一、乙型肝炎、丙型肝炎病毒感染与肝癌的病例对照研究（论文文献综述）
郭倩倩[1]（2020）在《乙型肝炎病毒感染与胰腺癌的风险和预后的meta分析》文中提出背景胰腺癌（PC）是一种消化系统常见的恶性肿瘤之一,5年生存率低于10%,预后较差。胰腺癌的病因尚不清楚,从而缺乏预防这种疾病的有效方法。但吸烟、糖尿病、肥胖、饮酒和胰腺癌家族史这些因素与胰腺癌发病密切相关。多年来人们对病毒在肿瘤病因所起的作用方面进行了大量的研究。虽然某些病毒与恶性肿瘤的关系没有得出一致的结论,但是仍有研究表明某些病毒确实与人类某些恶性肿瘤有关。目前至少有8种病毒已被证明与人的一些肿瘤相关,如乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒相关的原发性肝细胞癌,与人乳头瘤病毒相关的宫颈癌,Epstein-Barr病毒有关的Burkitt淋巴瘤和鼻咽癌,以及与人类免疫缺陷（HIV）病毒相关的卡波西肉瘤和非霍奇金淋巴瘤。研究表明乙型肝炎病毒感染与一些肿瘤的发生相关,如肝细胞癌、胆管细胞癌、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌等。同时,在一些肝外组织可发现乙型肝炎病毒的存在,例如肾脏、皮肤和胰腺。目的先前的一些研究已探讨过乙型肝炎病毒感染与胰腺癌发病风险的关系,但仍然存在争议,很少有研究探讨乙肝病毒感染与胰腺癌总生存之间的关系。最近,关于致癌病毒HBV和胰腺癌之间关系的流行病学研究越来越多,然而两者之间的关系仍然没有一致的结论。本研究旨在评估乙型肝炎病毒（HBV）感染与胰腺癌（PC）的发病风险和预后之间是否存在相关性。方法所有在2000年1月至2019年5月之间公开发表的相关研究都在Web of Science、EMBASE、PubMed、SpringerLink 和ScienceDirect 和万方数据库上进行了系统搜索。没有报告HBV和胰腺癌相关风险比或生存风险的研究被排除在外。纳入的研究采用Stata软件version 13.0进行分析。结果本研究共纳入9项病例对照研究和12项队列研究,研究结果表明,HBsAg血清阳性即乙肝病毒慢性携带者增加了胰腺癌的发病风险（HR=1.26 95%CI 1.14-1.38）。既往HBV感染与胰腺癌风险的增加呈正相关（HR=1.2095%CI1.11-1.30）。活跃HBV感染也增加了胰腺癌的发病风险（HR=2.3295%CI1.48-3.66）。慢性乙型肝炎携带者（HBsAg+）的OS低于既往未发生HBV感染的患者,死亡增加的风险（HR=1.32,95%CI:1.06-1.65）。结论乙肝病毒感染增加胰腺癌的发病风险。此外,与无HBV感染的患者相比,慢性HBV携带者（HBsAg+）是胰腺癌患者生存的不利预后因素。研究HBV病毒感染与胰腺癌预后的研究较少,未来需要更多的研究来证实两者关系,这可能对胰腺癌的预防和治疗都有深远的意义。
马宁[2]（2020）在《候选基因单核苷酸多态性与HBV慢性肝病发生发展的关联性分析及其生物学功能研究》文中研究指明第一部分候选基因单核苷酸多态性及其交互作用与HBV慢性肝病发生发展的关联性分析目的:本部分的研究目的:1.应用3种遗传模型分析干扰素及其受体系列基因（IFNA1、IFNA2、IFNA5、IFNL4、IFNLR1、IFNAR2）、氧化应激系列基因（CYBA、NCF4、NOX4、SOD2、GCLM）的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms,SNPs）及lnc-RP11-150O12.3外显子区的rs2275959位点和HBV慢性肝病发生发展的关联。2.分析同一染色体上物理位置接近的SNPs构成的单倍体型和HBV慢性肝病发生发展的关联。3.应用3种统计方法分析各个系列SNPs的交互作用和HBV慢性肝病发生发展的关联。方法:1. 候选基因SNPs的选择。Pubmed数据库检索功能SNPs或者区域,这些SNPs或者区域可能会影响和HBV感染有关基因的m RNA的转录、蛋白质的表达,继而影响HBV慢性肝病的发生发展。然后通过UCSC数据库和Ensemble数据库检索其具体物理位置和在中国北方汉族人群中的罕见等位基因频率（MAF）,Hapmap数据库查询单倍体型信息,SNPinfo Web Server预测SNPs的功能。共21个SNPs（IFNA1-rs1332190、rs1831583,IFNA2-rs649053,IFNA5-rs7031048、rs3758236,IFNAR2-rs1051393、rs12233338,IFNLR1-rs10903035、rs11249006、rs7525481、rs4649203,IFNL4-rs12971396、rs8113007、rs7248668,CYBA-rs4673,NCF4-rs1883112,NOX4-rs1836882、rs3017887,SOD2-rs4880,GCLM-rs41303970,RP11-150O12.3-rs2275959）纳入本研究。2.样本收集。从石家庄市第五医院以及河北医科大学第一、二、四附属医院中选择符合纳入标准的研究对象3128例,包括:阴性对照者（Negative Control,Ne C）840例,HBV自然清除者（Natural Clearance,NC）496例、慢性乙型肝炎（Chronic Hepatitis B,CHB）691例、HBV相关肝硬化（Liver Cirrhosis,LC）680例、HBV相关性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）患者421例,其中CHB组、LC组和HCC组统称为HBV相关肝病组（HBV-induced liver diseases,HLD）。抽取研究对象空腹静脉抗凝血备用,同时以问卷形式收集研究对象的基线资料、检查结果、患病情况。3.基因分型。从抗凝全血中提取DNA,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（Matrix Assisted Laser Desorption/ionization Time of Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF MS）检测方法对21个候选基因的SNPs进行分型检测。4.统计学分析。多组计量资料的比较采用单因素方差分析（正态分布且方差齐）或K-W H秩和检验（正态分布方差不齐/非正态分布）,两个或多个样本率或构成比的比较采用χ2检验。用非条件Logistic回归分析SNPs和疾病发生发展的关联性,并计算比值比（odds ratio,OR）和95%置信区间（95%confidence intervals,95%CI）。分析研究对象的基线资料与HBV慢性肝病发生发展的关系。应用共显性、显性和隐性模型分析21个SNPs与HBV慢性肝病易感性（HBV相关肝病组vs.阴性对照组）、HBV自然清除（HBV相关肝病组vs.HBV自然清除组）、HCC易感性（HCC组vs.LC+CHB组,HCC组vs.阴性对照组）的关联。以P≤0.05为差别有统计学意义,检验水准均为双侧,采用SPSS 21.0统计软件进行数据处理和分析。Haplo View软件进行单倍体型和疾病的关联分析。SNPStats软件对阴性对照个体21个位点的基因型频率行Hardy-Weinberg（H-W）平衡检验。广义多因子降维法（Generalized Multifactor Dimensionality Reduction,GMDR）、Logistic回归分析（相乘模型）、叉生分析法（相加模型）进行基因-基因交互作用分析。结果:1 21个SNPs的等位基因频率符合H-W遗传平衡定律（P>0.05）,证明研究对象具有群体代表性。2 干扰素及其受体系列基因单核苷酸多态性与HBV慢性肝病发生发展的关系2.1 与HBV慢性肝病易感性有关的SNPs位点以HBV慢性肝病作为病例组,阴性对照个体为对照组进行病例对照研究,将干扰素及其受体系列的14个位点连同吸烟、饮酒、性别、年龄共18个因素引入非条件Logistic逐步回归模型。结果显示共显性模型下有5个位点和HBV慢性肝病易感性有关,其中危险性SNPs有3个:IFNAR2-rs1051393GT/TT vs.GG（P=0.001,OR=1.430;P=0.006,OR=1.471）、IFNLR1-rs4649203GG vs.AA（P=0.002,OR=1.676）、IFNLR1-rs7525481TT vs.CC（P=0.002,OR=5.907）,保护性SNPs有2个:IFNLR1-rs11249006AG/GG vs.AA（P=0.000,OR=0.228;P=0.00234,OR=0.130）、IFNAR2-rs122333338CC vs.TT（P=0.003,OR=0.115）。显性模型中,有4个位点进入方程,其中危险因素有3个:rs1051393（GT+TT）、rs4649203（AG+GG）、rs7525481（CT+TT）,其OR值分别为1.372、1.222、3.975;保护性因素有1个:rs11249006（AG+GG）,OR=0.239。隐性模型中有2个位点进入方程:rs4649203GG和AA+AG比较属于危险因素:OR=1.478;rs122333338CC和TT+TC比较属于保护性因素:OR=0.185。以HBV慢性肝病作为病例组,阴性对照个体为对照组,IFNLR1基因附近的3个位点rs7525481＿T,rs10903035＿G和rs11249006＿G构成单体域,单倍体型TAA是HBV慢性肝病的危险因素（P=0.0038,OR=1.208）,CAG是疾病的保护性因素(P=3.428×10-32,OR=0.116)。GMDR结果提示rs7525481、rs11249006、rs10903035构成的3因子模型是和HBV慢性肝病相关的最佳互作模型,按照3因子交互组合将研究对象重新划分为患病的“高危”人群和“低危”人群,“高危”人群患病的风险是“低危”人群的2.186（1.672,2.858）倍。相乘交互作用结果提示rs7525481＿T和rs11249006＿A的主效应导致疾病发生的危险度分别是OR=2.258、OR=1,归因于二者的交互作用导致疾病发生的危险度为OR=1.240,故二者呈正相乘交互作用,致使疾病发生的可能性额外增加了0.240倍。和rs649053＿G的主效应导致疾病发生的危险度分别是OR=1.513、OR=1,归因于二者的交互作用导致疾病发生的危险度为OR=1.364,二者呈正相乘交互作用,致使疾病发生的可能性额外增加了0.364倍。rs7525481＿T和rs10903035＿G存在负相加交互作用,归因于两个位点的交互作用导致疾病发生的超额相对危险度是-2.67[RERI=-2.670（-4.670,-0.670）],两因素同时存在时（CT+TT、AG+GG）发病的危险性是它们各自单独存在时危险性之和的0.389倍[S=0.389（0.267,0.568）]。2.2 与机体清除HBV能力相关的SNPs位点以HBV慢性肝病组作为病例组,HBV自然清除组为对照组进行病例对照研究,将干扰素及其受体系列的14个位点连同吸烟、饮酒、性别、年龄共18个因素引入非条件Logistic逐步回归模型。结果显示仅1个位点和机体清除HBV的能力有关:显性模型中IFNLR1-rs4649203AG+GG和野生型纯合体AA相比,属于危险因素（P=0.008,OR=1.344）,携带AG及GG基因型的群体不易清除HBV。未发现与HBV清除能力相关的单倍体型。GMDR的方法未发现最佳交互模型。相乘交互作用结果提示rs1051393＿T和rs7031048＿G的主效应导致HBV持续感染的危险度均为1,归因于二者的交互作用导致疾病发生的危险度为OR=1.658,故二者呈正相乘交互作用,致使疾病发生的可能性额外增加了0.658倍。10对SNPs位点间未显示出基于相加模型的交互作用。2.3 与HBV相关性肝细胞癌（HBV-HCC）进展有关的SNPs位点以HBV-HCC为病例组,CHB及LC为对照组进行病例对照研究,将干扰素及其受体系列的14个位点连同吸烟、饮酒、性别、年龄共18个因素引入非条件Logistic逐步回归模型。共显性模型中有2个位点进入方程:携带rs1051393TT的个体比携带GG基因型的个体更容易由HBV慢性肝病发展为HCC（P=0.021,OR=1.497）;rs7248668GA和GG相比,属于危险基因型（P=0.002,OR=1.876）。显性模型中,仅1个位点进入方程:rs7248668GA+AA和GG相比属于危险因素,有更大的可能发展为HCC（P=0.006,OR=1.720）。隐性模型中有2个位点进入方程:rs1051393TT和GG+TG比较属于危险因素:（P=0.006,OR=1.512）;rs649053GG和AA+AG比较属于危险因素:（P=0.019,OR=1.421）。IFNL4基因附近的3个位点rs12971396＿G,rs8113007＿T和rs7248668＿A构成单体域,单倍体型GTA是HBV-HCC的危险因素（P=0.0362,OR=1.440）,CAG是保护性因素（P=0.0423,OR=0.721）。GMDR的方法未发现最佳交互模型。相乘交互作用结果提示rs1051393＿T和rs7031048＿G的主效应导致HBV-HCC发生的危险度均为1,归因于二者的交互作用导致疾病发生的危险度为OR=2.325,故二者呈正相乘交互作用,致使HCC发生的可能性额外增加了1.325倍。rs4649203＿A和rs7248668＿A的主效应导致HBV-HCC发生的危险度分别为OR=1、OR=1.774,归因于二者的交互作用导致疾病发生的危险度为OR=1.995,故二者呈正相乘交互作用,致使HCC发生的可能性额外增加了0.995倍。14对SNPs位点间未显示出基于相加模型的交互作用。3 氧化应激系列基因单核苷酸多态性与HBV慢性肝病发生发展的关系3.1 与HBV慢性肝病易感性有关的SNPs位点以HBV慢性肝病组作为病例组,阴性对照组为对照组进行病例对照研究,将氧化应激系列的6个位点连同吸烟、饮酒、性别、年龄共10个因素引入非条件Logistic逐步回归模型。共显性模型中有3个位点进入程:突变型杂合体rs4673AG和野生型纯合体GG相比,属于危险因素（P=0.01,OR=1.412）;携带rs1883112AG/GG的个体与携带AA基因型的个体相比更不易患病（P=0.011,OR=0.783;P=0.007,OR=0.672）;突变型纯合体rs41303970AA和野生型纯合体GG相比,属于危险因素（P=0.027,OR=1.951）。显性模型中,有3个位点进入方程,其中保护性因素有2个:rs1883112（AG+GG）、rs1836882（TC+CC）,其OR值分别为0.755、0.831;危险因素有1个:rs4673（AG+AA）,其OR值为1.358。隐性模型中有3个位点进入方程:rs1883112GG和AA+AG比较属于保护性因素:OR=0.755;rs4880GG和AA+AG比较属于保护性因素:OR=0.507;携带rs41303970AA的个体比携带AG+GG的个体容易患病:OR=1.991。未发现与HBV慢性肝病易感性相关的单倍体型。GMDR结果提示rs1883112、rs1836882、rs4880、rs3017887构成的4因子模型是和HBV慢性肝病相关的最佳互作模型,按照4因子交互组合将研究对象重新划分为患病的“高危”人群和“低危”人群,“高危”人群患病的风险是“低危”人群的2.029（1.479,2.782）倍。rs1836882＿A和rs1883112＿T在导致HBV慢性肝病发生中存在正相乘交互作用趋势（P=0.061,OR=1.200）。15对SNPs位点间未显示出基于相加模型的交互作3.2 与机体清除HBV能力相关的SNPs位点以HBV慢性肝病组作为病例组,HBV自然清除组为对照组进行病例对照研究,将氧化应激系列的6个位点连同吸烟、饮酒、性别、年龄共10个因素引入非条件Logistic逐步回归模型。结果显示仅1个位点和机体清除HBV的能力有关:共显性模型中突变型杂合体CYBA-rs4673AG和野生型纯合体GG相比,属于危险因素（P=0.045,OR=1.398）。该系列另5个位点均和HBV自发清除能力无关。3.3 与HBV-HCC进展有关的SNPs位点以HBV-HCC为病例组,CHB及LC为对照组进行病例对照研究,结果未发现与HBV-HCC有关的SNPs位点。4 RP11-150O12.3-rs2275959T与HBV慢性肝病发生发展的关系以CHB与LC为对照组,HCC为病例组,分析rs2275959T与HBV-HCC之间的相关性,结果表明共显性模型下CT、TT与CC相比均为HCC易感性的危险因素（P=0.016,OR=1.427;P=0.006,OR=1.561）;显性模型下CT+TT和CC相比是危险因素（P=0.005,OR=1.477）。以阴性对照组为对照组,HCC为病例组,共显性模型下该位点的TT与CC相比为HCC易感性的危险因素（P=0.003,OR=1.748）;显性模型下CT+TT和CC相比是危险因素（P=0.016,OR=1.463）;隐性模型下TT和CC+CT相比是危险因素（P=0.014,OR=1.459）。结论:1.干扰素及其受体系列有5个位点和HBV慢性肝病易感性有关,其中危险性SNPs有3个:IFNAR2-rs1051393T、IFNLR1-rs4649203G、IFNLR1-rs7525481T,保护性SNPs有2个:IFNLR1-rs11249006G、IFNAR2-rs122333338C。rs4649203G同时和HBV自然清除有关。IFNAR2-rs1051393T、IFNL4-rs7248668A、IFNA2-rs649053G是HBV-HCC的危险因素。2.IFNLR1基因附近的3个位点rs7525481＿T,rs10903035＿G和rs11249006＿G构成单倍体型TAA是HBV慢性肝病的危险因素。IFNL4基因附近的3个位点rs12971396＿G,rs8113007＿T和rs7248668A构成的单倍体型GTA是HBV-HCC的危险因素。3.干扰素及其受体基因的SNPs存在交互作用,可能对HBV慢性肝病的发生发展起重要作用。4. 氧化应激系列有5个位点和HBV慢性肝病易感性有关,其中危险性SNPs有2个:CYBA-rs4673A、GCLM-rs41303970A,保护性SNPs有3个:NCF4-rs1883112G、NOX4-rs1836882C、SOD2-rs4880G。rs4673A同时和HBV自然清除有关。5. Rs2275959T与HBV-HCC的发生有关。第二部分lnc-RP11-150O12.3多态性位点rs2275959 C与mi R-6739-3p结合对肝细胞癌发生发展的影响目的:探索RP11-150O12.3多态性位点rs2275959T对HCC发生发展作用的分子机制。方法:1.生信分析。RNASNP数据库检索RP11-150O12.3的局部二级结构;Lnc RNASNP2数据库检索通过rs2275959位点和RP11-150O12.3结合的mi RNA及RP11-150O12.3在肝癌及癌旁组织的表达情况;UCSC数据库下载RP11-150O12.3在肝癌及癌旁组织中的表达量数据。2.细胞和组织实验验证rs2275959 C介导的RP11-150O12.3与mi R-6739-3p的海绵吸附作用。q RT-PCR检测4株肝癌细胞株及LO2肝细胞中RP11-150O12.3、mi R-6739-3p的表达量,细胞爬片荧光探针原位杂交（Fish）实验在4株细胞株中对RP11-150O12.3进行定位;q RT-PCR检测RP11-150O12.3和mi R-6739-3p在30对肝癌及其癌旁组织中的表达量;数量性状分析肝癌组织中RP11-150O12.3、mi R-6739-3p的表达量是否会因为rs2275959基因型的不同而改变,相关性分析不同rs2275959基因型个体肿瘤组织中RP11-150O12.3与mi R-6739-3p的表达量是否具有相关性;荧光素酶报告基因检测技术验证RP11-150O12.3及mi R-6739-3p的海绵吸附作用;最后利用q RT-PCR方法检测RP11-150O12.3与mi R-6739-3p的结合是否影响RP11-150O12.3的表达量。3.细胞和动物实验研究RP11-150O12.3对QGY7703肝癌细胞生物学功能的影响。利用慢病毒包装及感染技术构建RP11-150O12.3稳定过表达及敲减的QGY7703肝癌细胞系;在体外利用MTT及克隆形成实验,在体内利用裸鼠皮下成瘤实验检测RP11-150O12.3对肝癌细胞QGY7703增殖能力的影响;利用Transwell小室法检测过表达及敲减RP11-150O12.3后QGY7703细胞迁移和侵袭能力的变化;最后利用流式细胞术分析RP11-150O12.3是否影响细胞周期与细胞凋亡。结果:1.生信分析结果。RNASNP数据库检索RP11-150O12.3的局部二级结构显示,rs2275959野生型碱基C附近的序列（ACAGAACAAA）较易和其它核酸互补结合,而突变碱基U位于茎-环交界处,其下游序列（AAAUGCAUG）存在6对A-U对及3对C-G对会形成稳定的氢键,增加分子间作用力,使分子更稳定。Lnc RNASNP2数据库显示当rs2275959为野生型C时RP11-150O12.3和mi R-6739-3p有海绵吸附作用,当rs2275959突变为U时,该吸附作用会消失。Lnc RNASNP2数据库显示RP11-150O12.3在肝癌组织的表达量高于癌旁组织,从UCSC数据库下载的原始数据支持这一结论。2.细胞和组织实验验证rs2275959 C介导的RP11-150O12.3与mi R-6739-3p的海绵吸附作用。q RT-PCR检测发现RP11-150O12.3在BEL7402、QGY7703、Hep G2肝癌细胞系中的表达量显着高于LO2正常肝细胞(P=1.7×10-4,P=2.6×10-5,P=0.002)。Fish实验检测RP11-150O12.3在BEL7402、QGY7703、Hep3B 3株肝癌细胞及LO2正常肝细胞中的表达,均主要定位于细胞浆中。mi R-6739-3p在BEL7402、QGY7703、Hep G2、Hep3B肝癌细胞中的表达量均显着低于LO2正常肝细胞（P=0.000）。在30对新鲜肝癌组织及其癌旁组织中检测RP11-150O12.3的表达量,结果表明其在肝癌组织中的表达量显着高于癌旁组织(Z=-3.898,P=9.7×10-5)。Rs2275959基因型不同,肝癌组织中RP11-150O12.3的表达量亦不同,从携带rs2275959CC基因型的个体（Median=1.765）到携带CT基因型的个体（Median=4.496）再到携带TT基因型的个体（Median=5.836）其表达量有逐渐升高的趋势(PCC-CT=0.348,PCC-TT=0.040)。而mi R-6739-3p在肝癌组织中的表达量低于癌旁组织（Z=-3.363,P=0.001）。从携带rs2275959CC基因型的个体（Median=2.848）到携带CT基因型的个体（Median=1.459）再到携带TT基因型的个体（Median=1.106）其表达量有逐渐降低的趋势(PCC-CT=0.203,PCC-TT=0.045)。携带rs2275959CC及CT基因型个体的癌组织中两种RNA的表达量呈负相关关系(rs=-0.734,P=3.5×10-4),携带TT基因型个体的癌组织中二者表达量没有相关性（rs=0.009,P=0.979）。双萤光素酶报告基因技术结果提示rs2275959-C能介导RP11-150O12.3与mi R-6739-3p的海绵吸附作用。q RT-PCR实验结果进一步说明这种吸附作用能够导致RP11-150O12.3表达量下降。3.细胞和动物实验研究RP11-150O12.3对QGY7703肝癌细胞生物学功能的影响。本研究成功构建了过表达及敲减RP11-150O12.3的稳定细胞系。MTT实验结果显示:过表达RP11-150O12.3T的QGY7703细胞与空载质粒对照细胞（Control）相比,培养48h后增殖能力增强（P=0.04）;将QGY7703细胞的RP11-150O12.3敲减后,与无关序列对照组（sh Control）相比,48h后细胞增殖能力下降（P=0.042）。过表达RP11-150O12.3T的QGY7703细胞的相对克隆形成率显着高于Control组（P=0.005）,而将RP11-150O12.3敲减后,QGY7703细胞的相对克隆形成能力明显下降(P=4.26×10-4)。裸鼠成瘤实验结果显示,皮下注射过表达RP11-150O12.3T的QGY7703细胞的Balb/c小鼠其肿瘤生长速度及终重量显着高于皮下注射Control组细胞的小鼠(Pweight=0.004),皮下注射敲减RP11-150O12.3的QGY7703细胞的Balb/c小鼠其肿瘤生长速度及终重量显着低于皮下注射sh Control组细胞的小鼠(Pweight=0.011)。Transwell小室法检测RP11-150O12.3过表达或敲减后QGY7703细胞迁移与侵袭能力的变化,结果显示,RP11-150O12.3T过表达组细胞的迁移和侵袭能力均显着高于Control组（P=0.028,P=0.010）,RP11-150O12.3敲减组细胞的迁移和侵袭能力均显着低于sh Control组（P=0.002,P=0.024）。流式细胞术检测细胞周期结果显示:和Control组细胞相比,QGY7703细胞过表达RP11-150O12.3T后G0/G1期的比例明显下降（P=0.001）,S期的比例明显升高(P=1.9×10-4),说明RP11-150O12.3T能促进细胞周期从G0/G1期向S期转变。相反,和sh Control组比较,RP11-150O12.3表达量下调的QGY7703细胞G0/G1期的比例升高(P=1.13×10-4),S期比例明显下降（P=0.049）,使细胞阻滞于G0/G1期。细胞凋亡实验结果显示:和Control组细胞相比,QGY7703过表达RP11-150O12.3T后细胞凋亡比例明显降低（P=0.0011）,两组细胞用5-Fu处理后这种差异更加明显(P=1.12×10-4)。相反,和sh Control组比较,RP11-150O12.3下调的QGY7703细胞凋亡比例明显增高（P=0.003）,两组细胞用5-Fu处理后这种差异也有所提高（P=0.001）。结论:1.RP11-150O12.3在BEL7402、QGY7703、Hep G2肝癌细胞中的表达量高于LO2正常肝细胞,其表达位置在细胞浆。而mi R-6739-3p在BEL7402、QGY7703、Hep G2、Hep3B肝癌细胞中的表达量均低于LO2正常肝细胞。2.RP11-150O12.3在肝癌组织的表达量高于其对应的癌旁组织,从携带rs2275959CC基因型的个体到携带CT基因型的个体再到携带TT基因型的个体肝癌组织中RP11-150O12.3表达量有逐渐升高的趋势,mi R-6739-3p表达量有逐渐降低的趋势,并且mi R-6739-3p在肝癌组织中的表达量低于其癌旁组织。携带CC及CT基因型个体的癌组织中RP11-150O12.3和mi R-6739-3p表达量呈负相关关系。3.RP11-150O12.3与mi R-6739-3p的相互作用依赖于rs2275959C碱基且导致RP11-150O12.3的表达量下调。4.RP11-150O12.3作为一个促癌基因,在体外能促进HCC细胞增殖、迁移与侵袭,促进细胞周期的进展,并抑制细胞凋亡;在体内能促使裸鼠成瘤。
FRELISKA LAZUARDI[3]（2019）在《小于5cm的肝细胞肝癌局部切除术后辅助性经导管动脉化疗栓塞》文中提出背景:术后辅助经导管动脉化疗栓塞术（TACE）有利于延长生存期,减少肿瘤复发。但对小肝癌的影响尚不清楚。我们的目的是回顾性分析肿瘤小于5cm的患者肿瘤切除术后再行辅助性TACE的无瘤生存情况。方法:本研究纳入2014年1月至2016年12月行肝切除术的肝癌患者307例。其中172例患者仅行手术治疗（A组）,135例患者行手术切除后辅助性TACE治疗（B组）。倾向评分匹配（PSM）分析用于最小化两组之间的基线差异。比较两组间的无瘤生存期（DFS）,采用Cox比例风险模型预测复发因素。结果:PSM 前,A 组 1、2、3 年 DFS 分别为 90.1%、83.3%、75.3%;B 组 1、2、3年 DFS 分别为 85.2%、73.9%、68.1%（P=0.286）。PSM 后,A 组 1、2、3 年 DFS分别为 90.3%、80.8%、71.9%,B 组 1、2、3 年 DFS 分别为 89.2%、77.8%、71.3%（P=0.791）。在亚组分析中,患者表现为微血管侵犯（MiVI）,PSM前A、B组1、2、3 年 DFS 分别为 77.8%、77.8%、77.8%和 70%、70%、47.3%（P=0.491）。PSM后 A、B 组 1、2、3 年 DFS 分别为 71.4%、71.4%、71.4%和 100%、100%、50%（p=0.440）。Cox比例风险模型认定肿瘤大小≥3cm是复发相关因素。结论:辅助性TACE治疗不能改善肿瘤大小小于5cm的肝癌患者的DFS。
户林燕[4]（2019）在《衡水地区HBV合并HCV感染患者病毒载量、肝功及炎症因子的相关性分析》文中研究指明目的:我国是HBV感染率较高国家之一。在慢性肝炎中,HBV和HCV是两个主要的致病因子。同时,导致全球慢性肝脏疾病的主要原因是HBV和HCV感染,HBV和HCV感染还可导致肝硬化和肝细胞癌（hepatocellular Carcinoma,HCC）。胃肠道外传播是HBV和HCV传播的主要方式,导致HBV/HCV重叠感染并不少见,HBV/HCV重叠感染的患者数量由于隐匿性HBV感染的存在可能被低估了。因此,HBV合并HCV感染已经引起了越来越多的人的重视。由于HBV和HCV的流行因地区而异,不同地区的HBV合并HCV感染率从1%到15%不等。静脉吸毒、血液透析、输血、器官移植、艾滋病等高危人群HBV/HCV合并感染率明显增高,好发人群是免疫力低下的老年男性。与单独的HBV病毒或HCV病毒感染患者相比,HBV/HCV重叠感染患者更容易发生严重的肝损害,肝硬化和肝细胞癌（HCC）的发生率也明显增加,在日常工作中HBV/HCV重叠感染患者也更容易出现漏检。因此,在本研究中拟探讨:1.衡水地区HBV/HCV合并感染与单独HBV、HCV感染的生化指标的相关性;2.HBV/HCV合并感染与单独HBV、HCV感染的病毒载量的差异;3.病毒载量与细胞因子的相关性。通过以上几个方面的分析,为了解衡水地区HBV/HCV合并感染临床,提高衡水地区HBV/HCV重叠感染的检出率,做到早发现、早治疗,防止病情进展提供理论依据。方法:1.依据纳入排除标准,共纳入2016年10月至2017年10月衡水市第三人民医院住院衡水地区HBV/HCV重叠感染住院患者67例,单独HBV感染住院患者127例,单独HCV感染患者113例。2.病例纳入标准:1)HBV/HCV重叠感染患者血清HBs Ag、抗-HCV和HCV RNA均阳性且超过6个月的慢性肝脏疾病患者;2)单独HCV感染患者除HBsAg阴性外,与HBV/HCV重叠感染患者的诊断依据相同;3)单独HBV感染患者的诊断依据是HBsAg阳性超过6个月或（和）HBV DNA阳性的慢性乙肝患者;4)所有患者均未接受抗病毒和免疫调节治疗;5)所有患者常住地均为衡水地区。3.空腹的状态下各采集2ml静脉血,加入到真空促凝管中让血清自然析出,对所收集的血清进行编号,记录后放于-20℃的冰箱冷冻室中保存备用。4.HBV血清抗原抗体标志物（乙型肝炎表面抗原HBsAg,乙型肝炎表面抗体HBsAb,乙型肝炎e抗原HBeAg,乙型肝炎e抗体HBeAb,乙型肝炎核心抗体HBc Ab）、HCV抗体定性检测、血清白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-10（IL-10）等细胞因子采用ELISA双抗体夹心法。5.应用奥林巴斯全自动生物化学分析仪检测血浆凝血酶原活动度（PTA）、白蛋白（Alb）、球蛋白（Glb）、谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）、总胆红素（TB）、谷氨酰转移酶（GGT）指标。6.统计学方法:使用SPSS23.0统计学软件对结果进行统计分析,定义P<0.05为差异有统计学意义。计量资料以均数±标准差表示,采用t检验;计数资料统计的卡方检验进行分析;检测指标之间的关系采用相关性分析,r代表相关系数,r值为正值代表正相关,r值为负值代表负相关。结果:1.3组患者一般资料比较:单独HBV感染组、单独HCV感染、HBV/HCV重叠感染三组患者的一般资料比较,差异无统计学意义（P>0.05）。2.3组患者病毒载量的比较:单独HBV感染住院患者HBV DNA阳性率70.0%显着高于HBV/HCV重叠感染患者HBV DNA阳性率55.2%,差异具有统计学意义（P<0.05）;单独HCV感染住院患者HCV RNA阳性率100.0%显着高于HBV/HCV重叠感染患者HCV RNA阳性率31.3%,差异具有统计学意义（P<0.05）。3.HBV/HCV重叠感染组HBV DNA载量为（12.98±1.24）×103IU/ml、单独HBV感染组HBV DNA载量为（98.92±2.57）×103IU/ml,HBV/HCV重叠感染组HBV DNA载量显着低于单独HBV感染组,两组的HBV DNA载量比较,差异有统计学意义（P<0.05）;HBV/HCV重叠感染组HCV RNA载量为（37.5±8.9）×103IU/ml、单独HCV感染组HCV RNA载量为（374.2±31.2）×103IU/ml,HBV/HCV重叠感染组HCV RNA载量显着低于单独HCV感染组,两组的HCV RNA载量载量比较,差异有统计学意义（P<0.05）。4.3组患者肝功能生化指标的比较:1)与单独HBV感染组相比,HBV/HCV重叠感染组Glb、TB、ALT、GGT水平均显着增高,而PTA水平则显着下降（P值均<0.05）;2)与单独HCV感染组相比,HBV/HCV重叠感染组Alb水平明显下降,Glb、TB、AST、ALT、GGT水平均显着增高,而PTA水平则显着下降,差异有统计学意义（P值均<0.05）。5.单独HBV感染组和HBV/HCV重叠感染组乙肝五项的比较:与单独HBV感染组相比,HBV/HCV重叠感染组HBeAg阳性率明显增高,HBcAb阳性率明显下降,结果有统计学意义（P值均<0.05）。HBeAg阳性是乙肝病毒复制和传染性强的可靠标志;HBcAb并非保护性的抗体,而是乙肝病毒既往感染的标志。HBV/HCV重叠感染组HBcAb阳性率明下降,可能与HCV干扰HBV病毒复制有关。6.3组患者肝损伤进程的比较:HBV/HCV重复感染组慢性肝炎的发生率显着低于单纯HBV感染组（32.84%v.s 78.74%）,重叠感染组慢性肝炎的发生率显着低于单纯HCV感染组（32.84%v.s 87.61%）,差异有统计学意义（χ2=67.48,P<0.05）。HBV/HCV重复感染组肝硬化发生率高于单纯HBV感染组（31.34%v.s 21.26%）,重叠感染组的肝硬化发生率显着高于单纯HCV感染组（31.34%v.s 11.50%）,重叠感染组肝硬化患者提示预后不良,两组患者在疾病预后与转归方面,差异有统计学意义（χ2=10.66,P<0.05）。7.HBV/HCV重叠感染组患者病毒载量与细胞因子的比较将重叠复制组分为两组-I组病毒载量经实时荧光定量PCR检测≥1.0×103 copies/ml;II组病毒载量经实时荧光定量PCR检测<1.0×103copies/ml。I组IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-4、IL-10水平与II组比较,差异均具有统计学意义（P值均<0.05）。II组IL-1β、IL-6、TNF-α水平均低于I组,而IL-4、IL-10水平均高于I组,差异均有统计学意义（P值均<0.05）。HBV DNA载量、HCV RNA载量与IL-1β、IL-6、TNF-α指标呈正相关,与IL-4、IL-10均呈负相关,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:1.与单独HBV或HCV病毒感染相比,HBV/HCV重叠感染更易发生严重的肝脏损害,肝硬化的发生率也显着升高。2.进入肝硬化病程的HBV/HCV重叠感染组患者,HBV DNA、HCV RNA病毒复制载量的水平越低,肝损伤越重,肝脏病变程度甚至进入肝硬化失代偿期,预后不良。慢性肝炎病程的HBV/HCV重叠感染组患者,肝功能相关生化指标升高更显着,肝损伤更重。HBV/HCV重叠感染组患者更应该早期诊断、早期治疗。3.在HBV/HCV重叠感染组中HBV DNA、HCV RNA载量与IL-1β、IL-6、TNF-α指标呈正相关,与IL-4、IL-10呈负相关。
宁宝烁[5]（2019）在《东北地区汉族人群PNPLA3 rs738409 SNP与HCC的相关性研究》文中指出目的:国外已有一些研究报道关于PNPLA3 rs738409 SNP与HCC的相关性,但是目前国内尚缺乏PNPLA3 rs738409 SNP与HCC相关性的大样本病例对照研究,因此我们分析东北地区人群中HCC患者的PNPLA3 rs738409 SNP,研究东北地区汉族人群PNPLA3 rs738409 SNP与HCC发病的相关性。并探讨PNPLA3 rs738409 SNP是否是HCC发病的高危因素。方法:采用病例对照的研究方法,以东北地区汉族人群为研究对象,纳入217例HCC患者作为病例组,其中乙型病毒性肝炎后肝癌患者109例,丙型病毒性肝炎后肝癌患者70例,酒精性肝病后肝癌患者38例,164例正常人群作为健康对照组。病例组分为乙型病毒性肝炎后肝癌组、丙型病毒性肝炎后肝癌组及酒精性肝病后肝癌组。采用RT-PCR方法检测PNPLA3 rs738409位点的SNP。结果:（1）基本情况:在性别及年龄分布上,健康对照组与病例组相比,差异无统计学意义（P分别为0.895及0.344）,具有可比性。病例组中白蛋白明显低于健康对照组,而肝脏酶学指标、TBIL及AFP均明显高于健康对照组。除AFP外,各组间白蛋白、肝脏酶学指标、TBIL差异均无统计学意义（P>0.05）。（2）Hardy–Weinberg遗传平衡检验:健康对照组及病例组rs738409位点等位基因频率符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律（健康对照组PNPLA3 rs738409 C>G:P=0.928,病例组PNPLA3 rs738409 C>G:P=0.088）,样本具有群体代表性。（3）PNPLA3 rs738409在各组间及组内的基因分布情况:根据探针上荧光标记的不同,将PNPLA3 rs738409基因分为GG、CG、CC三种基因型,健康对照组中CC、CG、GG基因型频率及G等位基因型频率分别为0.482、0.427、0.091、0.305,病例组中CC、CG、GG基因型频率及G等位基因型频率分别为0.373、0.429、0.198、0.412,PNPLA3基因rs738409位点基因型在病例组和健康对照组中的分布差异有统计学意义（P=0.004）,且与健康对照组相比,病例组中PNPLA3 rs738409 G等位基因型频率明显升高（OR=9.313,P=0.002）。乙肝肝硬化组中,CC、CG、GG基因型频率及G等位基因型频率分别为0.367、0.431、0.202、0.417,健康对照组与乙肝肝硬化组基因型及等位基因分布差异有统计学意义（P分别为0.007及0.009）;丙肝肝硬化组中CC、CG、GG基因型频率及G等位基因型频率分别为0.457,0.386,0.157、0.350,健康对照组与丙肝肝硬化组基因型及等位基因分布差异无统计学意义（P分别为0.337及0.143）;酒精性肝硬化组中CC、CG、GG基因型频率及G等位基因型频率分别为0.237,0.500,0.263、0.513,健康对照组与酒精性肝硬化组基因型及等位基因分布差异有统计学意义（P分别为0.001及0.009）。（4）PNPLA3 rs738409与各组生化指标的关系:将病例组按照是否携带PNPLA3rs738409 G等位基因分成CC/CG组与GG组,在乙肝组、丙肝组及酒精组中,CC/CG组与GG组年龄、性别、肝脏酶学指标及TBIL差异均无统计学意义。（5）PNPLA3 rs738409与肝硬化分级的关系:将病例组伴有肝硬化的患者根据Child-Pugh评分将其分为≥7分组与<7分组,Child-Pugh评分≥7分组患者PNPLA3rs738409 GG基因型比例明显高于<7分组,其差异具有统计学意义（P=0.046）。结论:PNPLA3 rs738409 SNP在东北地区汉族人群中与乙型病毒性肝炎后肝癌、酒精性肝病后肝癌的发生具有相关性。
隋洪婷[6]（2018）在《延边地区原发性肝癌的临床特征及分子机制研究》文中研究说明目的:我国是原发性肝癌（Primary Liver Cancer,PLC）的高发区,其发病率位于恶性肿瘤的第四位,死亡率居于第三位。2012年中国肿瘤年报数据显示,吉林省延吉市是肝癌的高发区域之一。到目前为止,没有对本地区原发性肝癌的临床特征及发病机制进行系统的报道。故本研究通过回顾性分析原发性肝癌患者的临床资料,了解其临床特征及对肝癌组织和癌灶远旁组织进行高通量转录测序,从分子层面分析其发病机制,为延边地区原发性肝癌的防治提供科学依据。方法:本研究通过回顾性调查方法对2000年01月至2016年07月在延边大学附属医院住院的3537例原发性肝癌患者的临床资料（包括患者个人信息,如年龄、性别、民族、个人史、肝癌家族史、病毒感染史,如有无慢性肝炎病史、有无肝硬化及相关实验室检查、影像学检查）统计分析。经过知情同意后,收集肝癌患者肝癌组织和癌灶远旁组织进行高通量转录测序。结果:1.原发性肝癌患者共3537例;其中男性2581例（72.97%）、女性956例（27.03%）,男:女=2.7:1;发病时伴有肝硬化的PLC患者2865例（81%）、无肝硬化的PLC患者672例（19%）。2.从2000年到2015年原发性肝癌患病人数构成比逐年升高;从2000～2009年原发性肝癌患者以HBV感染为主,而2010年以后HCV感染为主。3.HBV感染的PLC患者年龄最低,而HCV感染的PLC患者年龄最高（P<0.05）;HBV感染的PLC患者中男性所占比例最高（P<0.05）;不同病毒感染的PLC患者中均为有肝硬化的PLC患者所占比例高于无肝硬化的PLC患者,其中HBV合并HCV感染的PLC患者伴有肝硬化比例最高（P<0.05）。4.汉族的PLC患者中HBV感染者所占比例明显高于朝鲜族,而朝鲜族的PLC患者中HCV感染者所占比例明显高于汉族（P<0.05）。5.各年龄段男性比例均高于女性,其中男性患者年龄多居于40-60岁,而女性年龄多居于60岁以上（P<0.05）;小于40岁年龄段与40-60岁年龄段PLC患者主要为HBV感染,而大于60岁年龄段PLC患者主要为HCV感染（P<0.05）。6.男性PLC患者的年龄为58.95±10.94岁,女性PLC患者的年龄为63.01±10.12岁,男性年龄低于女性（P<0.05）;男性发病时伴有肝硬化的PLC患者明显多于女性（P<0.05）。7.伴有肝硬化的PLC患者年龄明显低于不伴有肝硬化的患者（P<0.05）。8.肝癌组织和癌灶远旁组织进行通量转录组测序,筛选出4927种差异表达基因,其中在肿瘤组织中表达增加的基因数为159种,表达减少的基因数为4768种;肿瘤组织中表达增加的基因通过GO分析发现,BBOX1、HMGCS2、ADH4、VCAN、COL1A1、POSTN等基因与肝纤维化进展为肝癌可能有关;KEGG通路分析,发现P13K-Akt信号通路、黏着斑、细胞外基质受体相互作用、趋化因子信号通路、细胞因子与细胞因子受体间的相互作用、癌症通路、NF-κB信号通路等与肝纤维化进展为肝癌可能有关。结论:2000-2015年延边地区原发性肝癌患病人数整体呈上升趋势,其中2009年之前以HBV感染为主,而2010年以后以HCV感染为主。男性患者所占比例明显高于女性;女性年龄平均比男性高5岁;HBV感染的PLC患者年龄较小,以汉族人群为主,而HCV感染的PLC患者年龄较高,以朝鲜族人群为主。PLC患者的病理基础以肝硬化为主。肝癌组织和癌灶远旁组织进行高通量转录组测序,分析发现 BBOX1、HMGCS2、ADH4、VCAN、COL1A1、POSTN 等基因可能与肝纤维化进展为肝癌有关;P13K-Akt信号通路、黏着斑、细胞外基质受体相互作用、趋化因子信号通路、细胞因子与细胞因子受体间的相互作用、癌症通路、NF-κB信号通路等可能与肝纤维化进展为肝癌有关。
郑浩[7]（2017）在《肝炎病毒感染调控肝癌增殖和转移作用和机制的研究》文中研究说明第一部分肝炎病毒感染调控肝癌增殖和转移作用和机制的研究:肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是目前我国及世界范围内最为常见的恶性肿瘤之一,发生率在所有恶性肿瘤中居第五位,导致的死亡率在所有恶性肿瘤中排第三位。由于该病起病隐匿,早期没有症状或症状不十分明显,病程进展迅速,因此确诊时大多数患者已经达到中晚期或发生远处转移,治疗困难,导致预后差、病死率极高。目前肝癌的病因及确切分子机制尚不明确,普遍认为是一个多因素、多步骤的复杂过程,乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）和丙型肝炎病毒（Hepatitis C virus,HCV）感染是肝癌发生的最主要致病原因,约占到全部肝癌的70–85%。以往的研究表明感染有肝炎病毒的原发性肝癌患者的无瘤生存时间和整体生存时间均明显差于无病毒感染的原发性癌患者。通过我们科室前期的研究发现行肝部分切除术后存在普遍的病毒再激活现象,肝炎病毒再活化在肝癌的发展中起到了重要作用,并且能影响肝癌患者术后的复发和远期生存率。以往的研究表明肝癌术后持续的抗病毒治疗有望降低病毒载量,减轻肝脏炎症从而缓解肝脏负荷,降低晚期复发生存率和提高整体生存率从而达到改善肝癌术后预后的目的。我们前期的一项研究结果表明,抗病毒治疗没有起到直接发挥抗肿瘤作用,而是可以通过抑制肝炎病毒活性减轻肝脏慢性炎症,从而降低第二次原发肝癌发生的概率,而不能起到降低肝癌术后早期复发的作用。目前对于抗病毒治疗是否能够达到抗肿瘤的目的仍然存在争议,因此有必要明确病毒复制在肝癌复发中的作用机制,寻找病毒感染导致肝癌发生发展的特异性信号通路。本研究拟通过高通量测序手段识别肝炎病毒感染引起肝癌发生联系密切的基因和信号通路,进而明确肝炎病毒感染引起相关基因和信号通路发生变化的具体机制。接下来,我们将重点研究这些基因和信号通路通过怎样的调控方式来促进肝癌肿瘤细胞的增殖和转移。该研究不仅能够阐明病毒性肝炎感染导致肝癌发生发展的特异性机制,更能为未来的抗病毒治疗提供更多的个性化治疗方案。在本研究中首先通过高通量测序的手段检测正常肝脏组织、无病毒感染的原发肝癌组织、乙型肝炎病毒感染的原发肝癌组织、丙型肝炎病毒感染的原发肝癌组织中各组间转录本的表达水平,结合信息学分析筛选在病毒感染的原发肝癌组织中特异性差异表达的转录本,进一步系统、深入地揭示重要基因在病毒感染的肝癌发生发展中所扮演的角色,为肝癌的诊断和治疗以及合理的抗病毒治疗提供新的分子靶标和理论依据。在我们的课题研究中获得了如下结果:通过高通量测序和生物信息学分析,我们发现P54nrb在乙型肝炎病毒感染和丙型肝炎病毒感染的肝癌组织中异常高表达,暗示P54nrb在肝炎病毒感染调控肝癌发生和发展中发挥了重要的作用。通过免疫组化技术检测P54nrb蛋白在临床组织样本表达情况发现,P54nrb蛋白在肿瘤组织中的高表达量与有多个恶性的临床病理特征密切相关,P54nrb蛋白高表达的病人术后的无瘤生存时间和总体生存时间均较差,多因素分析显示P54nrb蛋白的高表达是影响肝癌病人肝癌切除术后预后的独立危险因素。体外细胞学实验发现P54nrb可以促进肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。利用裸鼠皮下成瘤模型、肝脏原位荷瘤模型、尾静脉注射肺定植模型,发现P54nrb既可促进肝癌细胞的体内增殖能力,又可促进肝癌细胞在远端转移灶的定植能力,也验证了P54nrb在肝癌发生发展中的重要作用。机制方面,通过生物信息学分析并结合已发表文献,发现转录因子Fox D3在P54nrb的启动子区域有潜在的结合位点,接下来我们利用染色质免疫共沉淀、定量PCR、蛋白免疫印迹、双荧光素酶报告基因检测等技术证明Fox D3可直接靶向结合到的P54nrb的启动子区域进而抑制P54nrb的转录。进一步临床组织样本分析发现Fox D3的表达量与P54nrb恰好相反,在病毒感染肿瘤组织中异常低表达。由此我们推测病毒感染导致肿瘤中Fox D3的表达量下降从而导致了P54nrb的异常高表达。近年来有文献报道证明Fox D3在肿瘤组织中异常低表达的原因与其启动子区域受到甲基化调控密切相关。通过甲基化特异性荧光定量法检测发现Fox D3启动子区域的甲基化程度在病毒感染的肿瘤组织中特异性的升高,揭示了Fox D3在病毒感染的肿瘤组织中特异性降低与甲基化密切相关。DNA甲基转移酶1是DNA进行复制修复并维持其正常甲基化的关键酶,DNMT1过表达在肿瘤的发生中扮演着重要的角色,但是DNMT1是否在病毒感染的肿瘤组织中调控Fox D3启动子区域的甲基化程度从而介导Fox D3的表达尚不清楚。通过RT-PCR、蛋白免疫印迹、以及甲基化特异性荧光定量法检测,我们发现DNMT1的表达量与病毒感染密切相关,并且DNMT1确实可以调控Fox D3启动子区域的甲基化程度。Hbx蛋白和HCV core蛋白在肝癌发生发展中发挥着重要的生物学作用,可以调控多个重要基因的转录表达。在我们的研究中鉴定出Hbx蛋白和HCV core蛋白可以促进DNMT1的转录从而上调DNMT1的表达。由此我们得出肝炎病毒分泌的Hbx蛋白/HCV core蛋白通过上调DNMT1的表达从而增强了Fox D3的甲基化程度进而抑制了Fox D3的表达从而导致了P54nrb上调最终达到促进肝癌发生发展的级联效应。接下来我们探索了P54nrb促进肝癌增殖和转移的分子学机制,利用表达谱芯片、Ch IP-seq、生物信息学分析、和经典分子生物学技术等,验证得出P54nrb可以结合到N-Ras基因的启动子的活化区域并且促进N-Ras基因的转录,从而活化RAF/ERK/MEK信号通路来发挥促进肝癌增殖和转移的作用。最后我们通过对2组临床病人的组织检测接受抗病毒治疗前后DNMT1/Fox D3/P54nrb/N-Ras表达量的检测得出抗病毒治疗能够翻转该信号通路的表达量,由此我们推测抗病毒治疗可能通过抑制该信号通路的活化来抑制肿瘤的发生和发展从而达到一定抗肿瘤的作用。综上所述,我们研究了病毒感染对促进肝癌发生发展,特别是对有特殊基因参与的表观遗传调控的作用的分子机制进行了深入而广泛的探讨,为进一步理解该过程中纷繁复杂的信号通路提供了新的思路和视角,为肝癌的抗病毒治疗提供了新的思路。第二部分TMED3通过IL-11/STAT3信号通路促进原发性肝细胞癌进展的机制研究:肝癌是全世界最为常见的恶性肿瘤之一,其发病率在世界范围内的恶性肿瘤中位居第五位,而死亡率则占肿瘤相关死亡更是高居第三位。随着外科切除、肝移植以及部分辅助疗法的成熟,肝癌五年生存率有了一定程度的提高。但是,肝细胞癌术后复发,肝内、外转移的风险仍较大。由于肝癌起病隐匿,早期没有症状或症状不十分明显、病程进展迅速,因此确诊时大部分病人诊断时既为中晚期,同时更因为血管癌栓、子灶、包膜不全和多中心发生等情况的存在,缺乏有效的治疗,术后仍有很高的复发转移率,造成了肝癌预后依然很差。因此,需要全面了解肝癌复发与转移的分子生物学机制,探索新的更加有效的治疗方法,寻找对预后和治疗有指导意义的分子标志物。有文献报道TMED3在结肠癌中能够抑制肿瘤的侵袭和转移,然而TMED3在原发性肝癌中的表达情况和生物学功能国内外尚未见有系统报道。因此我们的研究旨在为深入了解TMED3在肝癌恶性进展过程中的生物学作用和分子学机制,为临床肝癌治疗提供新的、潜在治疗靶点。通过Real-Time PCR和免疫组化技术检测发现TMED3在肿瘤组织中的表达量明显高于癌旁组织,并且我们发现TMED3的高表达与有侵袭性的临床病理特征密切相关,TMED3高表达的病人术后的无瘤生存时间（RFS,P=0.0128）和总体生存时间（OS,P=0.0155）都明显低于TMED3低表达的病人,多因素分析显示TMED3高表达是影响肝癌病人术后预后的独立危险因素。体外细胞学实验证实,TMED3能够显着的促进肝癌细胞侵袭和转移能力,但是对于细胞的增殖能力没有任何影响。裸鼠体内实验证实TMED3对肝癌细胞体内成瘤没有影响,可以促进肝癌细胞转移到肺部成瘤能力。接下来我们利用表达谱芯片和一系列的分子学实验发现TMED3上调IL-11的表达、诱导IL-11的自分泌、活化IL-11/STAT3信号通路。总之,我们通过对大规模肝癌临床样本分析,发现TMED3的表达与病人预后显着相关;机制方面,我们发现TMED3通过影响IL-11/STAT3信号通路调控肝癌的侵袭和转移;我们的研究发现了一个潜在的肝癌治疗靶点,为肝癌治疗提供了新的思路。
陈俊虎[8]（2016）在《基于GWAS易感基因遗传变异与广东顺德人群原发性肝癌发生风险的关联研究》文中进行了进一步梳理背景和目的:肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是最常见的肝脏原发性恶性肿瘤,据2015年最新统计,2012年全球新发肝癌患者78.25万,死亡患者74.55万,其发病率和死亡率几乎相等,其中我国肝癌新发和死亡患者数均占全球总数的50%以上,可见其恶性程度之高。近年来肝癌的基础和临床研究不断取得新的进展,但统计表明发病率和病死率均未下降,仍呈逐年升高趋势。肝癌已经成为严重危害我国居民生命和健康的重大公共卫生问题,同时也给国家和地区带来沉重的社会和经济负担。大量的流行病学和实验研究表明,肝癌的发生发展是一个多因素、多阶段的积累过程、由环境因素和遗传因素共同作用的复制过程。目前研究已证实的肝癌环境危险因素主要包括乙型肝炎病毒或丙型肝炎病毒感染、黄曲霉毒素的摄入、嗜酒、吸烟等。20世纪70年开始,广东顺德是我国四大肝癌高发区之一,肝癌死亡率是26.8/10万,仅次于江苏启东、广西扶绥,肝癌死亡率居顺德癌症死因顺位的第一位,但是,和江苏启东、广西扶绥、福建同安三个肝癌高发区已有研究相比,特别是近十年来的研究,顺德肝癌研究比较少,也没有形成系统化研究。在我国,超过80%的肝癌与慢性乙型肝炎相关,但在乙肝患者中只有一小部分罹患肝癌,肝癌存在家族聚集现象,因此,肝癌的发生环境因素是诱因,但遗传因素决定了易感性。研究基因在不同肝细胞中表达的复杂性、基因-基因间的相互作用及这些基因发生突变后的生物学效应是复杂性肝病发生机制研究的重要组成部分,而鉴定与肝病发生相关的基因是首要工作。全基因组关联研究（Genome-Wide Association Studies,GWAS）,采用高通量的基因分型平台,检测大样本病例和对照的全基因组水平上的SNPs,并辅以多个独立的人群研究进行后续验证,用于识别参与肿瘤发生的遗传变异,从而阐明肝癌易感性的遗传基础起到了很大的作用。伴随人类基因组计划、国际单体型计划（HapMap）深入进行,以及基因组研究技术的突飞猛进,全基因组关联研究日益成熟,并广泛应用于肿瘤遗传研究。自2010年起,中国、日本、韩国、美国等研究机构在不同人群中相继开展进行了肝癌GWAS研究,发现了多个肝癌易感基因以及遗传变异。总之,肝癌的发生环境因素是诱因,但遗传因素决定了易感性,寻找能早期预测和诊断的特异性遗传标志物,是实现防控肝癌关口前移,降低肝癌发病率的有效措施。本课题选择广东顺德作为现场,采用病例-对照研究策略明确广东顺德地区肝癌高发的流行病学特点;同时综合GWAS研究的最新研究成果,利用生物信息学分析方法,筛选GWAS鉴定的肝癌易感基因的潜在功能遗传变异,开展肝癌遗传关联研究,并系统分析遗传变异与环境因素的交互作用对肝癌的影响,以期识别与肝癌发病相关的潜在功能性遗传变异和重要的基因-基因、基因-环境交互模式;在此基础上,初试顺德肝癌风险预测模型研究的构建,为顺德地区肝癌的防治提供理论参考。材料与方法:本研究采用病例对照研究设计,病例来自于顺德第一人民医院肿瘤科,调查时间从2010年11月到2014年11月,根据临床表现、影像学检查、临床病理、血清标志物等,诊断确诊的新发病例。选取同期入院的耳鼻喉科、神经科、内分泌科等科室的无肿瘤病史患者作为对照,按照年龄（±3岁）和性别与病例进行频数匹配。采用自行设计的流行病学调查问卷,包括:人口学信息20项、个人生活史28项、职业史7项、居住史15项、家族史7项。采取调查对象外周血,用于提取DNA。采用生物信息学技术筛选GRIK1、STAT4、HLA-DQA1和HLA-DQB1基因上的潜在功能遗传变异,运用Sequenom MassArray分型技术对选择的 14 个 SNP（rs2832499、rs363504、rs455804、rs2647073、rs3104369、rs3997872、rs9272219、rs1063355、rs9273363、rs9273651、rs9275319、rs1031507、rs7574865、rs897200）进行分型。问卷信息核查无误后,与SNP数据进行匹配,形成完成的数据库,用于统计分析。计量资料用（?）描述,两组均数比较用t检验,计数资料利用卡方检验比较各因素在两组别的频率分布差异,应用logistic回归模型分析顺德肝癌危险因素。SNP与肝癌的关联分析采用Pearson卡方检验、Cochran-Armitage趋势检验、logistic回归等方法;运用基于logistic回归框架下的相乘和相加模型、MDR法分析遗传变异之间、遗传变异与环境因素之间的交互作用;运用MDR法和logistic回归模型构建肝癌风险预测模型,采取ROC曲线方法对模型的风险预测能力进行评价。所有统计学分析由IBM SPSS19.0、STAT12.0、PHASE 2.1、MDR3.0.2 和 MDR Permutation Testing Module（1.0 beta）等统计软件包完成。结果:本研究调查时间自2010年11月至2014年11月共纳入顺德地区原发性肝癌患者617人,对照组617人,病例组和对照组的平均年龄分别为56.48±11.89、56.38±12.09岁,差异无统计学意义（P=0.883）。病例组和对照组性别比例相同,男性535例（86.71%）,女性82例（13.29%）,男女性别比例6.5:1。顺德原发性肝癌患病年龄段集中在50-60岁,杏坛、勒流、大良人群发病率较高,高发区与上世纪70年代研究基本一致。经logistic回归模型分析,最终6个因素进入多因素模型:乙型肝炎病毒感染、肝吸虫感染、肝癌家族史、肿瘤家族史、饮酒和饮用沟塘水,经性别、年龄和各因素互相校正后,OR及95%CI分别为20.86（14.99-29.03）、2.48（1.43-4.30）、2.05（1.06-3.97）、1.56（1.04-2.35）、1.54（1.10-2.16）、1.60（1.18-2.17）。对SNP分型结果进行Hardy-Weinberg检验,结果表明除了两个位点rs9272219（P=0.000）、rs1063355（P=0.000）,其余 12 个位点的基因型分布均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律,rs3997872和rs9275319的基因型和等位基因分布在病例组和对照组间差异具有统计学意义（P<0.05）,而在多因素logistic回归分析未得到有统计学意义结果。GRIK1基因的三个位点间的连锁不平衡程度较弱（rs363504与rs455804:D’=0.183;rs2832499 与 rs455804:D’=0.048;rs363504 与 rs2832499:D’=0.002）。STAT4基因中,rs1031507与rs897200位点间存在连锁不平衡,D’值为1.00,其余位点间的连锁不平衡程度较弱（rs1031507与rs7574865:D’=0.024;rs897200与 rs7574865:D’=0.022）。HLA-DQA1基因的 rs2647073 与 3104369,以及rs3104369与rs3997872位点间均显示存在连锁不平衡,D’值分别为0.998和0.996,rs2647073与rs3997872位点间的连锁不平衡程度较弱,D’值0.442。在HLA-DQB1基因中,rs9273363与rs9275319位点间显示存在连锁不平衡,D’值为0.922,其余位点间的连锁不平衡程度较弱（rs9273363与rs9273651:D’=0.001;rs9273651 与 rs9275319:D’=0.286）。单体型分析GRIK1基因单体型包括ACA、ACG、AAA、AAG和GCA等5种,STAT4基因包括GTA、GCC、TTA、TCC等4种,HLA-DQA1基因包括ATC、ATT、AAC 和 CTC 等 4 种,HLA-DQB1基因包括 CCA、ACA、CTA、ACG 和ATG等5种;基因GRIK1和STAT4单体型构成比两组间差异无统计学意义（P>0.05）,单体型趋势检验无统计学意义（P>0.05）;HLA-DQA1的AAC单体型的分布在病例组与对照组间存在有统计学意义的差异（P=0.0001）,与参考单体型ATC相比,AAC单体型与肝癌低风险相关,OR值及95%CI为0.43（0.28-0.66）,且趋势检验具有统计学意义（P=0.0041）;HLA-DQB1的ATG单体型的分布在两组中存在统计学意义（P=0.0014）,与参考单体型CCA相比,ATG单体型为与肝癌低风险相关,OR值及OR值及95%CI为:0.42（0.25-0.72）,且趋势检验具有统计学意义（P=0.0065）。基因-环境交互分析结果显示,CRIK1中rs363504与肝癌家族史的相加交互作用有统计学意义（P=0.0446）,与携带rs363504GG+AG基因型的肝癌家族史阴性者相比,携带rs363504 AA基因型的肝癌家族史阳性者肝癌发病风险显着增加,OR值为4.75（95%CI=2.60-8.69）;rs2832499与乙肝病毒感染的相乘交互作用有统计学意义（P=0.0135）,与携带rs2832499 GG+AG基因型的乙肝病毒感染阴性者相比,携带rs2832499 AA基因型的乙肝病毒感染阳性者肝癌发病风险显着增加,OR 值为 16.04（95%CI=10.06-25.56）;5TAT4中rs897200与乙肝病毒感染的相加交互作用有统计学意义（P=0.0360）,与携带rs897200GG+AG基因型的乙肝病毒感染阴性者相比,携带rs897200 AA基因型的乙肝病毒感染阳性者肝癌发病风险显着增加,OR值为21.37（95%CI=13.82-33.04）;rs7574865与肿瘤家族史的相加交互作用有统计学意义（P=0.0477）,与携带rs7574865 GG+AG基因型的肿瘤家族史阴性者相比,携带rs7574865 AA基因型的肿瘤家族史阳性者肝癌发病风险显着增加,OR值为 2.99（95%CI=1.97-4.54）;HLA-DQA1中rs3997872与饮酒史的相加交互作用有统计学意义（P=0.0491）,与携带rs3997872GG+AG基因型的饮酒史阴性者相比,携带rs3997872 AA基因型的饮酒史阳性者肝癌发病风险显着增加,OR值为3.21（95%CI=1.60-6.44）,rs3997872与乙肝病毒感染同时存在相乘交互作用（P=0.0253）、相加交互作用（P=0.0128）,与携带rs3997872GG+AG基因型的乙肝病毒感染阴性者相比,携带rs3997872 AA基因型的乙肝病毒感染阳性者肝癌发病风险显着增加,OR值为20.82（95%CI=11.67-37.16）;HLA-DQB1中rs9273651与饮酒史的相加交互作用有统计学意义（P=0.0436）,与携带rs9273651GG+AG基因型的肝癌饮酒史阴性者相比,携带rs9273651 AA基因型的肝癌饮酒史阳性者肝癌发病风险显着增加,OR值为1.58（95%CI=1.08-2.31）;rs9275319与乙肝病毒感染的相加交互作用（P=0.0390）有统计学意义,与携带rs9275319 GG+AG基因型的乙肝病毒感染阴性者相比,携带rs9275319 AA基因型的乙肝病毒感染阳性者肝癌发病风险显着增加,OR值为19.04（95%CI=12.22-29.67）,与肿瘤家族史的相加交互作用有统计学意义（P=0.0240）,与携带rs9275319 GG+AG基因型的肿瘤家族史阴性者相比,携带rs9275319 AA基因型的肿瘤家族史阳性者肝癌发病风险显着增加,OR值为3.20（95%CI=2.14-4.77）。MDR分析结果显示,基因-基因分析模型共纳入9个SNP因子,产生1-5阶不同交互模型,各因子组合均无统计学意义（P>0.05）;基因-环境分析,模型纳入14个因子,产生1-5阶不同交互模型,各因子组合均有统计学意义（P<0.05）,最佳模型为rs2832499,rs9273651,rs897200,乙肝病毒感染和肝吸虫感染等五因子（TBA=0.7945,CVC=8/10,permutation P<0.001）。运用logistic回归模型,分别构建了基因因素、环境因素、基因结合环境因素三种肝癌风险预测模型,选择ROC曲线进行评价,曲线下面积（AUC）不同:0.5617、0.7842、0.8344,诊断均有统计学意义（P<0.01）,对三种风险预测模型的准确度进行评价,基因结合环境因素预测模型最佳,灵敏度为74.96%,特异度为87.71%,正确指数为0.6267,阳性似然比为6.098,阴性似然比为0.2855。结论:（1）顺德原发性肝癌高发区域与上世纪70年代研究结果基本一致,公共卫生相关部门应重视勒流、杏坛、大良等镇街的原发性肝癌监测工作,顺德原发性肝癌危险因素包括,乙肝病毒感染、乙肝家族史、饮酒、饮用沟塘水、肝吸虫感染和肝癌家族史等方面。（2）所选遗传变异在显性模型、隐性模型、加性模型的多因素logistic回归分析中,未发现有统计学意义结果。在基因-环境交互分析中,rs363504、rs2832499、rs897200、rs7574865、rs3997872、rs9273651、rs9275319 等 7 个遗传变异与肝癌危险因素在统计学上表现出交互作用,体现肝癌形成由环境因素、遗传因素共同影响所致。（3）在顺德人群中,初步建立了肝癌风险预测模型,相比于传统风险因素预测模型,基因结合环境因素构建的肝癌风险预测模型能更好预测肝癌的患病风险,但需要识别更多肝癌相关遗传变异,以完善肝癌风险预测模型。
高蕊[9]（2014）在《乙型肝炎相关性原发性肝癌相关危险因素的Logistic回归分析》文中指出目的探讨乙型肝炎相关性原发性肝癌与血清HBV-DNA水平、HBeAg等多种危险因素的关系。分析HBeAg阴性慢性乙型肝炎的病毒学特点及临床特征。方法应用回顾性研究方法：收集2010年2月至2012年6月在青岛市传染病医院住院的243例乙型肝炎相关性原发性肝癌患者作为实验组,以同时期住院227例非肝癌慢性乙型肝炎患者作为对照组。制定统一的乙型肝炎相关性原发性肝癌发病统计表,观察指标包括一般资料如姓名、性别、年龄、职业、乙型肝炎病程；病史资料包括饮酒史（饮酒时间大于5年,男性每日饮酒量超过60g,每周酒精摄入量超过420g,女性每日饮酒量超过40g,每周酒精摄入量超过280g。其中乙醇摄入量（克）=含乙醇饮料（m1）×酒精度数×0.8）、乙型肝炎家族史、肝硬化家族史、肝癌家族史、抗病毒史；乙型肝炎五项（HBsAg, HBsAb, HBeAg, HBeAb, HBcAb）和HBV DNA（入院后和出院前）、血常规（RBC、WBC、PLT、HGB）、TBil、ALT、AST、r-GTT、Alb、AFP、CEA、影像检查（B超、CT）。各指标因素量化后由SPSS17.0软件完成统计。采用logistic回归分析来分析以下9个变量：性别、年龄、饮酒史、乙型肝炎家族史、肝硬化家族史、肝癌家族史、抗病毒史、HBeAg、HBV DNA。将对照组227例慢性乙型肝炎患者根据HBeAg血清学特点分为HBeAg （?）日性组及HBeAg阴性组,探讨两组年龄、乙肝病程、HBV DNA、肝功能水平等指标的差异。结果两组病例男性、饮酒史、抗病毒史、乙型肝炎家族史、肝癌家族史、肝硬化家族史、HBeAg阴性、HBV DNA阳性所占比例分别为81.89%、33.74%、53.50%、34.16%、17.28%、11.93%、74.19%、63.39%及66.08%、13.66%、59.03%、33.04%、7.49%、4.41%、55.95%、53.81%。除抗病毒史、乙型肝炎家族史外,两组性别、饮酒史、肝癌家族史、肝硬化家族史、HBeAg、HBV DNA总体分布具有统计学差异。单因素logistic回归分析提示年龄、性别、饮酒史、肝硬化家族史、肝癌家族史、HBeAg、HBV DNA是乙型肝炎相关性原发性肝癌的危险因素（P<0.05）。经多因素回归分析,上述7项指标全部有意义。HBeAg阳性慢乙肝101例,占总数的44.49%,HBeAg阴性慢乙肝组126例,占总数的55.51%；阴性组患者平均年龄较阳性组患者大[53.0（48.5,57.0）、55.5（51.0,61.0）岁,P=0.002]；乙肝病程长[12.5（7.0,20.0）、10.0（4.0,17.5）年,P=0.038]; HBeAg阳性组HBVDNA阳性率显着高于HBeAg阴性组（χ2=25.63,P=0.000）；HBeAg阳性组HBV DNA载量水平与HBeAg阴性组比较,差异有显着的统计学意义（χ2=43.573,P=0.000）；两组在肝功能指标上差异无统计学意义。结论年龄、性别、饮酒史、肝硬化家族史、肝癌家族史、HBV DNA、HBeAg是乙型肝炎相关性原发性肝癌的危险因素。同HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者相比,HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者年龄大,乙肝病程长,仍有较明显的病毒复制,并且由于存在前C区和BCP变异,使HBeAg表达量下降或不表达,容易被忽视,更应该引起患者及医护人员的警惕。
倪雅琼[10]（2012）在《3602例原发性肝癌资料临床流行病学特征分析》文中提出目的：通过研究分析得出我院乃至新疆地区原发性肝癌的病例的临床流行病学特征及主要病因，为新疆地区原发性肝癌的防治提供方向和数据依据。方法：通过回顾性的调查统计分析了2002年1月至2010年12月在我院住院的3602例原发性肝癌患者的病历首页资料的临床流行病学相关信息（包括性别、年龄、民族情况、户口分布、肝炎病毒感染情况）。结果：3602例PLC患者中，男女之比为3.72：1；汉族、维吾尔族、哈萨克族、回族及其他民族（蒙古族、满族、锡伯族）所占的比例依次为81.95%、9.30%、4.14%、2.89%和1.72%，且维吾尔族与汉族在人群分布特征及肝炎感染情况的比较中，差异有统计学意义（P＜0.05）。本研究示PLC年龄分布比例最高的年龄阶段为60-69岁。肝炎病毒检测结果：乙型肝炎表面抗原（HBsAg）呈阳性者1680例（59.57%），丙肝抗体（HCV-Ab）呈阳性者229例（9.41%），且维族、哈族的PLC乙肝病毒检测阳性比例（36.13%、40.37%）均低于汉族（63.18%）（P＜0.05）。结论：本研究PLC的人群分布特征较其他地区并无明显不同，但PLC的HBV感染呈阳性比例明显低于其他地区水平，阴性比例高于其他地区水平，且维族与哈族的HBV感染比例明显低于汉族，故整体具有一定的区域特点和特征。
二、乙型肝炎、丙型肝炎病毒感染与肝癌的病例对照研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、乙型肝炎、丙型肝炎病毒感染与肝癌的病例对照研究（论文提纲范文）
（1）乙型肝炎病毒感染与胰腺癌的风险和预后的meta分析（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词索引 |
| 1 引言 |
| 2 研究对象和方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 HBV感染与癌症关系的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简历和攻读硕士期间发表论文 |
| 致谢 |
（2）候选基因单核苷酸多态性与HBV慢性肝病发生发展的关联性分析及其生物学功能研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 第一部分 候选基因单核苷酸多态性及其交互作用与HBV慢性肝病发生发展的关联性分析 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 lnc-RP11-150O12.3多态性位点rs2275959 C与 miR-6739-3p结合对肝细胞癌发生发展的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 宿主基因多态性对乙型肝炎病毒慢性感染易感性及疾病进展的影响 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）小于5cm的肝细胞肝癌局部切除术后辅助性经导管动脉化疗栓塞（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略词表 |
| 1 引言 |
| 1.1 概述 |
| 1.2 解剖学 |
| 1.3 肝功能 |
| 1.4 肝细胞癌分期系统 |
| 1.5 风险因素 |
| 1.6 监测和筛查 |
| 1.7 诊断 |
| 1.8 治疗 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 患者 |
| 2.2 随访 |
| 2.3 肝动脉化疗栓塞术 |
| 2.4 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 患者特点 |
| 3.2 复发预测因素 |
| 3.3 无瘤生存期 |
| 3.4 并发症 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 |
（4）衡水地区HBV合并HCV感染患者病毒载量、肝功及炎症因子的相关性分析（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 HBV、HCV合并感染研究现状 |
| 参考文献 $#xD;$#xA; |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（5）东北地区汉族人群PNPLA3 rs738409 SNP与HCC的相关性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 纳入标准 |
| 2.3 排除标准 |
| 2.4 采集血液标本 |
| 2.5 提取基因组DNA |
| 2.6 PNPLA3 RS738409 等位基因分型 |
| 2.6.1 TaqMan扩增反应体系 |
| 2.6.2 TaqMan扩增反应程序 |
| 2.6.3 TaqMan扩增反应 |
| 2.7 统计学处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 病例组和健康对照组一般情况的比较 |
| 3.2 病例组和健康对照组生化指标的比较 |
| 3.3 HARDY–WEINBERG遗传平衡检验 |
| 3.4 PNPLA3 RS738409 在各组间及组内的基因分布情况 |
| 3.5 PNPLA3 RS738409 与各组生化指标的关系 |
| 3.6 PNPLA3 RS738409 与肝硬化分级的关系 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）延边地区原发性肝癌的临床特征及分子机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一部分 原发性肝癌的临床特征回顾性分析 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 研究对象与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 研究方法 |
| 2.3 数据录入 |
| 2.4 统计学分析 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 原发性肝癌患者的临床资料 |
| 3.2 2000～2015年原发性肝癌的整体构成比 |
| 3.3 2000～2015年不同病毒感染的原发性肝癌构成比 |
| 3.4 不同病毒感染的原发性肝癌患者临床资料分析 |
| 3.5 不同民族的原发性肝癌患者临床资料分析 |
| 3.6 不同年龄段的原发性肝癌患者临床资料分析 |
| 3.7 不同性别的原发性肝癌患者临床资料分析 |
| 3.8 伴或不伴有肝硬化的原发性肝癌患者临床资料分析 |
| 第四章 讨论 |
| 第五章 小结 |
| 第二部分 原发性肝癌发病的分子机制研究 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 病例纳入和样本的选取 |
| 2.2 样品的制备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.4 生物信息学分析 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 肝癌组织与癌灶远旁组织的差异表达基因分析 |
| 3.2 差异基因的KEGG生物通路富集分析 |
| 3.3 差异基因的GO生物通路富集分析 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 差异基因的KEGG生物通路富集分析讨论 |
| 4.2 差异基因的GO生物通路富集分析讨论 |
| 第五章 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
（7）肝炎病毒感染调控肝癌增殖和转移作用和机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一部分 肝炎病毒感染调控肝癌增殖和转移作用和机制的研究 |
| 一、前言 |
| 二、材料和方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 五、参考文献 |
| 第二部分 TMED3通过IL-11/STAT3信号通路促进原发性肝细胞癌进展的机制研究 |
| 一、前言 |
| 二、料和方法 |
| 三、实验结果 |
| 四、讨论 |
| 五、附录 |
| 六、参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 发表论文情况 |
| 致谢 |
（8）基于GWAS易感基因遗传变异与广东顺德人群原发性肝癌发生风险的关联研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 绪言 |
| 1 研究背景 |
| 2 研究目的 |
| 3 研究内容与方法 |
| 4 研究思路 |
| 第2章 广东顺德原发性肝癌流行病学调查研究 |
| 1 对象与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第3章 基于GWAS的肝癌易感基因GRIK1、STAT4、HLA-DQA1和HLA-DQB1的遗传变异与肝癌发病的遗传关联研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第4章 基于GWAS的肝癌易感基因GRIK1、STAT4、HLA-DQA1和HLA-DQB1的遗传变异与环境因素之间交互作用分析 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第5章 基于GWAS的肝癌易感基因遗传变异和环境风险因素的顺德人群肝癌风险预测模型研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第6章 总结 |
| 1 结论 |
| 2 研究特色 |
| 3 不足之处 |
| 4 研究展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录一 原发性肝癌流行病学调查表 |
| 附录二 质量控制管理表 |
| 附录三 缩写词汇中英文对照表 |
| 在读期间科研成果 |
| 致谢 |
（9）乙型肝炎相关性原发性肝癌相关危险因素的Logistic回归分析（论文提纲范文）
| 摘要 Abstract 引言 第一章 乙型肝炎相关性原发性肝癌相关危险因素的Logistic回归分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 纳入标准 |
| 1.2.1 实验组纳入标准 |
| 1.2.2 对照组纳入标准 |
| 1.3 排除标准 |
| 1.3.1 实验组排除标准 |
| 1.3.2 对照组排除标准 |
| 1.4 研究方法 |
| 1.5 观察指标 |
| 1.6 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 一般情况 |
| 2.2 乙型肝炎相关性肝癌相关危险因素在2组间的分布 |
| 2.3 乙型肝炎相关性肝癌相关危险因素的单因素Logistic回归分析 |
| 2.4 乙型肝炎相关性肝癌相关危险因素的多因素Logistic回归分析 |
| 2.5 乙肝相关性肝癌组与非肝癌组年龄、性别分布情况 |
| 2.6 年龄在2组间的分布差异 |
| 2.7 HBV DNA载量水平在两组间的分布差异 |
| 3 讨论 |
| 3.1 年龄、性别与乙型肝炎相关性肝癌的关系 |
| 3.2 饮酒史与乙型肝炎相关性肝癌的关系 |
| 3.3 肝癌家族史与乙型肝炎相关性肝癌的关系 |
| 3.4 血清HBV DNA与乙型肝炎相关性肝癌的关系 |
| 3.5 HBeAg与乙型肝炎相关性肝癌的关系 第二章 HBeAg阴性慢性乙型肝炎临床特点分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 纳入标准 |
| 1.3 排除标准 |
| 1.4 研究方法 |
| 1.5 观察指标 |
| 1.6 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 两组年龄、性别、乙肝病程比较 |
| 2.2 HBeAg阴性组和HBeAg阳性组HBV DNA水平比较 |
| 2.3 HBeAg阴性组和HBeAg阳性组肝功指标水平比较 |
| 3 讨论 结论 参考文献 综述 |
| 摘要 |
| 1 HBV相关因素与原发性肝癌 |
| 1.1 HBV基因型 |
| 1.2 HBV复制水平 |
| 1.3 年龄、性别 |
| 1.4 饮酒 |
| 1.5 黄曲霉毒素B1 |
| 1.6 代谢综合征 |
| 1.7 肝癌家族史 |
| 1.8 HBV、HCV重叠感染 |
| 2 HBV感染引发肝癌的机制 |
| 2.1 HBV直接作用 |
| 2.2 HBV间接作用 |
| 综述参考文献 攻读学位期间的研究成果 附录 致谢 |
（10）3602例原发性肝癌资料临床流行病学特征分析（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 摘要 Abstract 前言 资料与方法 1 |
| 研究对象 2 |
| 研究方法 3 |
| 诊断标准 4 |
| 数据处理 5 |
| 数据录入与管理 6 |
| 统计学处理 结果 讨论 小结 致谢 参考文献 综述 参考文献 攻读硕士期间发表的学术论文 导师评阅表 |
四、乙型肝炎、丙型肝炎病毒感染与肝癌的病例对照研究（论文参考文献）
- [1]乙型肝炎病毒感染与胰腺癌的风险和预后的meta分析[D]. 郭倩倩. 郑州大学, 2020(02)
- [2]候选基因单核苷酸多态性与HBV慢性肝病发生发展的关联性分析及其生物学功能研究[D]. 马宁. 河北医科大学, 2020(01)
- [3]小于5cm的肝细胞肝癌局部切除术后辅助性经导管动脉化疗栓塞[D]. FRELISKA LAZUARDI. 浙江大学, 2019(03)
- [4]衡水地区HBV合并HCV感染患者病毒载量、肝功及炎症因子的相关性分析[D]. 户林燕. 河北医科大学, 2019(01)
- [5]东北地区汉族人群PNPLA3 rs738409 SNP与HCC的相关性研究[D]. 宁宝烁. 中国医科大学, 2019(02)
- [6]延边地区原发性肝癌的临床特征及分子机制研究[D]. 隋洪婷. 延边大学, 2018(01)
- [7]肝炎病毒感染调控肝癌增殖和转移作用和机制的研究[D]. 郑浩. 第二军医大学, 2017(11)
- [8]基于GWAS易感基因遗传变异与广东顺德人群原发性肝癌发生风险的关联研究[D]. 陈俊虎. 南方医科大学, 2016(04)
- [9]乙型肝炎相关性原发性肝癌相关危险因素的Logistic回归分析[D]. 高蕊. 青岛大学, 2014(11)
- [10]3602例原发性肝癌资料临床流行病学特征分析[D]. 倪雅琼. 新疆医科大学, 2012(02)
标签：肝癌论文; 基因型论文; 肝癌晚期治疗方法论文; 代偿期肝硬化论文; 肝癌症状论文;