在肺血管内皮细胞表面的表达 |
| 4.2.2 纤维粘连蛋白和玻连蛋白在小鼠肺脏组织内皮细胞表面的表达 |
| 4.3 间充质干细胞静脉注射后与小鼠肺血管的关系 |
| 4.4 间充质干细胞与肺组织整合素配体结合的定位 |
| 4.5 小结 |
| 第5章 整合素调节间充质干细胞对内皮细胞的粘附 |
| 5.1 功能性阻断抗体饱和浓度的确定 |
| 5.1.1 游离的RGD短肽处理间充质干细胞后对细胞粘附作用的影响 |
| 5.1.2 特异性功能阻断抗体饱和浓度的确定 |
| 5.2 功能性阻断抗体处理后对细胞存活性的影响及抗体作用的一过性 |
| 5.3 整合素调控间充质干细胞对内皮细胞的粘附 |
| 5.3.1 整合素功能性阻断对间充质干细胞粘附内皮细胞的影响 |
| 5.3.2 整合素功能性阻断对间充质干细胞粘附TNF-α 激活的内皮细胞的影响 |
| 5.4 小结 |
| 第6章 阻断整合素降低间充质干细胞的肺阻塞 |
| 6.1 实时荧光定量PCR标准曲线的制作 |
| 6.2 整合素阻断的间充质干细胞注射后在肺中的分布及数量定量 |
| 6.3 整合素阻断的间充质干细胞注射后在血液和其他组织中的分布 |
| 第7章 阻断整合素增加间充质干细胞迁徙到损伤器官的数量 |
| 7.1 本章引言 |
| 7.2 间充质干细胞迁徙到达缺血心肌的能力研究 |
| 7.2.1 间充质干细胞迁徙到受损心脏中数量的研究 |
| 7.2.2 间充质干细胞在外周血和其他组织中的分布情况 |
| 7.3 间充质干细胞到达耳朵发炎区域的研究 |
| 7.4 小结 |
| 第8章 总结与展望 |
| 8.1 论文总结 |
| 8.2 论文展望 |
| 8.2.1 对整合素表达水平变化的思考 |
| 8.2.2 对间充质干细胞肺滞留分子机制的探讨 |
| 8.2.3 对提高间充质干细胞迁徙能力的探讨 |
| 8.2.4 对间充质干细胞应用于临床治疗的展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 |
（5）补阳还五汤、血府逐瘀汤联合EPC对血管内皮损伤修复作用的比较研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分 大鼠内皮祖细胞的分离培养及鉴定 |
| 1.1 材料和方法 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 主要试剂和仪器 |
| 1.1.3 细胞培养 |
| 1.1.4 细胞传代 |
| 1.1.5 细胞鉴定 |
| 1.1.6 EPC的标记 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 内皮祖细胞的生长情况 |
| 1.2.2 细胞鉴定 |
| 1.2.3 EPC的标记 |
| 1.3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 补阳还五汤、血府逐瘀汤联合EPC修复损伤血管内皮效应的比较研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要试剂和仪器 |
| 2.1.3 药材 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 两类活血方的制备 |
| 2.2.2 动物模型建立及分组给药 |
| 2.2.3 实验方法 |
| 2.3 统计学分析 |
| 2.4 结果 |
| 2.4.1 血管形态学观察 |
| 2.4.2 各组内膜厚度血管形态计量指标比较 |
| 2.4.3 内皮衰老的比较 |
| 2.4.4 各组血管内皮eNOS表达的比较 |
| 2.4.5 各组EPC的归巢和分化的比较 |
| 2.4.6 血脂、血钙的比较 |
| 2.4.7 两类活血方促进EPC归巢的机制研究 |
| 2.4.8 两类活血方促进EPC分化的机制研究 |
| 2.5 讨论 |
| 2.5.1 两类活血方的中医理论研究 |
| 2.5.2 两类活血方联合EPC修复损伤血管内皮的研究 |
| 2.5.3 两类活血方促进EPC修复损伤血管内皮的机制研究 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
（6）凝血酶启动脑出血后血管新生的作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩写词汇集表 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 仪器 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 动物模型的制作 |
| 2.2.2 动物分组 |
| 2.2.3 试剂配制 |
| 2.2.4 组织取材 |
| 2.2.5 免疫组织化学 |
| 2.2.6 荧光定量PCR |
| 2.2.7 Western blot |
| 2.2.8 统计学分析 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 脑出血后的血管新生及水蛭素的影响 |
| 3.2 脑出血后血管新生调控因子的表达及水蛭素的影响 |
| 3.2.1 HIF-1α的表达 |
| 3.2.2 VEGF的表达 |
| 3.2.3 Ang-1、Ang-2的表达 |
| 3.2.4 MMP-2和MMP-9的表达 |
| 3.2.5 整合素αvβ3的表达 |
| 3.3 凝血酶对正常大鼠脑内的血管新生及血管新生调控因子的影响 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 自体血脑出血模型复制 |
| 4.2 凝血酶对脑出血后的血管新生的影响 |
| 4.3 凝血酶对脑出血后血管新生调控因子表达的影响 |
| 4.3.1 HIF-1α的表达 |
| 4.3.2 VEGF的表达 |
| 4.3.3 Ang-1、Ang-2的表达 |
| 4.3.4 MMP-2和MMP-9的表达 |
| 4.3.5 整合素αvβ3的表达 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在校期间科研成果及发表论文 |
（7）调节肾组织免疫微环境预防和逆转肾纤维化（论文提纲范文）
| 缩略词表(Abbreviation) |
| 摘要 |
| Abstract |
| 综述 肾纤维化的发病机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 第一部分 真菌多糖CFX预防单侧输尿管结扎诱导的小鼠肾纤维化 |
| 摘要 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 1.CFX活化体外培养的肾小管上皮细胞 |
| 2.CFX阻断H2O2诱导的肾小管上皮细胞氧化应激反应 |
| 3.CFX预防UUO诱导的肾纤维化 |
| 4.CFX调节肾脏组织免疫微环境 |
| 5.CFX抑制肾组织氧化应激反应 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 真菌多糖CFX逆转单侧输尿管结扎诱导的小鼠肾纤维化 |
| 摘要 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 1.UUO诱导时间依赖性地肾纤维化病变 |
| 2.CFX逆转确立的肾纤维化 |
| 3.CFX抑制肾纤维化作用导致肾功能改善 |
| 4.CFX逆转肾纤维化组织的免疫抑制微环境 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 TLR9激动剂CpG预防和逆转UUO诱导的肾纤维化 |
| 摘要 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 1.CpG抑制体外培养的巨噬细胞分泌M2细胞因子及IL-17 |
| 2.CpG预防UUO诱导的肾纤维化 |
| 3.CpG降低炎症反应,调节肾纤维时抑制性免疫微环境 |
| 4.CpG逆转已形成的肾纤维化 |
| 5.CpG逆转肾纤维化是由于逆转抑制性免疫微环境 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（8）FAK信号通路在脉络膜新生血管发生中的作用（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 细胞外基质与脉络膜新生血管 |
| 黏着斑激酶与新生血管生成 |
| 正文 |
| 第一部分 FAK 在大鼠脉络膜新生血管中的表达 |
| 0 引言 |
| 1 主要材料、试剂和仪器 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 FAK 在人视网膜色素上皮细胞中的表达 |
| 0 引言 |
| 1 主要材料、试剂和仪器 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第三部分 FAK 低表达对视网膜色素上皮细胞HIF-1 活化和VEGF 表达的影响 |
| 0 引言 |
| 1 主要材料、试剂和仪器 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第四部分 FAK 低表达视网膜色素上皮细胞对脉络膜微血管内皮细胞增生和移行的影响 |
| 0 引言 |
| 1 主要材料、试剂和仪器 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 全文小结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 主要试剂配制 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（9）党参成分对大鼠脑微血管内皮细胞缺氧/缺糖损伤的保护作用与机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 综述 |
| 综述一 脑微血管内皮细胞的特点及其与脑缺血损伤的关系 |
| 综述二 缺血性脑血管病的病理机制及中药的脑保护作用 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 3种党参不同成分对大鼠脑微血管内皮细胞的细胞毒性实验 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验二 脑微血管内皮细胞缺氧/缺糖损伤模型的制备 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验三 不同终浓度的 3 种党参成分对 缺氧/缺糖时脑微血管内皮细胞活性的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验四 3种党参成分对脑微血管内皮细胞缺氧/缺糖损伤细胞坏死率和凋亡率的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验五 3种党参成分对脑微血管内皮细胞缺氧/缺糖损伤时 乳酸脱氢酶漏出率的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验六3 种党参成分对脑微血管内皮细胞缺氧/缺糖损伤时 NO含量的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验七 3 种党参成分对脑微血管内皮细胞缺氧/缺糖损伤时 SOD活性和MDA含量的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 实验八 3 种党参成分对脑微血管内皮细胞缺氧/缺糖损伤时CASPASE-3 表达的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 图片 |
（10）实验性牙齿移动过程中牙周组织中整合素αVβ3的表达变化及弱激光照射的影响（论文提纲范文）
| 引言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 致谢 |
| 导师和作者简介 |
| 发表文章 |
四、缺氧、氧化损伤对培养人TEC整合素α3表达的影响（论文参考文献）
- [1]益气活血中药联合骨髓间充质干细胞促进缺血性脑卒中血管新生的作用与机制[J]. 樊飞燕,张运克. 中国组织工程研究, 2021(13)
- [2]RCCS模拟微重力对人表皮干细胞生长特性和代谢组学影响的研究[D]. 李彬彬. 安徽医科大学, 2020(02)
- [3]Sema7A调控动脉粥样硬化斑块形成的机制和转化研究[D]. 胡淑鸿. 苏州大学, 2018(01)
- [4]整合素在间充质干细胞肺阻塞中的作用及对迁徙的影响[D]. 王珊. 清华大学, 2016(11)
- [5]补阳还五汤、血府逐瘀汤联合EPC对血管内皮损伤修复作用的比较研究[D]. 张伟. 湖南中医药大学, 2014(05)
- [6]凝血酶启动脑出血后血管新生的作用机制研究[D]. 周华军. 中南大学, 2011(12)
- [7]调节肾组织免疫微环境预防和逆转肾纤维化[D]. 辛冰牧. 北京协和医学院, 2008(12)
- [8]FAK信号通路在脉络膜新生血管发生中的作用[D]. 朱洁. 第四军医大学, 2008(01)
- [9]党参成分对大鼠脑微血管内皮细胞缺氧/缺糖损伤的保护作用与机制[D]. 刘楠. 北京中医药大学, 2007(02)
- [10]实验性牙齿移动过程中牙周组织中整合素αVβ3的表达变化及弱激光照射的影响[D]. 孙秀梅. 吉林大学, 2006(10)