一、细胞凋亡检测的研究进展（论文文献综述）
赵云[1]（2021）在《视黄醇结合蛋白4对猪卵泡颗粒细胞功能的影响及其机制研究》文中提出卵泡发育不但受“下丘脑-垂体-卵巢轴”分泌的激素调节,而且受旁分泌和自分泌因子调控。卵泡颗粒细胞是卵泡内体细胞的主要类型,主要功能为合成分泌激素和细胞因子,为卵母细胞成熟和卵泡发育提供营养物质。颗粒细胞分泌的细胞因子通过复杂的信号转导,参与优势卵泡选择和卵泡闭锁的调控。研究证实,颗粒细胞凋亡是卵泡闭锁的潜在机制。因此,阐明颗粒细胞凋亡机制,为提高雌性动物繁殖能力和治疗卵巢疾病具有重要的科学意义。视黄醇结合蛋白4（RBP4）属于载脂蛋白家族成员之一,是视黄醇的特异性转运蛋白,负责将视黄醇从肝脏转运至外周组织。研究表明,RBP4在许多哺乳动物卵巢中表达,血液中RBP4含量与人的胰岛素抵抗和多囊卵巢综合症相关,猪囊肿卵泡液中有高浓度的RBP4蛋白,推测RBP4可能参与调控颗粒细胞功能。但目前有关RBP4对卵泡颗粒细胞的调控研究相对较少。为了探讨RBP4的功能,通过构建RBP4过表达载体包装慢病毒和设计干扰RNA,改变猪卵泡颗粒细胞RBP4的表达量,采用流式细胞术、RT-qPCR和Western blotting等分子生物学技术,从基因和蛋白表达水平检测RBP4对猪卵泡颗粒细胞凋亡和孕酮合成分泌的影响。通过高通量测序分析,发现RBP4处理组差异表达基因富集在胰岛素通路中,结合胰岛素下游通路ERK1/2位点的抑制剂（U0126）处理,阐明RBP4通过ERK1/2信号通路影响颗粒细胞凋亡和孕酮分泌的分子机制。本研究主要结果如下:1.构建猪RBP4基因慢病毒表达载体并成功包装pLVX-RBP4重组慢病毒,病毒滴度达到3×108TU/m L;重组慢病毒成功感染原代培养的猪卵泡颗粒细胞,并且细胞中RBP4基因的表达水平显着升高。过表达RBP4能显着降低BCL2和XIAP的表达水平,增加BAX的表达量,促进猪卵泡颗粒细胞凋亡,抑制孕酮分泌。2.设计合成RBP4干扰序列,确定siRBP4＿01干扰片段转染颗粒细胞72 h,能显着降低RBP4的表达水平。干扰RBP4能增加细胞活力,显着降低CASPASE和BAX表达量,抑制颗粒细胞凋亡。3.使用慢病毒处理猪卵泡颗粒细胞72 h,利用高通量测序检测mRNA表达图谱的变化。结果显示,与对照组相比,检测到113个差异基因,71个基因上调,42个基因下调;差异基因主要富集在氧化磷酸化通路、胰岛素通路、AMPK等16个信号通路。4.干扰RBP4能激活ERK1/2通路,siRBP4＿01能减弱U0126对ERK1/2通路的抑制作用,siRBP4＿01组与siRBP4＿01+U0126组相比,细胞活力增加,凋亡基因的表达量显着下降,抑制颗粒细胞凋亡。因此,RBP4主要通过抑制ERK1/2通路激活,调控颗粒细胞凋亡,抑制孕酮合成分泌。综上所述,本研究通过慢病毒过表达和干扰RNA处理猪卵泡颗粒细胞,利用RT-qPCR、Western blotting以及分子网络分析等研究手段,证明了RBP4可通过抑制ERK1/2信号通路,促进颗粒细胞凋亡基因的表达,降低颗粒细胞活力,促进颗粒细胞凋亡;同时,抑制颗粒细胞中孕酮合成基因的表达,降低孕酮分泌。本研究的结果为RBP4在卵泡发育及颗粒细胞发育过程中所涉及的调控机制提供了新的见解。
黄和涛[2]（2021）在《龙鳖胶囊通过miR-675靶向TBK1调控细胞自噬影响软骨细胞功能的机制研究》文中研究表明目的:本研究针对骨关节炎（OA）发病过程中软骨细胞自噬功能失调机制,探索miR-675和TBK1在OA中的调控关系;进而探讨miR-675过表达或抑制TBK1参与软骨细胞自噬的分子机制,并进一步验证龙鳖胶囊通过miR-675靶向TBK1调控细胞自噬影响软骨细胞功能的分子机制。方法:本研究从临床组织、细胞及动物实验出发,采用组织化学及病理学方法探讨miR-675和TBK1在OA中的调控关系;采用细胞及分子生物学技术证明miR-675过表达或抑制TBK1参与软骨细胞自噬的分子机制,进一步采用龙鳖胶囊从体外干预软骨细胞,验证龙鳖胶囊影响软骨细胞自噬等功能的生物学作用及意义。结果:1.miR-675和TBK1在OA大鼠关节软骨中的表达①SD大鼠OA模型关节软骨病理OARSI评分:通过关节腔注射Ⅱ型胶原蛋白酶构建SD大鼠OA模型,经HE染色及番红-O-固绿染色后进行OARSI评分,结果显示,随着造模时间增加,OA模型组关节软骨的病理OARSI评分明显高于空白对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。②miR-675在SD大鼠OA模型关节软骨中的表达:造模后4、8和12周OA大鼠关节软骨组织中miR-675的表达量较空白对照组明显减少,差异有统计学意义（P<0.01）,且随着造模时间的延长,miR-675表达量的减少越明显。③TBK1在SD大鼠OA模型关节软骨中的表达:造模后4、8和12周OA大鼠关节软骨组织中TBK1 mRNA的表达量较空白对照组明显增加,差异有统计学意义（P<0.01）,且随着造模时间的延长,TBK1 mRNA表达量的增加越明显。2.miR-675靶向TBK1影响OA软骨细胞相关功能的机制研究①miR-675 mimics和miR-675 inhibitor对软骨细胞中miR-675表达的影响:在人OA原代软骨细胞中转染miR-675 mimic和miR-675 inhibitor可以分别上调和下降细胞中miR-675的表达水平,与空白转染对照组相比,差异均有统计学意义（P<0.001）。②miR-675对OA软骨细胞增殖能力的影响:使用miR-675 mimic处理软骨细胞后,软骨细胞的增殖能力与空白转染组对比增强了,差异有统计学意义（P<0.001）,而抑制miR-675的表达后,软骨细胞的增殖能力与空白转染对照组对比明显减弱,差异有统计学意义（P<0.01）。③miR-675对OA软骨细胞基质代谢的影响:与空白转染对照组相比,miR-675能够上调软骨细胞中Collagen Ⅱ蛋白的表达和下调MMP-9蛋白的表达。④miR-675对OA软骨细胞凋亡的影响:使用miR-675 mimic处理细胞后,软骨细胞的凋亡率较空白转染对照组明显降低,差异有统计学意义（P<0.001）;而抑制miR-675的表达后,软骨细胞的凋亡率较空白转染对照组明显升高,差异有统计学意义（P<0.01）。⑤miR-675对OA软骨细胞自噬相关蛋白表达的影响:与空白转染对照组相比,使用miR-675 mimic处理细胞后,软骨细胞中Beclin1蛋白的表达上调、P62蛋白的表达受到抑制、LC3A/B-Ⅱ/LC3A/B-Ⅰ的比值增加,差异均有统计学意义（P<0.05）;而使用miR-675 inhibitor抑制软骨细胞中miR-675的表达后,软骨细胞中Beclinl蛋白的表达下调、P62蛋白的表达上调、LC3A/B-Ⅱ/LC3A/B-Ⅰ的比值减少,差异均有统计学意义（P<0.05）。⑥miR-675对OA软骨细胞自噬流的影响:与空白转染对照组相比,使用miR-675 mimic处理的软骨细胞中红色荧光与绿色荧光的比例明显升高,自噬流增强;而使用miR-675 inhibitor处理的软骨细胞中红色荧光与绿色荧光的比例明显降低,自噬流减弱。⑦siTBK1和LvTBK1对软骨细胞中TBK1蛋白表达的影响:与空载慢病毒对照组相比,LvTBK1可以显着上调软骨细胞中TBK1 mRNA和蛋白的表达水平,差异有统计学意义（P<0.05）;而siTBK1则可以显着下调软骨细胞中TBK1mRNA和蛋白的表达水平,差异有统计学意义（P<0.05）。⑧TBK1对OA软骨细胞增殖的影响:与空载慢病毒对照组相比,过表达TBK1的软骨细胞的增殖率明显降低,差异有统计学意义（P<0.01）。⑨TBK1对OA软骨细胞基质代谢的影响:与空载慢病毒对照组相比,siTBK1处理软骨细胞后Collagen Ⅱ表达上调、MMP-9蛋白表达下降;而过表达TBK1后,软骨细胞中MMP-9蛋白上调、Collagen Ⅱ蛋白的表达下调。⑩TBK1对OA软骨细胞凋亡的影响:与空载慢病毒对照组相比,过表达TBK1后,软骨细胞的凋亡率明显增加,差异有统计学意义（P<0.05）。11TBK1对OA软骨细胞自噬的影响:与空白转染对照组相比,siTBK1转染软骨细胞后,软骨细胞中p-mTOR和P62蛋白的表达水平明显下调,LC3A/B-Ⅱ/LC3A/B-Ⅰ比例则明显升高,差异均有统计学意义（P<0.01）。12 miR-675靶向调控TBK1的表达:利用双荧光素酶报告基因检测发现miR-675-5p对TBK1-wt载体的报告荧光有明显下调作用（P<0.05）;使用miR-675-5p inhibitor干扰miR-675-5p的表达,TBK1-wt载体的报告荧光出现明显上调（P<0.05）。13 miR-675调控TBK1的表达对软骨细胞增殖的影响:在人OA原代软骨细胞中过表达TBK1后,软骨细胞的增殖活性受到抑制,当继续转染miR-675 mimic后,软骨细胞的增殖活性与单纯过表达TBK1处理的细胞相比明显提高,差异有统计学意义（P<0.01）。14 miR-675调控TBK1的表达对软骨细胞凋亡的影响:过表达TBK1后促进软骨细胞凋亡,同时使用miR-675 mimic后软骨细胞的凋亡率明显下降,差异有统计学意义（P<0.01）。15 miR-675调控TBK1的表达对软骨细胞自噬的影响:与空载慢病毒对照组相比,过表达TBK1后,软骨细胞中自噬相关基因ATG5和ATG7 mRNA的表达水平下调、mTOR蛋白水平上调、Beclin1和LC3的表达受到抑制,差异均有统计学意义（P<0.01）;而同时使用miR-675干预后,软骨细胞中自噬相关基因ATG5和ATG7 mRNA的表达水平上调、mTOR蛋白水平下调、Beclin1和LC3的表达水平上调,差异有统计学意义（P<0.01）。3.龙鳖胶囊通过miR-675/TBK1信号轴调控软骨细胞功能的分子机制①龙鳖胶囊含药血清对软骨细胞活力的影响:软骨细胞的活力随龙鳖胶囊含药血清工作浓度（0,0.625%,1.25%,2.5%,5%）的升高而逐渐增强,不同浓度含药血清干预后的细胞活力比较,差异有统计学意义（P<0.05）,但当血清浓度升至10%时,软骨细胞活力反而下降;在同一浓度含药血清的作用下,随着干预时间的增加,细胞活力增强也越来越明显,不同干预时间的细胞活力比较,差异有统计学意义（P<0.05）。②龙鳖胶囊含药血清对软骨细胞增殖的影响:龙鳖胶囊含药血清干预组（2.5%,5%）的细胞增殖能力较空白对照组明显升高,差异有统计学意义（P<0.05）,且随着龙鳖胶囊含药血清干预浓度的升高,软骨细胞的增殖能力呈现出逐渐增强的趋势。③龙鳖胶囊含药血清对软骨细胞基质代谢的影响:使用龙鳖胶囊含药血清干预后的人OA原代软骨细胞中Ⅱ型胶原蛋白的表达明显上调,随着龙鳖胶囊含药血清干预浓度的升高,人OA原代软骨细胞中Ⅱ型胶原蛋白的表达上调程度也越来越明显。④龙鳖胶囊含药血清对软骨细胞凋亡的影响:使用IL-1β诱导软骨细胞发生凋亡,同时使用5%龙鳖胶囊含药血清干预后,软骨细胞的凋亡率明显下降,差异有统计学意义（P<0.001）;2.5%和5%浓度的龙鳖胶囊含药血清处理人OA原代软骨细胞48h后,与空白对照组比较,软骨细胞中Bcl-2蛋白表达量明显增多,而Cleaved Caspase-3蛋白的表达量则减少,差异均有统计学意义（P<0.05）。⑤龙鳖胶囊含药血清对软骨细胞自噬的影响:与空白对照组比较,2.5%及5%的龙鳖胶囊含药血清均能明显升高软骨细胞中ATG5和ATG7 mRNA的表达水平、抑制mTOR蛋白的表达、上调Beclin-1的蛋白水平、增加LC3A/B-Ⅱ/LC3A/B-Ⅰ的比例、增强自噬流,差异均有统计学意义（P<0.05）。⑥龙鳖胶囊含药血清对软骨细胞中miR-675和TBK1表达的影响:2.5%和5%的龙鳖胶囊含药血清都可以上调软骨细胞中miR-675的表达,与空白对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）;龙鳖胶囊含药血清可以下调软骨细胞中TBK1mRNA和蛋白的表达水平,与空白对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）。⑦miR-675在龙鳖胶囊含药血清影响软骨细胞功能中的作用:与空白转染对照组相比,在OA软骨细胞中转染miR-675 inhibitor后,软骨细胞的增殖活性明显下降、凋亡率明显升高、自噬明显降低,差异均有统计学意义（P<0.05）;而当联合使用5%龙鳖胶囊含药血清干预时,与单纯使用miR-675 inhibitor处理的细胞相比,软骨细胞的增殖活性明显升高、凋亡率明显下降、自噬明显增强,差异均有统计学意义（P<0.05）。⑧TBK1在龙鳖胶囊含药血清影响软骨细胞功能中的作用:与空载慢病毒对照组相比,在人OA原代软骨细胞中过表达TBK1后,软骨细胞的增殖活性明显下降、凋亡率明显升高、自噬相关基因ATG5和ATG7mRNA的表达水平下调、mTOR蛋白水平上调、Beclin1和LC3的表达水平受到抑制,差异均有统计学意义（P<0.05）;而当联合使用5%龙鳖胶囊含药血清干预时,与单纯过表达TBK1的软骨细胞相比,软骨细胞的增殖活性明显提高、凋亡率明显下降、自噬相关基因ATG5和ATG7 mRNA的表达水平上调、mTOR蛋白水平下调、Beclin1和LC3的表达水平上调,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论:补肾活血中药龙鳖胶囊具有增强软骨细胞活力、促进软骨细胞增殖及自噬、调节软骨细胞基质代谢、抑制软骨细胞凋亡的作用。miR-675具有促进软骨细胞增殖、抑制软骨细胞凋亡及软骨基质降解、增强软骨细胞自噬,进而保护关节软骨的功能。TBK1具有抑制软骨细胞增殖及自噬、促进软骨细胞凋亡及软骨基质降解的作用。miR-675具有靶向调控TBK1表达的作用。龙鳖胶囊含药血清具有上调软骨细胞中miR-675表达和下调TBK1蛋白表达的作用。龙鳖胶囊含药血清可能是通过抑制TBK1的表达进而达到抑制软骨细胞凋亡和促进软骨细胞自噬和增殖的作用。龙鳖胶囊含药血清可能是通过上调miR-675的表达进而达到抑制软骨细胞凋亡和促进软骨细胞自噬和增殖的作用。龙鳖胶囊含药血清可能是通过miR-675/TBK1信号轴调控细胞自噬,抑制软骨细胞凋亡和增强软骨细胞增殖活性,从而起到保护关节软骨细胞、延缓OA进展的作用。
王文平[3]（2021）在《重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ的毒性评价及重楼皂苷Ⅰ的肝毒性机制探究》文中认为研究目的:药源性肝损伤是一项严重的公共卫生问题,据调查统计,我国药源性肝损伤的发病率逐年升高;重楼是一种临床常用中药,因其抗肿瘤活性日益受到重视。重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ是重楼中3种重要的皂苷类成分,越来越多的研究和报道显示其对多种肿瘤细胞均具有杀伤作用。但重楼在抗肿瘤作用的同时毒副作用研究较少,尤其是其单体类成分。本研究围绕重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ的潜在毒性及其作用机制进行深入的探索。以期为中药重楼的临床合理应用以及基于重楼皂苷单体的药物研发提供借鉴和参考。研究方法:（1）从细胞、模式生物-斑马鱼、动物3个层面进行了重楼皂苷单体的毒性评价。首先选择了 9种细胞考察了重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ的细胞毒性情况,包括3种肝细胞（HepaRG、HL-7702和WRL-68细胞）,3种肾细胞（HK-2、HKC和293T细胞）和3种心脏细胞（H9c2、HUVEC和HCMEC细胞）;利用模式生物-斑马鱼模型考察不同浓度重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ对斑马鱼生存率的影响,确定了 LC50、LC10与最大非致死浓度（MNLC）;体视荧光显微镜观察重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ给药前后肝脏、肾脏和心脏的形态,统计斑马鱼的肾脏水肿率、心率和心包水肿率。利用Image-Pro Plus 5.1.0软件统计给予重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ前后斑马鱼肝脏面积和荧光强度、肾脏面积和荧光强度、心脏SV-BA距离,评价重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ的潜在肝、肾、心毒性;通过HE染色和TUNEL染色观察斑马鱼给药前后肝组织病理情况及肝细胞凋亡情况;通过小鼠的急性毒性实验,得出LC50值。然后进行小鼠血清生化检测和组织病理切片分析。各个层面数据相互支持,补充验证,使研究基础更加全面可靠,结论更加合理。（2）选用HepaRG细胞研究重楼皂苷Ⅰ的肝细胞毒性机制。利用酶标仪、流式细胞仪、倒置荧光显微镜等对HepaRG细胞乳酸脱氢酶（LDH）释放、DAPI染色、活性氧（ROS）、线粒体膜电位（MMP）、细胞凋亡及细胞周期等进行测定,利用Western blot对凋亡相关蛋白进行检测;选用HUVEC细胞研究重楼皂苷Ⅰ的心血管毒性机制。从抑制新血管生成和促进心血管细胞凋亡两个方面评价了重楼皂苷Ⅰ的血管毒性机制。进行了LDH释放、细胞迁移、细胞凋亡、DAPI染色、细胞周期以及体外血管生成等研究,测定了近30个相关蛋白的表达。（3）利用TMT标记定量蛋白质组学技术检测给药组和对照组小鼠肝脏组织中的差异蛋白,对差异蛋白进行GO及Pathway通路富集分析;利用STRING11.0构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络;采用IPA软件进一步筛选出与表型相关的潜在生物标志物;利用Q300靶向代谢组学技术研究给药组和对照组小鼠血清样本中内源性代谢物的变化情况。采用PCA、OPLS-DA等分析小鼠内源性代谢物的轮廓变化。比较给药前后小鼠血清样本代谢谱的差异,寻找与重楼皂苷Ⅰ致肝毒性相关的代谢差异物及代谢调控网络。使用Cytoscape对蛋白组学和代谢组学做关联分析。采用PCR和Western blot技术对肝毒性机制中的关键蛋白进行进一步的验证。研究结果:（1）重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ毒性实验结果:重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ均具有明显的细胞毒性,能显着的促进H9c2细胞外其余8种细胞的凋亡,且呈现浓度和时间依赖性。对于H9c2细胞,3种皂苷均呈现出低剂量促进增殖,高剂量抑制增殖的作用;斑马鱼实验结果:重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ对斑马鱼的LC50分别为121、213、570 ng/mL,LC10分别为109、178、456ng/mL,MNLC分别为99、146、357ng/mL;毒性器官评价方面,重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ对斑马鱼具有显着的肝脏毒性,能明显降低斑马鱼肝脏面积和荧光强度;重楼皂苷Ⅰ能显着影响斑马鱼的心率,提示其具有心血管毒性;重楼皂苷Ⅰ和Ⅶ能降低斑马鱼肾脏面积和荧光强度,具有一定的肾毒性,但3种皂苷均未造成肾水肿;斑马鱼病理切片显示重楼皂苷Ⅰ给药组的肝组织出现空泡和严重的肝细胞坏死;TUNEL染色结果显示重楼皂苷Ⅰ给药组出现了肝细胞凋亡;动物实验结果:小鼠体内实验发现,重楼皂苷Ⅰ具有体内毒性,其LC50为24.5 mg/kg;给药组血清中ALT、AST显着升高,SOD降低;给药组病理切片显示出显着的肝细胞损伤和脂肪样变性以及一定的心脏毒性。（2）重楼皂苷Ⅰ肝细胞毒性机制:重楼皂苷Ⅰ显着升高了 HepaRG细胞中ROS水平,引起MMP下降,Cyt c从线粒体向胞浆中释放,早期及晚期凋亡细胞增多,LDH的释放量升高。改变了周期蛋白P21、cyclinA、cyclinE和CDK2的表达,诱导细胞周期阻滞。并且明显激活了凋亡通路蛋白Fas、P53、caspase-3、caspase-8、caspase-9的表达,且呈现剂量依赖关系;重楼皂苷Ⅰ血管毒性机制:重楼皂苷Ⅰ显着促进了心血管细胞LDH的释放,抑制细胞迁移和血管生成,改变周期分布,诱导细胞凋亡。给药后的细胞中VEGFR2、p-VEGFR2、Src、p-Src、PI3K、Src、P38、PLCy 等近 30 种蛋白的表达均发生了改变。（3）蛋白组学结果:共筛选出302个差异蛋白,其中上调蛋白182个,下调蛋白120个。差异蛋白具有氧化还原酶活性、催化活性等分子功能,参与了脂肪酸代谢、有机酸的代谢、药物代谢、氧化还原过程等生物过程。主要分布在细胞质和细胞内膜结合细胞器包括线粒体、内质网等;Pathway结果显示,差异蛋白在细胞色素P450酶对药物的代谢、细胞色素P450对外源物质的代谢、过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPARγ）等途径上富集程度较高;PPI网络分析发现差异蛋白主要聚集在三个功能区域,包括细胞色素P450酶、脂质代谢过程、氧化还原过程;IPA商业数据库筛选出9个与肝毒性相关的差异蛋白作为潜在生物标志物;代谢组学结果:给药组代谢物轮廓明显偏离对照组;通过多维和单维的差异代谢物的交集,筛选并初步鉴定出97种差异代谢物,25条代谢通路。结果归纳显示重楼皂苷Ⅰ造成了体内5个方面的代谢异常,包括氨基酸代谢、脂肪酸代谢、谷胱甘肽代谢、能量代谢、蛋白质合成;其中D-谷氨酰胺与D-谷氨酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,花生四烯酸代谢,氨酰tRNA生物合成等代谢通路影响值相对较高;代表性差异代谢物为花生四烯酸、焦谷氨酸、乙醇酸、酰基肉碱等。对全文中研究的重楼皂苷Ⅰ的肝毒性情况进行了综合分析,总结并推测了重楼皂苷Ⅰ造成肝毒性的机制。采用qPCR及Western blot验证了关键蛋白Bax、CYP1A2、P53、Fas的表达,对推测的肝损伤机制进行了初步验证。研究结论:（1）细胞实验研究发现重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ均具有肝脏、肾脏、心血管细胞毒性;斑马鱼实验研究确定了 3种皂苷中毒性最强的为重楼皂苷Ⅰ,毒性最明确的毒性靶部位是肝脏和心血管;斑马鱼肝脏病理切片、TUNEL染色,小鼠生化指标、病理切片检测进一步验证了重楼皂苷Ⅰ的肝脏和心脏毒性;（2）重楼皂苷Ⅰ肝细胞毒性机制为ROS应激通路和死亡受体通路介导的细胞凋亡;心血管毒性主要作用通路为VEGFR2激活的下游PI3K/AKT/mTOR、Src/eNOS、PLCy/ERK/MEK、P38信号通路,JAK2/STAT3信号传导通路和Bcl-2家族介导的凋亡通路,从诱导心血管细胞凋亡和抑制新生血管两方面产生心血管毒性。（3）蛋白质组学和代谢组学实验结果结合全文数据推测重楼皂苷Ⅰ诱导的肝毒性机制可能为CYP450酶和脂质代谢介导的线粒体功能障碍为主体的肝细胞损伤。药物影响了:①多种CYP450酶。主要包括Ⅰ相代谢酶CYP1A1、CYP1A2和Ⅱ相代谢酶GSTA3和UGT1A1表达紊乱,呈现下调趋势。药物在体内的水解、代谢过程被减慢,随着作用时间的延长,药物毒性反应增加。未被代谢的药物作用可能作用于线粒体,造成线粒体功能障碍;也很有可能是Ⅱ相药物代谢酶下调,产生的毒性代谢中间产物作用于线粒体,进一步产生了肝脏毒性;②脂质代谢。线粒体损伤后β-氧化的功能受到影响,体内的游离脂肪酸不能被氧化而转化成甘油三脂,导致了体内脂质的蓄积。同时ATP合成减少,供能障碍。脂质蓄积还能产生脂毒性进一步影响线粒体功能,产生过量ROS;③线粒体氧化应激。过量的ROS生成诱导线粒体氧化应激,释放Cyt c,升高Bax,降低Bcl-2,进而激活caspase家族导致肝细胞凋亡。Western blot验证结果显示药物代谢酶CYP1A2显着下调以及凋亡关键蛋白Bax表达上调。qPCR结果显示凋亡相关基因P53、Bax以及Fas的表达均显着上调,验证实验佐证了机制推论的合理性。
张圆圆[4]（2021）在《山核桃萜类醌的生物合成途径及其成分胡桃醌抑制Ishikawa癌细胞增殖的分子机理》文中指出山核桃,胡桃科,是一种广泛栽培的木本油料树种。山核桃仁因富含油脂、蛋白质、纤维、酚酸和萜类等生物活性成分而受到人们亲睐。子宫内膜癌是女性生殖道最常见的恶性肿瘤之一,膳食干预是预防疾病的重要措施。本论文首先调查了山核桃授粉后萜类醌的合成,联合转录组学与代谢组学方法明确了山核桃发育期萜类合成与代谢的机制;接着考察了山核桃青皮中胡桃醌对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖抑制效果,利用mRNA-miRNA组学从整体水平明确了胡桃醌对子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖抑制的机制;最后,明确了胡桃醌抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和迁袭的机制。本学位论文的研究结果为山核桃萜类化合物胡桃醌开发成特殊医学用途的功能性食品提供了理论的支持。（1）山核桃授粉后发育期萜类物质代谢机制。山核桃授粉后90-105天（P1-P2）是次级代谢物形成的关键时期。从P1至P2阶段,山核桃中的萜类化合物大量累积,而山核桃授粉后120-165天（P2-P6）萜类化合物含量急剧下降,此外,MENB和C4H基因在山核桃胚胎中高表达,最高的转录组表达量分别为671和1469,其中MENB的高表达水平可能是山核桃胚胎中萜类醌（萘醌）含量高的重要原因。通过网络共表达分析,6种萜烯醌代谢物与86个差异表达基因之间存在显着的正负相关性（r>0.8或<0.8,p<0.05）,且次级代谢产物的表达水平在早期是最高的,这与调控其差异表达基因水平基本一致。（2）山核桃青皮提取物胡桃醌抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖作用。利用超声波辅助提取山核桃青皮提取物的工艺条件为:85%乙醇浸泡8 h、料液比为1:8、超声提取30 min,40℃减压浓缩,在此条件下得到的山核桃青皮粗提取物经大孔树脂与硅胶柱联合纯化后,化合物含量为3.31 mg/kg,纯度为98%,经二次质谱和离子碎片数据数据库比对后该组分鉴定为胡桃醌。胡桃醌处理Ishikawa细胞24 h的半增殖抑制率(IC50)为20.81μmol/L。用不同浓度的胡桃醌（0、10、15、20μM）处理24 h后,Ishikawa细胞的形态变化呈剂量依赖性。（3）转录组学和miRNA组学联合分析胡桃醌抑制Ishikawa细胞增殖。子宫内膜癌Ishikawa细胞经胡桃醌（20μM）处理24 h后,942个mRNA的表达量差异显着。差异表达的mRNA中,789个上调、153个下调,其富集分析在与细胞周期和凋亡相关的通路上。通过Cytoscape的Cytohubba插件分析String数据库构建的差异表达mRNA间蛋白质-蛋白质互作关系（PPI）,发现筛选出的16个特征（Hub）基因主要参与细胞周期G1/S期和铁死亡相关HIF-1信号通路。胡桃醌处理Ishikawa细胞后50个miRNA的表达量显着变化,其中24个上调、26个下调。通过构建miRNA共表达网络,鉴定出4个关键的miRNA（hsa-let-7i-5p,hsa-let-7g-5p,hsa-mir-148b-3p和hsa-mir-148a-3p）,其靶基因富集分析在与凋亡相关通路中。miRNA-mRNA调控网络分析表明,胡桃醌诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖抑制与铁死亡和细胞凋亡、周期机制密切相关,且为进一步探究成为功能性食品成分提供线索。（4）胡桃醌诱导Ishikawa细胞凋亡及其机理。胡桃醌通过Cdc25A/CDK2/Cyclin A信号途径将Ishikawa细胞阻滞在S期,显着促进子宫内膜癌Ishikawa细胞的晚期凋亡的发生。胡桃醌诱导Ishikawa细胞凋亡,线粒体途径和死亡受体途径都参与其中。在线粒体途径中,抑凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-x L的表达显着下调,而促凋亡蛋白Bad和Bak表达上调。Caspase 3抑制剂与胡桃醌的联合作用在一定程度上减弱了这种抑制作用,表明线粒体途径中的Caspase3在胡桃醌诱导的Ishikawa细胞凋亡中起关键作用,进一步证实了线粒体途径参与胡桃醌诱导的细胞凋亡。同时在死亡受体途径中,TNF-α、TNF-R1、TRADD、FAS、FADD、Caspase 8、Caspase 10和DR3/5的mRNA和蛋白表达显着上调。当用Caspase-8抑制剂（Z-IETD-FMK）处理时,Caspase 8的表达水平显着降低;而胡桃醌的添加在一定程度上减弱了这种抑制作用,进一步说明了死亡受体通路参与了胡桃醌诱导的Ishikawa细胞凋亡。（5）胡桃醌诱导的子宫内膜癌Ishikawa细胞铁死亡及其机理。胡桃醌处理子宫内膜癌Ishikawa细胞24 h后,出现了Fe2+的积累、脂质过氧化、GSH消耗、HMOX1上调等现象,说明铁死亡可能参与了胡桃醌诱导的细胞死亡。在胡桃醌处理的Ishikawa细胞中,Beclin 1呈剂量依赖性下调。此外,胡桃醌和铁死亡抑制剂Fer-1联合处理24 h后,Ishikawa细胞中Beclin 1的表达增加,表明胡桃醌诱导细胞发生铁自噬。在胡桃醌处理的Ishikawa细胞中,E-cadherin、MMP 9和MMP 2蛋白发生显着变化。结果表明胡桃醌可能通过抑制上皮-间充质转化（EMT）来抑制Ishikawa细胞的迁移。同时,通过用Fer-1抑制剂和胡桃醌处理,进一步说明了胡桃醌诱导的Ishikawa细胞死亡与铁死亡有关。此外,胡桃醌诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞发生内质网应激。
马丽[5]（2020）在《Circ-9110吸附miR-100-5p调控奶山羊子宫内膜基质细胞增殖的分子机理研究》文中指出胚胎附植对雌性家畜受孕起决定性的作用。胚胎附植成功的两个不可或缺的因素是胚胎的质量和容受性的子宫内膜,相关研究表明,超过60%的体外授精胚胎植入失败是由子宫内膜容受性异常引起的,胚胎植入失败会给动物生产造成重大的损失。本课题组前期研究表明,mi RNAs和circ RNAs可能调控奶山羊容受性子宫内膜的建立。然而,mi RNAs和circ RNAs在奶山羊容受性子宫内膜中的作用和分子调控机理还需深入研究。根据实验室前期建立的数据库,得到奶山羊容受前期（PE,D5）和容受期（RE,D15）子宫内膜组织中差异性表达的mi RNAs。由于ESCs在子宫内膜容受期主要发挥增殖的作用,本试验通过采用双荧光素酶基因报告系统、RNA干扰、过表达、免疫荧光等技术,研究circ RNA、mi RNA和m RNA在奶山羊胚胎植入期对子宫内膜基质细胞增殖的调控作用及分子调控机理,获得以下研究结果:1.miR-100-5p对ESCs增殖的调控作用mi R-100-5p在RE中的表达量与PE相比显着下调（p<0.05）。在体外,mi R-100-5p mimic处理48 h后,降低ESCs的活力,抑制ESCs的增殖,凋亡相关蛋白caspase3的表达量与NC处理组相比显着上调,而Bcl2/Bax的比值显着下调（p<0.01）。相反的,mi R-100-5p inhibitor处理48 h后,促进ESCs的活力,促进ESCs的增殖,caspase3的蛋白表达量与NC处理组相比显着下调,而Bcl2/Bax的比值显着上调（p<0.01）。2.miR-100-5p的靶基因HOXA1对ESCs增殖的调控作用本研究通过构建双荧光素酶报告发现,HOXA1是mi R-100-5p的靶基因,并且mi R-100-5p下调HOXA1在ESCs中m RNA（p<0.05）和蛋白的表达量（p<0.01）。此外,HOXA1在RE中的表达量显着高于PE中的表达量（p<0.05）。另外,在构建HOXA1过表达载体时发现,HOXA1 X1有缺失,HOXA1 X2与预测片段完全匹配。在体外,HOXA1可促进ESCs的活力,促进ESCs的增殖,过表达的HOXA1使caspase3的蛋白表达量显着下调,而Bcl2/Bax的比值显着上调（p<0.01）。相反的,HOXA1 si RNA降低ESCs的活力,抑制ESCs的增殖,敲低HOXA1使caspase3的蛋白表达量显着上调,而Bcl2/Bax的比值显着下调（p<0.01）。3.circ-9110作为ce RNA通过吸附mi R-100-5p对ESCs增殖的调控作用本研究通过构建双荧光素酶报告发现,circ-9110吸附mi R-100-5p,且circ-9110下调mi R-100-5p在ESCs中的表达（p<0.05）。此外,circ-9110在RE中的表达量显着高于PE中的表达量（p<0.05）。在体外,circ-9110促进ESCs的活力,促进ESCs的增殖,过表达的circ-9110使caspase3的蛋白表达量显着下调,而Bcl2/Bax的比值显着上调（p<0.01）。相反的,circ-9110 si RNA降低ESCs的活力,抑制ESCs的增殖,敲低circ-9110使caspase3的蛋白表达量显着上调,而Bcl2/Bax的比值显着下调（p<0.01）。4.circ-9110/mi R-100-5p/HOXA1对ESCs增殖的调控机理在ESCs中,mi R-100-5p降低了p-PI3K,p-AKT,p-m TOR,p-ERK1/2的蛋白的相对表达水平（p<0.01）,从而抑制了PI3K/AKT/m TOR和ERK1/2通路,而HOXA1和circ-9110激活了PI3K/AKT/m TOR和ERK1/2通路。circ-9110能够作为ce RNA吸附mi R-100-5p进而调控ESCs。综上所述,circ-9110、mi R-100-5p和HOXA1在奶山羊容受性子宫内膜中具有差异性表达,初步揭示了circ-9110吸附mi R-100-5p通过HOXA1参与奶山羊容受性子宫内膜的调控。本研究对探索奶山羊子宫内膜容受性建立的机制和提高奶山羊繁殖性能提供了试验依据。
龚弟鸿[6]（2020）在《补阳还五汤含药血清对神经元OGD损伤后凋亡和凋亡相关蛋白的影响》文中认为目的:以大鼠神经母细胞瘤细胞（B35）OGD（Oxygen-Glucose Deprivation Model）模型为基础,通过采用血清药理学方法,观察经方补阳还五汤含药血清对OGD损伤所致细胞凋亡及其对凋亡相关蛋白表达的影响,探讨补阳还五汤对缺血性脑卒中后脑组织缺血缺氧损伤所致细胞凋亡的保护作用机制,为临床应用补阳还五汤治疗缺血性脑卒中提供科学的理论依据。方法:1.B35细胞氧糖剥夺（Oxygen glucose deprivation,OGD）模型的构建。利用氯化钴模拟缺氧环境（氯化钴浓度分别为0.7mmol/ml、0.8mmol/ml0.9mmol/ml、1.0mmol/ml）及1/2含糖培养基模拟缺糖环境联合处理B35细胞12h,以CCK-8检测细胞存活率,以便选取合适的氯化钴造模浓度。2.结合第一步选定的氯化钴浓度制作OGD模型（氯化钴造模浓度为0.8mmol/ml,以DMEM-F12和无糖DMEM制作1/2含糖培养基）。通过流式细胞术对OGD的细胞进行凋亡率分析,通过透射电镜对OGD后细胞凋亡情况及凋亡细胞形态进行分析,初步评价模型是否构建成功。3.检测补阳还五汤含药血清处理后对B35细胞存活率和凋亡率的影响。分别以低剂量的补阳还五汤含药血清（10%）和高剂量的补阳还五汤含药血清（15%）处理OGD组细胞,通过CCK-8和流式细胞术对补阳还五汤含药血清处理过后的细胞进行细胞存活率和细胞凋亡率的分析,评价补阳还五汤含药血清对B35细胞存活率和凋亡率的影响。4、通过Western blot检测补阳还五汤含药血清处理前后,细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Casepase-3的变化。评价补阳还五汤含药血清处理对细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Casepase-3的调节作用。结果:1、随着氯化钴浓度的增加,细胞的存活率呈现逐渐下降的趋势,氯化钴浓度0.6mmol/ml、0.7mmol/ml、0.8mmol/ml、0.9mmol/ml的细胞存活率分别为（85.38±2.1）%、（78.25±2.0）%、（50.24±2.1）%、（46±2.2）%;选取氯化钴浓度0.8mmol/ml进行OGD造模,经流式细胞术及透射电镜检测,与空白对照组相比,该浓度可明显诱导细胞凋亡,差异具有统计学意义。2、空白对照组、OGD组、补阳还五汤含药血清低剂量组、补阳还五汤含药血清高剂量组细胞存活率分别为（95.09±0.73）%、（49.77±2.52）%、（60.00±2.65）%、（64.85±1.44）%。与空白对照组相比,OGD组细胞存活率显着降低,差异具有显着性（P<0.05）;与模型组相比,BYHWD含药血清低剂量组和高剂量组细胞存活率升高,差异具有显着性（P<0.05）。BYHWD含药血清高剂量组与低剂量组在改善细胞存活率上具有显着性差异（P<0.05）。与OGD组相比,BYHWD含药血清高、低剂量组可降低细胞凋亡率,p<0.01,差异具有统计学意义;BYHWD含药血清高、低剂量组在降低细胞凋亡率上具有差异性,P<0.05,差异具有统计学意义3、与空白对照组相比,模型组caspase-3、bax蛋白表达量显着升高（P<0.01）,bcl-2蛋白表达量显着降低（P<0.01）;与模型组相比,补阳还五汤含药血清低剂量组caspase-3表达量降低（P<0.05）,bax表达量无显着性差异,bcl-2表达量升高（P<0.05）;与模型组相比,补阳还五汤含药血清高剂量组caspase-3、bax表达量降低（P<0.01）,bcl-2表达量升高（P<0.05）;补阳还五汤含药血清高剂量组与低剂量组之间无显着性差异（P>0.05）。结论:1.利用氯化钴（浓度0.8mmol/ml）模拟缺氧环境及1/2含糖培养基模拟缺糖环境联合处理B35细胞12h能够诱导正常B35细胞的发生凋亡,并成功制作B35细胞OGD模型。2.补阳还五汤含药血清处理凋亡细胞可以减少细胞凋亡率,增加细胞存活率。3.OGD处理使B35细胞促凋亡蛋白caspase-3、bax的表达增加,使抗凋亡蛋白Bcl-2的表达减少;而补阳还五汤含药血清高剂量处理细胞可以降低caspase-3、bax蛋白的表达,増加Bcl-2蛋白的表达,从而抑制神经细胞调亡,发挥神经保护作用,这可能是补阳还五汤减少神经细胞凋亡,治疗缺血性脑卒中的机制之一。综上所述,利用氯化钴模拟缺氧环境及1/2含糖培养基模拟缺糖环境联合处理B35大鼠神经母细胞瘤细胞12h可以显着诱导细胞凋亡,降低细胞存活率,建立细胞OGD模型;且OGD处理可以使细胞促凋亡蛋白caspase-3、bax的表达增加,使抗凋亡蛋白Bcl-2的表达减少,Bcl-2/bax比率增加,这是神经元细胞凋亡的机制之一。在予以高剂量的补阳还五汤含药血清（15%）处理细胞后,使促凋亡蛋白caspase-3、bax蛋白的表达降低,使抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白的表达增加,Bcl-2/bax比率上升,从而抑制细胞凋亡,提高细胞存活率,发挥神经保护作用。这可能是补阳还五汤治疗缺血性脑卒中的机制之一。
安妮[7]（2020）在《抑制Rac1减轻小鼠放射性肺损伤并增敏肺癌放疗的作用与机制》文中研究表明研究背景:放疗（radiation therapy,RT）至今仍是多种恶性肿瘤治疗的重要手段,其目标是彻底消除肿瘤或在降低肿瘤负荷的同时保留正常组织。40%的肿瘤患者会接受RT,用于治愈、局部控瘤或缓解症状。肺脏是胸部放疗最易损伤的器官之一,胸部放疗容易引起放射性肺损伤（Radiation-induced lung injury,RILI）,成为限制肿瘤患者胸部照射剂量的主要因素,是胸部放疗难以避免的并发症之一。RILI显着影响肺癌、乳腺癌、淋巴瘤或骨髓移植全身放疗患者的治疗,降低肿瘤控制概率（tumor control probability,TCP）并可能导致呼吸困难、肺纤维化,影响患者生存质量。近年来,得益于高精度放疗技术的进步、对RILI分子机制的深入了解,以及预防与治疗药物的不断发现,RILI的发病率有所下降,但是,仍然缺乏对RILI安全有效的防治手段。而且,许多针对RILI的防护药物往往也对肿瘤产生辐射防护的效果,限制了该类药物的临床应用。理想的辐射防护剂应对正常组织具有辐射防护作用,同时又不影响放射对肿瘤细胞的杀伤效果甚至能增加肿瘤的辐射敏感性。因此,能否找到这种具有“双向”作用的辐射防护剂或分子靶点也成为提高肿瘤放疗效果的关键所在。Ras相关C3肉毒毒素底物1（Ras-related C3 botulinum toxin substrate1,Rac1）,属于小分子鸟苷三磷酸酶（guanosine triphosphatases,GTPases）Rho家族。既往研究表明,Rac1参与氧化应激与DNA损伤过程、与TGF-β通路关系密切、参与上皮-间质细胞转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）,以上生物学过程均为放射性损伤的重要机制。因此,Rac1可能是介导放射性损伤的重要分子,抑制Rac1可能对放射性肺损伤存在保护效应。另一方面,研究表明,多种肿瘤细胞存在Rac1过表达或突变,Rac1存在癌症相关功能获得性（gain-of-function,GOF）突变,不仅参与肿瘤形成、进展、侵袭及血管形成等多个方面,还介导肿瘤细胞对放化疗及免疫治疗的抗性。抑制Rac1可抑制肿瘤生长、恢复许多病例对靶向治疗的敏感性。综上,Rac1可能在放射性肺损伤的发生发展中具有重要作用,同时又对肺癌放疗产生重要影响,因此,抑制Rac1可能同时具有对正常组织的辐射防护潜力,还可抑制肿瘤生长、增加肿瘤对放疗的敏感性,是非常有前景的理想辐射防护分子靶点,这一研究国内外均无相关报道。本文一方面针对Rac1在胸部放疗所致肺损伤中的作用进行研究,从动物和细胞两个水平观察抑制Rac1对放射性肺损伤的防护效果,另一方面验证其对肿瘤放疗的影响。并进一步通过转录组测序及分析,筛选并验证Rac1下游的作用分子,从而阐明Rac1与放射性肺损伤及肿瘤放疗关系的作用机制。研究目的:探索抑制Rac1对放射性肺损伤的防护作用及机制,验证抑制Rac1对正常肺组织与肿瘤细胞的差异效应,探索介导该差异效应的分子机制。研究方法:使用60Co放射源,构建放射性肺损伤小鼠模型,使用Rac1特异性抑制剂NSC23766和H&E染色、Masson染色方法,研究抑制Rac1对模型小鼠照射后肺组织肺炎、肺纤维化程度的影响,并通过免疫组织化学染色法研究抑制Rac1对模型小鼠照射后肺组织DNA损伤标志物磷酸化H2AX（γ-H2AX）、放射损伤标志物TGF-β和EMT标志物vimentin的表达影响。使用小鼠正常肺上皮细胞系MLE-12,使用Rac1特异性抑制剂NSC23766及构建Rac1敲除细胞系的方式,通过免疫蛋白印迹法（Western Blot,WB）研究放射后凋亡相关蛋白、细胞周期相关蛋白及DNA损伤相关蛋白表达变化,通过流式细胞仪检测细胞凋亡率、PI/RNase染色法检测细胞周期分布、Ed U法检测细胞增殖活力,从细胞水平上验证抑制Rac1对放射性肺损伤的保护效应。通过转录组测序寻找抑制Rac1引起的差异基因表达,筛选抑制Rac1介导其效应的可能通路,实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,q PCR）法验证转录组测序结果,从细胞水平上研究介导Rac1差异作用的分子机制。进一步利用小鼠肺癌细胞系LLC研究抑制/敲除Rac1对肿瘤细胞的辐射增敏效应。最后,构建裸鼠皮下荷瘤模型、小鼠肺部原位荷瘤模型,结合使用Rac1抑制剂NSC23766,进一步在体验证抑制Rac1对正常肺组织与肿瘤细胞的双向作用。研究结果:（1）Rac1抑制剂NSC23766可减轻小鼠放射性肺炎及肺纤维化;（2）抑制或敲除Rac1对MLE-12细胞的增殖活力无明显影响,可减少MLE-12细胞照射后凋亡、逆转MLE-12细胞照射后G2/M期阻滞、减轻MLE-12细胞照射后DNA损伤;（3）敲除Rac1可下调肿瘤蛋白p53诱导核蛋白1（Tumor protein p53-inducible nuclear protein 1,Trp53inp1）,过表达Trp53inp1可部分逆转敲除Rac1对MLE-12的辐射防护效应;（4）抑制或敲除Rac1可显着抑制LLC细胞增殖活力、增加LLC细胞照射后凋亡,对LLC细胞照射后周期阻滞无明显影响;（5）过表达Trp53inp1可协同敲除Rac1的促LLC凋亡效应,对小鼠肺癌细胞周期及增殖活力无明显影响;（6）肿瘤细胞LLC的Rac1表达显着高于正常肺上皮细胞MLE-12,且存在Rac1插入突变;（7）肿瘤细胞LLC的Trp53inp1表达显着低于正常肺上皮细胞MLE-12;（8）裸鼠皮下荷瘤及小鼠肺部原位荷瘤模型在体验证表明,抑制Rac1可显着抑制肿瘤细胞生长,同时对正常肺组织存在辐射防护效应。研究结论:抑制Rac1可减轻放射性肺损伤小鼠模型的放射性肺炎、肺纤维化,减少正常肺上皮细胞照射后凋亡、逆转照射引起的正常肺上皮细胞周期阻滞、减轻放射性DNA损伤,该效应部分通过下调Trp53inp1介导,过表达Trp53inp1可部分逆转抑制Rac1对正常肺上皮细胞的辐射防护效应。此外,抑制Rac1可显着增加小鼠肺癌细胞LLC对放射损伤的敏感性、显着抑制小鼠肺癌细胞生长。与正常肺上皮细胞相比,小鼠肺癌细胞Rac1过表达且突变、Trp53inp1表达显着降低,可能是介导抑制Rac1对正常细胞及肿瘤细胞差异效应的原因。
李春楠[8]（2020）在《中药栀子不良反应与肝肾毒性机制研究》文中认为【目的】为了栀子的合理应用,了解栀子不良反应,本文以栀子为研究对象,围绕其毒副作用及其肝肾毒性机制开展相关研究,期望通过上述研究,进一步明确栀子可引起不良反应的成分,阐明栀子对肝、肾毒性影响,探讨其毒性分子机制,使栀子在发挥药理活性作用的基础上,避免或减轻毒性作用,为栀子资源的开发和临床合理应用奠定基础。【方法与结果】1 基于体外细胞筛选栀子肝毒性成分采用LC-ESI-MS/MS法对栀子主要化合物进行指认鉴定,并通过CCK-8法比较了栀子提取物及其化学成分作用后的正常大鼠肝细胞（BRL-3A）存活率,筛选栀子可引起不良反应的化学成分,并进一步对细胞毒性影响进行研究。结果表明:水提物抑制率高于醇提物抑制率,并鉴定出栀子水提物中山栀苷、京尼平苷酸、羟异栀子苷、京尼平-1-龙胆双糖苷、绿原酸、栀子苷、西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ和西红花酸等9种化学成分;CCK-8法筛选出环烯醚萜类成分山栀苷、羟异栀子苷、京尼平-1-龙胆双糖苷、栀子苷和代谢产物京尼平对细胞有抑制作用,细胞周期检测栀子苷及京尼平可引起细胞周期G2/M阻滞,S期延长,细胞凋亡率随着给药浓度增加而增加,细胞数量明显减少。2 栀子在大鼠体内的肝肾毒性研究为了进一步评价栀子对大鼠肝、肾毒性影响,将大鼠分为空白组、水提物组（165mg/kg、330 mg/kg、660 mg/kg）、栀子苷组（50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg）和京尼平组（25 mg/kg、50 mg/kg）进行给药,取大鼠肝、肾组织,常规石蜡切片后H&E染色,显微观察病理学变化;采用比色法、酶联免疫吸附法（ELISA）检测大鼠血清中生化指标和炎性因子。结果表明:与空白组相比,给药后大鼠肝、肾脏器指数升高,高剂量组大鼠死亡数量较多,其AST、ALT、ALP、CRE和BUN指标水平显着升高,炎性因子TNF-α、IL-6β、NO含量也不同程度提高,病理检测显微观察下肝、肾组织在高剂量组发生了显着的炎性细胞浸润和肿胀。3 栀子肝毒性的转录组学研究基于转录组学技术对栀子给药前后的大鼠肝组织进行基因测序与分析,质量评估合格后将样品进行文库制备与测序,进行基因比对,找到差异表达基因,利用GO、KEGG数据库进行基因表达分析,阐明基因功能及富集通路,随后应用q-PCR对Rhoc、Akr7a3、Gpx2、Isg20、Tmed3、Cbr1等共有差异表达基因进行验证。结果表明:与正常肝组织基因比对,栀子水提物给药组筛选出3122个差异表达基因,其中下调基因有1703个,上调基因有1419个,GO分析主要富集在细胞迁移的调节过程,KEGG主要富集在脂肪酸生物合成、蛋白酶体等通路;栀子苷给药组筛选出617个差异表达基因,其中下调基因有370个,上调基因有247个,GO分析主要富集在氧化还原活性过程,KEGG主要富集在昼夜节律、生物合成等通路;京尼平给药组筛选出1451个差异表达基因,其中下调基因有686个,上调基因有765个,GO分析主要富集在胆汁酸与胆盐转运过程,KEGG主要富集在氨基酸代谢等通路;三个给药组中共有176个相同的差异表达基因,其验证m RNA表达结果与分析数据一致。4 栀子引起大鼠肝肾毒性分子机制研究应用比色法对大鼠的肝、肾组织中SOD、GSH和MDA水平进行检测,利用免疫组织化学染色法检测肝肾组织中NF-κBp65和Caspase-3的表达,Western Blot法检测大鼠肝肾组织中Nrf2、HO-1、NF-κBp65、Cox-2、i NOS、Caspase-3和Bax的蛋白表达情况,并利用分子对接模拟技术进一步计算TNFR1配体与受体的结合作用。实验结果显示:给药栀子水提物、栀子苷和京尼平后大鼠肝肾组织中SOD、GSH水平均呈现不同程度降低,MDA水平增加,NF-κBp65、Cox-2、i NOS、Bax和Caspase-3蛋白表达升高,Nrf2、HO-1蛋白表达降低;栀子苷、京尼平与TNFR1蛋白分子对接结合能分别为-7.34 kcal/mo L和-6.97kcal/mo L。【结论】经过对栀子中10个化学成分的体外筛选发现环烯醚萜类成分是栀子引起毒性不良反应的主要成分,其肝肾毒性作用机制与栀子成分可激活炎性通路,降低抗氧化应激能力有关,进而促进细胞凋亡,并在细胞转导、代谢、氧化还原等方面出现转录基因差异表达,因此栀子不要超出药典规定用量或长期服用,本研究为栀子的毒理学研究及其合理应用奠定了一定基础。
朱静[9]（2020）在《养阴化瘀解毒方对常氧和低氧条件下结肠癌细胞增殖与凋亡的影响》文中进行了进一步梳理目的恶性增殖和逃避细胞死亡是肿瘤形成的标志。本课题基于结肠癌在中医学中的阴虚、热毒、血瘀等病因病机特点,探讨养阴化瘀解毒方（Yangyin Huayu Jiedu Decoction,YYHYJDD）含药血清对常低氧环境下的结肠癌细胞增殖与凋亡影响的作用机制,为结肠癌的治疗和科研实践提供思路。方法1.常氧条件下养阴化瘀解毒方含药血清对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响:（1）采用MTS比色法,检测YYHYJDD含药血清在常氧条件下对结肠癌HCT116细胞增殖的影响;（2）AOEB染色法观察含药血清对HCT116细胞形态学变化的影响;（3）Annexin V-FITC/PI双染后流式细胞术法检测含药血清对结肠癌HCT116细胞凋亡的影响;（4）蛋白质免疫印迹法（Western Blot）检测结肠癌HCT116细胞凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白（Bax）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）前体蛋白的表达情况。2.不同氧浓度对结肠癌HCT116细胞增殖的影响:（1）建立（1%O2、5%O2、20%O2）氧浓度模型,MTS法检测不同氧浓度对结肠癌HCT116细胞增殖的影响,筛选出结肠癌细胞增殖最强的和最慢的氧气浓度;（2）将筛选的氧浓度进行Annexin V-FITC/PI双染法检测HCT116细胞增殖周期、凋亡情况;（3）荧光定量PCR检测结肠癌HCT116细胞在不同氧浓度下HIF-1αm RNA基因的表达情况;（4）蛋白检测结肠癌HCT116细胞在两种氧浓度下HIF-1α蛋白表达情况。3.低氧条件下YYHYJDD含药血清对结肠癌HCT116细胞增殖与凋亡的影响:（1）采用MTS比色法,检测YYHYJDD含药血清在低氧条件下对结肠癌细胞增殖的影响;（2）AOEB染色观察含药血清对结肠癌HCT116细胞凋亡形态学变化;（3）Annexin V-FITC/PI双染后流式法细胞术后检测含药血清对HCT116细胞凋亡情况;（4）Western Blot检测低氧诱导因子1α（HIF-1α）及下游Bcl-2、Bax、Caspase-3前体相关靶蛋白的表达情况。结果1.常氧条件下养阴化瘀解毒方含药血清对结肠癌细胞增殖与凋亡检测结果:（1）与空白血清对照组相比,养阴化瘀解毒方含药血清低中高剂量组细胞的活性抑制从48 h开始出现明显趋势,抑制率在72 h最强（P<0.05,P<0.01）;（2）干预48h AOEB染色HCT116细胞呈现不同时期的凋亡形态;（3）流式细胞术显示低中高剂量含药血清组干预HCT116细胞晚期凋亡明显,总凋亡率与空白对照组相比差异显着（P<0.01）;（4）Western Blot结果YYHYJDD含药血清在高剂量浓度组下调Bcl-2、Caspase-3前体蛋白表达,中高剂量浓度组Bax的表达上调,Bcl-2/Bax比值下调（P<0.05,P<0.01）。2.1%O2、5%O2、20%O2的三种不同的氧气条件检测结果:（1）HCT116细胞24 h至96 h结肠癌细胞出现增长趋势,与1%O2和20%O2条件相比,5%O2下HCT116细胞增殖速度最快（P<0.05,P<0.01）,与1%O2和5%O2相比,20%O2条件下HCT116细胞增殖速度相对较慢（P<0.05,P<0.01）;（2）流式周期和凋亡实验:5%O2的结肠癌细胞在S期和G2/M期比值大于20%O2条件下的结肠癌细胞（P<0.05,P<0.01）;（3）Western Blot结果,与20%O2相比,5%O2条件下HIF-1α蛋白水平上调（P<0.01）。3.低氧条件下养阴化瘀解毒方含药血清对结肠癌细胞增殖、凋亡检测结果:（1）与低氧空白对照组相比,YYHYJDD含药血清干预HCT116细胞在48 h、72 h抑制率最显着（P<0.05,P<0.01）;（2）AOEB染色含药血清干预结肠癌细胞凋亡随含药血清的浓度增加而增大（P<0.05,P<0.01）;（3）流式结果YYHYJDD含药血清能促进HCT116细胞发生凋亡（P<0.05,P<0.01）;（4）Western Blot结果该方含药血清在低中高三个剂量浓度组能上调Bax的表达（P<0.01）,可以在中剂量浓度组下调Bcl-2的表达（P<0.05）,高剂量浓度组有下调Caspase-3前体蛋白的趋势,在中高剂量浓度组能够下调HIF-1α表达（P<0.05）。结论1.常氧条件下养阴化瘀解毒方含药血清能够抑制结肠癌HCT116细胞增殖活性,可能通过下调Bcl-2/Bax比值、Caspase-3前体蛋白的表达,发挥促凋亡的作用。2.5%O2氧浓度结肠癌细胞增殖速度最快、可能的机制是使结肠癌细胞的增殖停留在S、G2/M期,并在分子水平上调HIF-1α蛋白的表达。3.养阴化瘀解毒方含药血清也可在低氧条件下有一定的时效性、抑制结肠癌HCT116细胞增殖,并使细胞凋亡形态和凋亡率发生改变,发挥促凋亡的作用,可能与下调HIF-1a的表达及其下游相关的的信号分子Bcl-2/Bax的比值、Caspase-3前体蛋白的表达有关。
文帅[10]（2020）在《柑橘茶抑制肝癌细胞增殖与缓解非酒精性脂肪肝的作用及机制》文中研究指明探究具有广东地理标志的天然产物——柑橘皮和英红九号茶叶,二者结合而成的柑橘茶抑制肝癌细胞（Hepatocellular carcinoma cells,HCC）增殖的作用与机制,以及缓解非酒精性脂肪肝（Non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD）的作用与机制。参考国标和相关文献,检测活性成分含量,测定自由基清除能力。采用3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氮唑溴盐检测（3-（4,5-Dimethyl-2-thiazolyl）-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT）和伤口愈合（Wound healing,WH）实验检测柑橘茶对肝癌细胞增殖和迁移的抑制作用,采用流式细胞术（Flow cytometry,FL）检测各橘红茶组的细胞周期和细胞凋亡率,用蛋白免疫印迹（Western blot,WB）方法分析抗HCC增殖的分子机制。利用试剂盒检测血脂生理指标变化,采用苏木素-伊红（Hematoxylin-eosin,HE）染色分析肝脏病理学变化,通过WB和免疫组化（Immunohistochemistry,IHC）方法探究缓解NAFLD的分子机制。结果:（1）柑橘茶含有茶多酚、表没食子儿茶素没食子酸酯（Epigallocatechin gallate,EGCG）、橙皮苷（Hesperidin）等多种功能成分,且具有明显清除多种自由基的作用。（2）CRPBT显着抑制肝癌细胞的增殖与迁移,对正常肝细胞LO2无显着影响,可显着下调磷酸肌醇3-激酶（Phosphoinositide 3-kinase,PI3K）和蛋白激酶B（Protein kinase B,AKT）的蛋白磷酸化水平,同时,显着下调基质金属蛋白酶（Matrix metalloproteinase,MMP）-2/9等蛋白表达水平。（3）YT-CM组和GT-CM组抑制肝癌细胞的增殖作用显着优于BT-CM组。YT-CM组和GT-CM组对肝癌细胞的细胞周期阻滞作用与BT-CM组相比较强,且细胞凋亡率显着高于BT-CM组。给茶组均显着下调PI3K、AKT、雷帕霉素的哺乳动物靶标（Mammalian target of rapamycin,mTOR）的蛋白磷酸化水平,且显着调控线粒体凋亡相关蛋白表达水平,其中,YT-CM组和GT-CM组的调控作用较强。（4）各给茶组小鼠的体重、体重增加值、Lee’s指数显着降低,肝脏重量和肝脏指数较模型组显着减少,BT-CM组的影响最为明显。各给茶组均显着调节模型组血清肝脏的各项生理指标指标异常,BT-CM组调节作用较显着。各给茶组显着减少脂质空泡,明显减轻炎性浸润,BT-CM组表现较优。GT-CM组和YT-CM组调控AMP激活蛋白激酶（AMP activated protein kinase,AMPK）蛋白磷酸化水平和脂肪酸合成酶（Fatty acid synthase,FAS）蛋白表达水平较好,BT-CM组调控乙酰辅酶A羧化酶（Acetyl-CoA carboxylase,ACC）的蛋白磷酸化水平和脂肪酸氧化限速酶-肉碱脂酰转移酶-1（Carnitine palmitoyltransferase 1,CPT1）蛋白表达水平较优。结论:（1）柑橘茶含有儿茶素和橙皮苷等多种活性成分,并呈现较强的体外抗氧化能力。（2）小青柑红茶可调控PI3K/AKT和MMPs信号通路,抑制肝癌细胞的增殖和迁移侵袭。（3）化州橘红茶可激活PI3K/AKT/mTOR信号通路,调控线粒体凋亡蛋白表达水平,诱导肝癌细胞凋亡。（4）化州橘红茶可激活AMPK/ACC和AMPK/FAS信号通路促进脂肪氧化,抑制脂肪合成,减少脂肪积累,缓解非酒精性脂肪肝。
二、细胞凋亡检测的研究进展（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、细胞凋亡检测的研究进展（论文提纲范文）
（1）视黄醇结合蛋白4对猪卵泡颗粒细胞功能的影响及其机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第1章 哺乳动物卵泡发育调控的研究进展 |
| 1.1 哺乳动物卵泡发育的特点 |
| 1.2 哺乳动物卵泡发育和闭锁的调控 |
| 1.3 颗粒细胞对哺乳动物卵泡发育和闭锁的影响 |
| 第2章 RBP4的研究进展 |
| 2.1 RBP蛋白简介 |
| 2.2 RBP基因简介 |
| 2.3 RBP4生物学功能 |
| 第3章 RBP4在动物繁殖中的研究进展 |
| 3.1 RBP4的基因多态性与母猪繁殖性能 |
| 3.2 RBP4在生殖系统中的表达和定位 |
| 3.3 RBP4与卵巢颗粒细胞 |
| 第二篇 研究内容 |
| 第1章 pLVX-RBP4慢病毒过表达载体的构建、包装和鉴定与si RNA干扰效果研究 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.3 结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第2章 RBP4对猪卵泡颗粒细胞凋亡和孕酮分泌的影响 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第3章 RBP4调控猪卵泡颗粒细胞功能的分子机制解析 |
| 3.1 材料 |
| 3.2 方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第4章 RBP4通过ERK1/2通路调控猪卵泡颗粒细胞凋亡和孕酮分泌的机制研究 |
| 4.1 材料 |
| 4.2 方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 导师简介 |
| 作者简介 |
| 攻读博士期间取得的科研成果 |
| 致谢 |
（2）龙鳖胶囊通过miR-675靶向TBK1调控细胞自噬影响软骨细胞功能的机制研究（论文提纲范文）
| 答辩委员会名单及评定意见 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 骨关节炎中西医诊疗文献研究 |
| 1.1 OA现代医学研究概况 |
| 1.1.1 OA概述 |
| 1.1.2 OA的流行病学研究 |
| 1.1.3 OA的发病机制研究 |
| 1.1.4 自噬与OA的关系 |
| 1.1.5 KOA现代医学诊疗研究概述 |
| 1.2 KOA中医研究概况 |
| 1.2.1 KOA的中医病因病机研究 |
| 1.2.2 KOA的中医证候学研究 |
| 1.2.3 KOA的中医治疗研究进展 |
| 1.2.4 补肾活血中药治疗KOA的临床研究进展 |
| 1.2.5 补肾活血中药治疗KOA的机制研究 |
| 1.2.6 龙鳖胶囊治疗KOA的研究概况 |
| 第二章 miR-675和TBK1在OA大鼠关节软骨中的表达 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验仪器或耗材 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.1.3 实验动物 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 SD大鼠OA模型的制作 |
| 2.2.2 SD大鼠实验取材 |
| 2.2.3 病理切片制作和关节软骨染色 |
| 2.2.4 提取软骨组织或软骨细胞的RNA |
| 2.2.5 RNA逆转录操作流程 |
| 2.2.6 实时荧光定量PCR(RT-PCR) |
| 2.2.7 统计学方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 HE染色结果 |
| 2.3.2 番红-O-固绿染色结果 |
| 2.3.3 miR-675在SD大鼠OA模型关节软骨中的表达 |
| 2.3.4 TBK1在SD大鼠OA模型关节软骨中的表达 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 miR-675靶向TBK1影响OA软骨细胞相关功能的机制研究 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验仪器或耗材 |
| 3.1.2 实验试剂 |
| 3.1.3 人OA软骨组织标本 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 人OA原代软骨细胞的分离提取 |
| 3.2.2 人OA原代软骨细胞的培养换液 |
| 3.2.3 人OA原代软骨细胞的传代培养 |
| 3.2.4 人OA原代软骨细胞的冻存 |
| 3.2.5 人OA原代软骨细胞的复苏培养 |
| 3.2.6 人OA原代软骨细胞蛋白的提取及浓度测定 |
| 3.2.7 甲苯胺蓝染色 |
| 3.2.8 Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光染色 |
| 3.2.9 CCK-8细胞活性检测 |
| 3.2.10 蛋白质免疫印迹法(Western Blot,WB) |
| 3.2.11 细胞凋亡检测(流式细胞术) |
| 3.2.12 EdU细胞增殖检测 |
| 3.2.13 siRNA转染技术 |
| 3.2.14 慢病毒转染技术 |
| 3.2.15 双荧光素酶报告基因检测 |
| 3.2.16 提取人OA软骨细胞RNA |
| 3.2.17 实时荧光定量PCR(RT-PCR) |
| 3.2.18 统计学方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 人OA软骨细胞的分离、提取与鉴定 |
| 3.3.2 miR-675对软骨细胞相关功能的影响 |
| 3.3.3 TBK1对软骨细胞相关功能的影响 |
| 3.3.4 miR-675靶向TBK1对OA软骨细胞相关功能的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 人OA原代软骨细胞分离提取的方法学探讨 |
| 3.4.2 miR-675对软骨细胞相关功能的影响 |
| 3.4.3 TBK1对软骨细胞相关功能的影响 |
| 3.4.4 miR-675靶向TBK1对OA软骨细胞相关功能的影响 |
| 第四章 基于miR-675/TBK1信号轴研究龙鳖胶囊调控自噬影响软骨细胞功能的分子机制 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验仪器或耗材 |
| 4.1.2 实验试剂 |
| 4.1.3 实验动物 |
| 4.1.4 人OA原代软骨细胞 |
| 4.1.5 实验药物 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 龙鳖胶囊含药血清的制备 |
| 4.2.2 CCK-8细胞活性检测 |
| 4.2.3 蛋白质免疫印迹法(Western blot,WB) |
| 4.2.4 细胞凋亡检测(流式细胞术) |
| 4.2.5 EdU细胞增殖检测 |
| 4.2.6 siRNA转染技术 |
| 4.2.7 统计学方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 龙鳖胶囊含药血清对软骨细胞相关功能的影响 |
| 4.3.2 龙鳖胶囊调控miR-675/TBK1信号轴影响软骨细胞功能的分子机制 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 中药复方含药血清在中医药基础研究中的优势 |
| 4.4.2 龙鳖胶囊含药血清最佳干预浓度的选择 |
| 4.4.3 龙鳖胶囊含药血清对软骨细胞相关功能的影响 |
| 4.4.4 龙鳖胶囊通过miR-675/TBK1信号轴调控细胞自噬影响软骨细胞功能的分子机制 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况、参与课题与获奖情况 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
（3）重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ的毒性评价及重楼皂苷Ⅰ的肝毒性机制探究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 重楼的药效成分、药理作用和不良反应研究现状 |
| 1 药效成分 |
| 2 药理作用 |
| 3 不良反应研究现状 |
| 4 总结与讨论 |
| 参考文献 |
| 综述二 中药药源性肝损伤机制研究进展 |
| 1 CYP代谢 |
| 2 线粒体稳态 |
| 3 氧化损伤 |
| 4 细胞凋亡 |
| 5 胆汁淤积 |
| 6 Ca~(2+)浓度平衡破坏 |
| 7 免疫激活介导的炎症因子释放 |
| 8 特异反应 |
| 9 总结与讨论 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 技术路线图 |
| 第一章 重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ的体内外毒性评价 |
| 第一节 重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ的细胞毒性实验 |
| 1 概述 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 实验结果 |
| 第二节 模式生物-斑马鱼评价重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ的毒性 |
| 1 概述 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 实验结果 |
| 第三节 重楼皂苷Ⅰ的小鼠毒性实验研究 |
| 1 概述 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 实验结果 |
| 第四节 小结与讨论 |
| 1 重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ的细胞毒性实验 |
| 2 模式生物-斑马鱼评价重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ的毒性 |
| 3 重楼皂苷Ⅰ的小鼠毒性实验研究 |
| 本章总结与讨论 |
| 第二章 重楼皂苷Ⅰ的细胞毒性机制研究 |
| 第一节 肝细胞毒性机制研究 |
| 1 概述 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 实验结果 |
| 第二节 心血管细胞毒性机制研究 |
| 1 概述 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 实验结果 |
| 第三节 小结与讨论 |
| 1 肝细胞毒性机制研究 |
| 2 心血管毒性机制研究 |
| 本章总结 |
| 第三章 基于蛋白组学和代谢组学探索重楼皂苷Ⅰ的体内肝毒性机制 |
| 第一节 TMT标记定量蛋白质组学 |
| 1 概述 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 实验结果 |
| 5 生物信息分析 |
| 6 机制分析 |
| 7 PPI网络 |
| 8 潜在生物标志物 |
| 第二节 Q300靶向代谢组学 |
| 1 概述 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 实验结果 |
| 5 通路富集 |
| 6 通路分析 |
| 7 潜在生物标志物 |
| 第三节 小结与讨论 |
| 1 TMT标记定量蛋白质组学 |
| 2 Q300靶向代谢组学 |
| 3 蛋白组学-代谢组学关联分析 |
| 第四节 重楼皂苷Ⅰ肝毒性机制验证 |
| 1 动物组织Western blot验证 |
| 2 斑马鱼qPCR实验验证 |
| 3 小结与讨论 |
| 结语 |
| 1 重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ的体内外毒性评价 |
| 2 重楼皂苷Ⅰ的细胞毒性机制研究 |
| 3 重楼卓苷Ⅰ的蛋白组学和代谢组学研究 |
| 4 重楼皂苷Ⅰ肝毒性机制推测与分析 |
| 5 不足与展望 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）山核桃萜类醌的生物合成途径及其成分胡桃醌抑制Ishikawa癌细胞增殖的分子机理（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 引言 |
| 1.1 山核桃 |
| 1.1.1 山核桃概述 |
| 1.1.2 山核桃主要成分及功能 |
| 1.1.3 山核桃青皮中主要活性成分的抗癌机制 |
| 1.2 多组学探究植物生长机制 |
| 1.2.1 转录组学与植物生长 |
| 1.2.2 代谢组学与植物生长 |
| 1.3 子宫内膜癌 |
| 1.3.1 子宫内膜癌的现状 |
| 1.3.2 子宫内膜癌的发展机制 |
| 1.3.3 子宫内膜癌的治疗措施 |
| 1.3.4 子宫内膜癌细胞系研究的选择 |
| 1.4 多组学探究癌症机制 |
| 1.4.1 miRNA组学探究癌症机制 |
| 1.4.2 mRNA组学探究癌症机制 |
| 1.5 课题研究背景、意义及主要内容 |
| 1.5.1 课题研究背景、意义 |
| 1.5.2 课题研究主要内容 |
| 1.5.3 研究技术路线 |
| 第二章 不同发育期山核桃的转录组与代谢组分析 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 样本采集 |
| 2.1.2 实验试剂和仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 不同发育期山核桃仁总RNA的提取 |
| 2.2.2 RNA纯度及浓度检测 |
| 2.2.3 山核桃仁文库的制备和测序建立 |
| 2.2.4 生物信息学分析 |
| 2.2.5 基因功能注释和分类 |
| 2.2.6 基因总体表达水平分析 |
| 2.2.7 差异基因表达分析 |
| 2.2.8 代谢组学实验流程分析 |
| 2.2.9 代谢物提取 |
| 2.2.10 液相参数 |
| 2.2.11 质谱参数 |
| 2.2.12 代谢组学信息分析流程 |
| 2.2.13 代谢组学信息分析 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 山核桃仁转录组测序质控分析 |
| 2.3.2 不同发育期山核桃仁基因组装结果分析 |
| 2.3.3 基因功能注释和分类 |
| 2.3.4 基因总体表达水平分析 |
| 2.3.5 不同发育期差异基因表达分析 |
| 2.3.6 代谢物检测 |
| 2.3.7 代谢物检测质控 |
| 2.3.8 代谢物鉴定 |
| 2.3.9 不同发育期山核桃仁代谢物定量分析 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 基于转录组学与代谢组联合分析山核桃萜类化合物合成规律 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 实验试剂 |
| 3.1.3 实验仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 萜类化合物的提取 |
| 3.2.2 RNA提取和Illumine测序 |
| 3.2.3 山核桃基因组装,基因注释以及功能分析 |
| 3.2.4 脂质代谢差异表达基因的KEGG和GO分析 |
| 3.2.5 RNA提取 |
| 3.2.6 反转录 |
| 3.2.7 定量PCR实验 |
| 3.2.8 代谢物提取与分析 |
| 3.2.9 关键萜类代谢组学的靶向测定 |
| 3.2.10 代谢物和转录物的综合分析 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 萜类化合物含量的动态变化 |
| 3.3.2 萜类化合物代谢差异表达基因的KEGG和GO分析 |
| 3.3.3 萜类化合物生成 |
| 3.3.4 山核桃发育过程中的关键萜类代谢产物 |
| 3.3.5 代谢组与转录组共表达网络分析 |
| 3.4 本章小结 |
| 第四章 山核桃青皮胡桃醌的制备及其Ishikawa细胞增殖的抑制作用 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 细胞株 |
| 4.1.2 实验试剂 |
| 4.1.3 实验仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 山核桃青皮提取 |
| 4.2.2 纯化样品检测鉴定 |
| 4.2.3 细胞培养 |
| 4.2.4 MTT细胞实验 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 胡桃醌的提取 |
| 4.3.2 胡桃醌纯化及检测 |
| 4.3.3 胡桃醌对Ishikawa细胞增殖的抑制作用 |
| 4.3.4 胡桃醌对Ishikawa细胞形态的影响 |
| 4.4 本章小结 |
| 第五章 转录组学与miRNA联合分析胡桃醌对Ishikawa细胞抑制作用的机制 |
| 5.1 实验材料与方法 |
| 5.1.1 实验材料与试剂 |
| 5.1.2 细胞处理 |
| 5.1.3 制备文库和测序 |
| 5.1.4 测序信息分析 |
| 5.1.5 mRNA和 miRNA的提取 |
| 5.1.6 mRNA和 miRNA的反转录 |
| 5.1.7 mRNA和 miRNA的荧光定量PCR检测 |
| 5.1.8 功能和途径富集分析 |
| 5.1.9 PPI网络建立及模块分析 |
| 5.1.10 差异表达miRNA靶基因预测 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 总RNA质检分析 |
| 5.2.2 差异表达miRNA和mRNA分析 |
| 5.2.3 qRT-PCR检测差异表达miRNAs和差异表达基因的表达 |
| 5.2.4 差异表达基因的GO与 KEGG富集分析 |
| 5.2.5 PPI网络构建及模块分析 |
| 5.2.6 差异表达miRNA的靶基因预测 |
| 5.3 本章小结 |
| 第六章 胡桃醌诱导Ishikawa细胞凋亡及其机制 |
| 6.1 实验材料 |
| 6.1.1 实验试剂 |
| 6.1.2 实验仪器 |
| 6.2 实验方法 |
| 6.2.1 细胞培养 |
| 6.2.2 胡桃醌处理Ishikawa细胞 |
| 6.2.3 细胞周期检测 |
| 6.2.4 细胞凋亡荧光 Hoechst 33342/PI 双染 |
| 6.2.5 Annexin V-Alexa Fluor 488/PI 凋亡检测 |
| 6.2.6 活性氧检测 |
| 6.2.7 mRNA提取和定量PCR |
| 6.2.8 蛋白提取和 Western blot |
| 6.3 结果与分析 |
| 6.3.1 胡桃醌对Ishikawa细胞周期的影响 |
| 6.3.2 胡桃醌对细胞凋亡形态学的影响 |
| 6.3.3 胡桃醌对Ishikawa细胞凋亡的影响 |
| 6.3.4 胡桃醌对线粒体途径影响 |
| 6.3.5 胡桃醌对死亡受体通路相关基因表达的影响 |
| 6.3.6 胡桃醌对细胞凋亡相关基因表达的影响 |
| 6.3.7 胡桃醌诱导ROS介导的Ishikawa细胞凋亡 |
| 6.4 本章小结 |
| 第七章 胡桃醌作为诱导剂诱导Ishikawa细胞铁自噬 |
| 7.1 实验材料 |
| 7.1.1 实验试剂 |
| 7.1.2 实验仪器 |
| 7.2 实验方法 |
| 7.2.1 细胞培养 |
| 7.2.2 细胞死亡检测 |
| 7.2.3 铁含量测定 |
| 7.2.4 丙二醛(MDA)测定 |
| 7.2.5 谷胱甘肽的测定 |
| 7.2.6 透射电镜观察 |
| 7.2.7 免疫荧光检测 |
| 7.2.8 细胞集落形成实验 |
| 7.2.9 细胞迁袭 |
| 7.2.10 转录组学分析 |
| 7.2.11 RNA提取和定量PCR实验 |
| 7.2.12 Western Blot实验 |
| 7.3 结果与分析 |
| 7.3.1 胡桃醌诱导Ishikawa细胞死亡 |
| 7.3.2 胡桃醌诱导Ishikawa细胞铁死亡 |
| 7.3.3 透射电镜显示胡桃醌诱导的铁自噬 |
| 7.3.4 胡桃醌诱导Ishikawa细胞铁自噬机制 |
| 7.3.5 胡桃醌抑制Ishikawa细胞的迁移和侵袭 |
| 7.3.6 胡桃醌诱导Ishikawa细胞内质网应激 |
| 7.4 本章小结 |
| 第八章 结论与展望 |
| 8.1 结论 |
| 8.2 创新点 |
| 8.3 展望 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间的学术活动及成果情况 |
（5）Circ-9110吸附miR-100-5p调控奶山羊子宫内膜基质细胞增殖的分子机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 主要符号对照表 |
| 文献综述 |
| 第一章 子宫内膜容受性的研究进展 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 子宫内膜研究 |
| 1.3 胚胎植入研究 |
| 1.4 子宫内膜蜕膜化研究 |
| 1.5 子宫内膜基质细胞研究 |
| 1.5.1 子宫内膜基质细胞的功能 |
| 1.5.2 ESCs干细胞研究 |
| 1.6 ESCs的增殖和分化研究 |
| 1.6.1 ESCs周期的激素调节 |
| 1.6.2 ESC增殖和分化的重要控制因素 |
| 1.6.3 参与ESC增殖和分化的转录因子 |
| 1.7 miRNAs调控子宫内膜的研究进展 |
| 1.7.1 成熟miRNAs的起源 |
| 1.7.2 miRNAs的作用机制 |
| 1.7.4 miRNAs在奶山羊子宫内膜中的研究进展 |
| 1.7.5 miR-100的研究进展 |
| 1.8 circ RNAs调控子宫内膜的研究进展 |
| 1.8.1 真核生物中circ RNA的起源 |
| 1.8.2 真核生物中circ RNAs的数量 |
| 1.8.3 真核生物中circ RNAs的功能 |
| 1.8.4 circ RNAs在动物生产中的研究进展 |
| 1.8.5 circ RNAs在胚胎植入中的研究进展 |
| 1.9 研究目的与意义 |
| 1.10 试验思路与方法 |
| 试验研究 |
| 第二章 miR-100-5p调控奶山羊ESCs增殖作用的研究 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 试验仪器 |
| 2.2.2 材料试剂 |
| 2.2.3 试验动物 |
| 2.2.4 培养及鉴定奶山羊子宫内膜基质细胞(ESCs) |
| 2.2.5 qPCR过程 |
| 2.2.6 细胞增殖分析 |
| 2.2.7 细胞周期和细胞凋亡检测 |
| 2.2.8 蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB) |
| 2.2.9 统计学分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 奶山羊子宫内膜基质细胞(ESCs)的鉴定 |
| 2.3.2 miR-100-5p在奶山羊子宫内膜容受期(RE)和容受前期(PE)中的表达 |
| 2.3.3 miR-100-5p在 ESCs中的表达效率 |
| 2.3.4 miR-100-5p对 ESCs活力的影响 |
| 2.3.5 miR-100-5p对 ESCs增殖的影响 |
| 2.3.6 miR-100-5p对 ESCs周期的影响 |
| 2.3.7 miR-100-5p对 ESCs凋亡的影响 |
| 2.3.8 miR-100-5p对 ESCs凋亡相关蛋白表达的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 miR-100-5p通过靶基因HOXA1 调控ESCs增殖的作用研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 试验仪器 |
| 3.2.2 材料试剂 |
| 3.2.3 试验动物 |
| 3.2.4 细胞培养 |
| 3.2.5 RT-q PCR |
| 3.2.6 构建双荧光素酶报告载体 |
| 3.2.7 HOXA1过表达载体构建 |
| 3.2.8 细胞增殖检测 |
| 3.2.9 细胞周期和细胞凋亡检测 |
| 3.2.10 蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB) |
| 3.2.11 统计学分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 miR-100-5p靶基因的鉴定 |
| 3.3.2 奶山羊HOXA1基因的鉴定 |
| 3.3.3 HOXA1在奶山羊容受期和容受前期子宫内膜中的差异表达 |
| 3.3.4 HOXA1过表达和干扰效率检测 |
| 3.3.5 HOXA1对ESCs活力的影响 |
| 3.3.6 HOXA1对ESCs增殖的影响 |
| 3.3.7 HOXA1对ESCs周期的影响 |
| 3.3.8 HOXA1对ESCs凋亡的影响 |
| 3.3.9 HOXA1对ESCs凋亡相关蛋白表达的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 circ-9110 在奶山羊子宫内膜中的筛选及其对ESCs增殖的调控作用 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 试验仪器 |
| 4.2.2 材料试剂 |
| 4.2.3 试验动物 |
| 4.2.4 细胞培养 |
| 4.2.5 RT-q PCR |
| 4.2.6 双荧光素酶报告载体构建 |
| 4.2.7 circ-9110过表达载体构建 |
| 4.2.8 细胞增殖检测 |
| 4.2.9 细胞周期和细胞凋亡检测 |
| 4.2.10 蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB) |
| 4.2.11 统计学分析 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 circ-9110的筛选 |
| 4.3.2 circ-9110 作为竞争性内源RNA(ce RNA)结合miR-100-5p |
| 4.3.3 circ-9110 在奶山羊子宫内膜容受期(RE)和容受前期(PE)中的表达水平 |
| 4.3.4 circ-9110过表达和干扰效率检测 |
| 4.3.5 circ-9110对ESCs活力的影响 |
| 4.3.6 circ-9110对ESCs增殖的影响 |
| 4.3.7 circ-9110对ESCs周期的影响 |
| 4.3.8 circ-9110对ESCs凋亡的影响 |
| 4.3.9 circ-9110对ESCs凋亡相关蛋白表达的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 circ-9110/miR-100-5p/HOXA1 调控奶山羊子宫内膜基质细胞增殖的分子机理研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 试验仪器 |
| 5.2.2 材料试剂 |
| 5.2.3 试验动物 |
| 5.2.4 细胞培养 |
| 5.2.5 蛋白提取和Western blot分析 |
| 5.2.6 统计学分析 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 miR-100-5p对 PI3K/AKT/m TOR和 ERK1/2 信号通路的影响 |
| 5.3.2 HOXA1对PI3K/AKT/m TOR和 ERK1/2 信号通路的影响 |
| 5.3.3 circ-9110对PI3K/AKT/m TOR和 ERK1/2 信号通路的影响 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 进一步研究的问题 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）补阳还五汤含药血清对神经元OGD损伤后凋亡和凋亡相关蛋白的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 氯化钴浓度筛选及OGD模型的建立 |
| 1 实验材料与仪器 |
| 2 实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 小结 |
| 第二章 补阳还五汤含药血清对细胞活力和细胞凋亡的影响 |
| 1.实验材料、器材同上 |
| 2.实验方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.小结 |
| 第三章 补阳还五汤含药血清对细胞凋亡相关蛋白caspase-3、bax、bcl-2 表达量的影响 |
| 1.实验材料 |
| 2、抗体 |
| 3、实验仪器 |
| 4、WestonBlot检测各组凋亡相关蛋白BCL-2、Bax、Casepase的表达 |
| 5.统计分析 |
| 6.实验结果 |
| 7.小结 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 四、本研究创新性的自我评价 |
| 五、参考文献 |
| 六、附录 |
| 1.综述 细胞凋亡在缺血性脑卒中发病中的作用 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在校期间公开发表学术论文\专着及科研成果 |
（7）抑制Rac1减轻小鼠放射性肺损伤并增敏肺癌放疗的作用与机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 一、放射性肺损伤的发病率不容忽视,目前仍缺乏有效治疗手段 |
| 二、Rac1可能参与放射性损伤的主要发病机制 |
| (一)Rac1参与调控氧化应激过程 |
| (二)Rac1与TGF-β关系密切 |
| (三)Rac1与DNA损伤修复有关 |
| 三、Rac1参与肿瘤形成与进展的多个方面,参与肿瘤治疗抗性 |
| 材料与方法 |
| 一、材料 |
| (一)实验动物 |
| (二)实验细胞系 |
| (三)放射源 |
| (四)试剂 |
| (五)仪器 |
| 二、方法 |
| (一)动物实验 |
| 1、动物基本处理 |
| 2、放射性肺损伤小鼠模型 |
| 3、苏木精——伊红染色法(H&E染色) |
| 4、Masson染色 |
| 5、TUNEL染色 |
| 6、裸鼠皮下荷瘤 |
| 7、小鼠肺部原位荷瘤 |
| (二)细胞实验 |
| 1、细胞常规处理 |
| 2、CCK-8细胞增殖活力检测 |
| 3、流式细胞仪细胞凋亡检测 |
| 4、流式细胞仪细胞周期检测 |
| 5、流式细胞仪EDU法细胞增殖检测 |
| 6、蛋白质印迹法(Western Blot,WB) |
| 7、Rac1敲除细胞系构建 |
| 8、Trp53inp1 过表达细胞系构建 |
| 9、转录组测序 |
| 实验结果 |
| 一、抑制Rac1减轻小鼠放射性肺损伤 |
| 二、抑制/敲除Rac1可保护正常肺上皮细胞的放射性损伤 |
| (一)抑制Rac1减轻正常肺上皮细胞放射性损伤 |
| 1、抑制Rac1 对小鼠肺上皮细胞系MLE-12 的细胞活力无明显影响 |
| 2、抑制Rac1 减少MLE-12 细胞放射后凋亡 |
| (二)敲除Rac1 与药物抑制相似,可减轻MLE-12 细胞照射后损伤 |
| 1、Rac1 慢病毒干扰sh RNA载体构建与干扰效率筛选 |
| 2、敲除Rac1 可减少MLE-12 照射后细胞凋亡 |
| 3、敲除Rac1 可逆转照射引起的MLE-12 细胞周期阻滞 |
| 4、敲除Rac1 减轻MLE-12 细胞照射后DNA损伤 |
| (三)敲除Rac1相关差异基因筛选 |
| 1、敲除Rac1 与阴性对照组的有参转录组测序(RNA-seq) |
| 2、Rac1相关差异基因的筛选与验证 |
| (四)过表达Trp53inp1 可部分逆转敲除Rac1对MLE-12 的辐射保护作用 |
| 1、过表达Trp53inp1 可部分逆转敲除Rac1对MLE-12 照射后细胞凋亡的减少 |
| 2、Trp53inp1 过表达对MLE-12 细胞周期的影响 |
| 3、Trp53inp1 过表达对MLE-12 照射后DNA损伤的影响 |
| 三、抑制/敲除Rac1可增敏放射对小鼠肺癌细胞的损伤 |
| (一)抑制Rac1可增敏放射引起的小鼠肺癌细胞损伤 |
| 1、抑制Rac1促进小鼠肺癌细胞照射后凋亡 |
| 2、敲除Rac1 与给药相似,可增敏放射对LLC细胞的损伤效应 |
| (二)过表达Trp53inp1 对小鼠肺癌细胞的影响 |
| 1、过表达Trp53inp1 可协同敲除Rac1 的促凋亡效应,对小鼠肺癌细胞周期及增殖活力无明显影响 |
| 2、过表达Trp53inp1对LLC凋亡及周期相关蛋白的影响 |
| 四、抑制/敲除Rac1对正常肺上皮细胞与肺癌细胞差异作用的机制探讨 |
| (一)小鼠肺癌细胞Rac1过表达 |
| (二)小鼠肺癌细胞Rac1突变 |
| (三)肿瘤细胞Trp53inp1 表达量显着低于正常肺上皮细胞 |
| 五、在体验证抑制/敲除Rac1对肿瘤及正常肺组织的影响 |
| (一)敲除Rac1显着抑制裸鼠皮下荷瘤的肿瘤生长 |
| (二)敲除Rac1显着抑制小鼠肺部原位荷瘤的肿瘤质量 |
| (三)抑制Rac1可减轻未荷瘤对侧肺的放射性损伤 |
| 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 放射性肺损伤研究进展及与Rac1的关系 |
| 一、放射性肺损伤研究进展 |
| (一)简介 |
| (二)RILI的病理生理过程 |
| (三)RILI的病理生理机制 |
| (四)RILI的危险因素 |
| (五)RILI的临床诊断 |
| (六)RILI的干预手段与防治措施 |
| 二、Rac1用于防治放射性损伤的前景 |
| (一)Rac1可能参与放射性损伤的主要发病机制 |
| (二)Rac1参与肿瘤形成、进展及治疗抗性 |
| 总结 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表论文和参加科研工作情况说明 |
| 致谢 |
（8）中药栀子不良反应与肝肾毒性机制研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 注释表 |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 1 中药毒性问题研究进展 |
| 1.1 中药肝毒性研究进展 |
| 1.2 中药肾毒性研究进展 |
| 2 栀子的研究进展 |
| 2.1 栀子的化学成分研究 |
| 2.2 栀子的药理作用 |
| 2.3 栀子的毒性研究进展 |
| 3 转录组学的研究与应用进展 |
| 3.1 转录组学研究进展 |
| 3.2 转录组学技术在中药毒性领域的研究 |
| 4 其他药物的毒性研究进展 |
| 5 结语 |
| 第二章 基于体外细胞筛选栀子肝毒性成分 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 栀子提取物的体外实验结果 |
| 3.2 LC-ESI-MS/MS分析栀子水提取物 |
| 3.3 方法学考察结果 |
| 3.4 栀子化学成分的细胞存活率检测 |
| 3.5 栀子苷和京尼平对细胞凋亡与周期的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 本章小结 |
| 第三章 栀子在大鼠体内的肝肾毒性作用研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 给药后大鼠的生活状态及肝肾指数 |
| 3.2 生化指标检测结果 |
| 3.3 炎性因子的检测结果 |
| 3.4 病理学检测结果 |
| 4 讨论 |
| 5 本章小结 |
| 第四章 栀子肝毒性的转录组影响研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 样本质量检测 |
| 3.2 测序数据统计 |
| 3.3 全基因All-Unigene注释情况比较 |
| 3.4 差异表达基因分析 |
| 3.5 实时荧光定量PCR验证分析 |
| 4 讨论 |
| 5 本章小结 |
| 第五章 栀子引起大鼠肝肾毒性分子机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果与分析 |
| 3.1 氧化应激的影响 |
| 3.2 细胞凋亡的影响 |
| 3.3 炎症的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 本章小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 个人简历 |
（9）养阴化瘀解毒方对常氧和低氧条件下结肠癌细胞增殖与凋亡的影响（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 结肠癌的中医病机分析及复方治疗探索 |
| 第一部分 养阴化瘀解毒方对人结肠癌细胞增殖与凋亡的影响 |
| 1 实验材料和仪器 |
| 1.1 细胞株 |
| 1.2 动物 |
| 1.3 伦理审查 |
| 1.4 实验试剂 |
| 1.5 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 培养基的配置 |
| 2.2 细胞培养 |
| 2.3 养阴化瘀解毒方含药血清制备 |
| 2.4 结肠癌细胞分组及给药 |
| 2.5 MTS法检测YYHYJDD含药血清对HCT116 细胞增殖的作用 |
| 2.6 AOEB染色观察YYHYJDD含药血清对HCT116 细胞凋亡形态的影响 |
| 2.7 流式凋亡检测YYHYJDD含药血清对HCT116 细胞凋亡的影响 |
| 2.8 Western Blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3 前体相关蛋白表达情况 |
| 2.9 统计学方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 YYHYJDD含药血清对HCT116 细胞增殖作用的影响 |
| 3.2 YYHYJDD含药血清干预结肠癌HCT116 细胞AOEB凋亡染色结果 |
| 3.3 YYHYJDD含药血清干预HCT116 细胞流式凋亡统计结果 |
| 3.4 YYHYJDD含药血清干预结肠癌HCT116 细胞Bax、Bcl-2和Caspase-3前体相蛋白的表达情况 |
| 4 分析与讨论 |
| 5 小结 |
| 第二部分 模拟肿瘤低氧微环境筛选结肠癌细胞增殖最快的氧浓度 |
| 1 实验材料和仪器 |
| 1.1 细胞株 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.2 不同的氧浓度对结肠癌HCT116细胞增殖的影响 |
| 2.3 PI染色法检测筛选的两种氧浓度对结肠癌HCT116细胞周期的影响 |
| 2.4 Annexin V-FITC/PI染色法检测两种氧浓度对HCT116 细胞凋亡的影响 |
| 2.5 q PCR检测两种氧浓度对结肠癌HCT116 细胞HIF-1αm RNA的表达情况 |
| 2.7 Western Blot检测两种氧浓度对结肠癌HCT116 细胞HIF-1α的表达情况 |
| 2.8 统计学方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 HCT116细胞增殖活性最强氧浓度的筛选结果 |
| 3.2 20%O_2和5%O_2氧浓度对结肠癌HCT116细胞周期的影响 |
| 3.3 5%O_2和20%O_2条件对结肠癌细胞凋亡的影响 |
| 3.4 5%O_2和20%O_2 条件对结肠癌HCT116 细胞HIF-1αm RNA表达的影响 |
| 3.5 5%O_2和20%O_2 条件对HCT116 细胞HIF-1α蛋白表达的影响. |
| 4 分析与讨论 |
| 5 小结 |
| 第三部分 养阴化瘀解毒方对低氧条件下结肠癌细胞增殖与凋亡的影响 |
| 1 实验材料和仪器 |
| 1.1 细胞株 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.2 实验分组 |
| 2.3 YYHYJDD含药血清对低氧条件下结肠癌HCT116 细胞MTS增殖检测 |
| 2.4 YYHYJDD含药血清对低氧条件下结肠癌HCT116 细胞AOEB凋亡形态学染色 |
| 2.5 YYHYJDD含药血清对低氧条件下结肠癌HCT116 细胞流式凋亡检测 |
| 2.6 Western blot检测YYHYJDD对结肠癌HCT116 细胞HIF-1 及下游Bcl-2、Bax、Caspase-3 前体相关靶蛋白的表达情况 |
| 2.7 统计学方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 YYHYJDD含药血清对低氧条件下结肠癌HCT116 细胞MTS增殖的影响 |
| 3.2 YYYYJDD含药血清干预结肠癌细胞后AOEB染色结果 |
| 3.3 YYHYJDD含药血清对HCT116 细胞流式凋亡检测结果 |
| 3.4 YYHYJDD含药血清对HCT116 细胞HIF-1α、Bcl-2、Bax、Caspase-3前体相关蛋白表达的影响 |
| 4 分析与讨论 |
| 5 小结 |
| 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述 HIF-1与细胞增殖及抗肿瘤药物的相关研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
（10）柑橘茶抑制肝癌细胞增殖与缓解非酒精性脂肪肝的作用及机制（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 1 绪论 |
| 1.1 肝病的背景 |
| 1.1.1 肝癌的背景 |
| 1.1.2 肝癌的研究进展 |
| 1.1.3 非酒精性脂肪肝病的背景 |
| 1.1.4 非酒精性脂肪肝病的研究进展 |
| 1.1.5 抗肝癌的研究进展 |
| 1.1.6 缓解非酒精性脂肪肝的研究进展 |
| 1.2 柑橘茶的背景及发展 |
| 1.2.1 柑皮及其功效研究进展 |
| 1.2.2 茶叶及其功效研究进展 |
| 1.3 柑橘茶对肝病作用的研究进展 |
| 1.3.1 柑橘茶抗肝癌的研究进展 |
| 1.3.2 柑橘茶缓解非酒精性脂肪肝的研究进展 |
| 1.4 研究目的及意义 |
| 1.5 研究内容及技术路线 |
| 1.5.1 研究内容 |
| 1.5.2 技术路线 |
| 2 柑橘茶的主要成分与体外抗氧化活性 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验原料 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.1.4 主要试剂制备 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 柑橘茶冻干粉的制备 |
| 2.2.2 柑橘茶生化成分的检测 |
| 2.2.3 柑橘茶儿茶素、没食子酸和咖啡碱单体成分的检测 |
| 2.2.4 柑橘茶橙皮苷类单体成分的检测 |
| 2.2.5 柑橘茶总抗氧化能力的检测 |
| 2.2.6 柑橘茶清除DPPH自由基能力的测定 |
| 2.2.7 柑橘茶清除ABTS自由基能力的测定 |
| 2.2.8 柑橘茶清除NADH/PMS/NBT超氧阴离子自由基的测定 |
| 2.2.9 数据分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 柑橘茶的生化成分含量 |
| 2.3.2 柑橘茶的儿茶素、橙皮苷、咖啡碱及没食子酸单体成分含量 |
| 2.3.3 柑橘茶的体外抗氧化能力 |
| 2.4 本章小结 |
| 3 小青柑红茶抑制肝癌细胞增殖与迁移侵袭的作用与分子机制 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 细胞株 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要仪器 |
| 3.1.4 主要试剂制备 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 细胞复苏 |
| 3.2.2 细胞传代 |
| 3.2.3 细胞冻存 |
| 3.2.4 MTT实验 |
| 3.2.5 加药细胞形态实验 |
| 3.2.6 Wound healing实验 |
| 3.2.7 Western blot免疫印迹实验 |
| 3.2.8 数据分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 CRPBT对肝癌细胞增殖的抑制作用 |
| 3.3.2 CRPBT对肝癌细胞迁移的抑制 |
| 3.3.3 CRPBT对凋亡相关蛋白表达水平的调控 |
| 3.3.4 CRPBT对 PI3K/AKT蛋白磷酸化水平的调控 |
| 3.3.5 CRPBT对迁移和侵袭相关蛋白表达水平的调控 |
| 3.4 本章小结 |
| 4 化州橘红茶诱导肝癌细胞凋亡的作用与机制 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验原料 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 主要仪器 |
| 4.1.4 主要试剂配制 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 细胞复苏 |
| 4.2.2 细胞传代 |
| 4.2.3 细胞冻存 |
| 4.2.4 MTT实验检测橘红茶体外抗肝癌的作用 |
| 4.2.5 细胞周期检测 |
| 4.2.6 细胞凋亡检测 |
| 4.2.7 Western blot免疫印迹实验 |
| 4.2.8 数据分析 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 橘红茶对肝癌细胞增殖的抑制作用 |
| 4.3.2 橘红茶对肝癌细胞周期的阻滞作用 |
| 4.3.3 橘红茶诱导肝癌细胞凋亡 |
| 4.3.4 橘红茶对肝癌细胞中PI3K/AKT/mTOR信号通路的调控 |
| 4.3.5 橘红茶对肝癌细胞凋亡相关蛋白的调控 |
| 4.4 本章小结 |
| 5 化州橘红茶缓解非酒精性脂肪肝的作用与机制 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.1.1 实验原料 |
| 5.1.2 主要试剂 |
| 5.1.3 主要仪器 |
| 5.1.4 主要试剂制备 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 动物编号分组 |
| 5.2.2 动物灌胃给药 |
| 5.2.3 数据记录 |
| 5.2.4 小鼠解剖前处理 |
| 5.2.5 小鼠解剖和收集组织 |
| 5.2.6 血清和肝脏血脂指标检测 |
| 5.2.7 组织包埋与切片 |
| 5.2.8 HE染色 |
| 5.2.9 IHC染色 |
| 5.2.10 Western blot免疫印迹法检测肝脏组织中相关蛋白的表达 |
| 5.2.11 数据分析 |
| 5.3 实验结果 |
| 5.3.1 橘红茶对ob/ob小鼠体重、饮食、饮水量及Lee’s指数的影响 |
| 5.3.2 橘红茶抑制ob/ob小鼠增肥的作用 |
| 5.3.3 橘红茶对ob/ob小鼠脂肪肝的缓解作用 |
| 5.3.4 橘红茶对ob/ob小鼠血清和肝脏指标的调节作用 |
| 5.3.5 橘红茶对ob/ob小鼠肝脏病理学特征的影响 |
| 5.3.6 橘红茶对APMK和 ACC蛋白磷酸化水平的调控 |
| 5.3.7 橘红茶对CPT-1和FAS蛋白表达水平的调控 |
| 5.3.8 橘红茶对炎症相关蛋白表达水平的调控 |
| 5.4 本章小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录A |
| 作者简历及攻读硕士学位期间取得的研究成果 |
四、细胞凋亡检测的研究进展（论文参考文献）
- [1]视黄醇结合蛋白4对猪卵泡颗粒细胞功能的影响及其机制研究[D]. 赵云. 吉林大学, 2021(01)
- [2]龙鳖胶囊通过miR-675靶向TBK1调控细胞自噬影响软骨细胞功能的机制研究[D]. 黄和涛. 广州中医药大学, 2021(02)
- [3]重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅶ的毒性评价及重楼皂苷Ⅰ的肝毒性机制探究[D]. 王文平. 北京中医药大学, 2021(02)
- [4]山核桃萜类醌的生物合成途径及其成分胡桃醌抑制Ishikawa癌细胞增殖的分子机理[D]. 张圆圆. 合肥工业大学, 2021(02)
- [5]Circ-9110吸附miR-100-5p调控奶山羊子宫内膜基质细胞增殖的分子机理研究[D]. 马丽. 西北农林科技大学, 2020(03)
- [6]补阳还五汤含药血清对神经元OGD损伤后凋亡和凋亡相关蛋白的影响[D]. 龚弟鸿. 成都中医药大学, 2020(02)
- [7]抑制Rac1减轻小鼠放射性肺损伤并增敏肺癌放疗的作用与机制[D]. 安妮. 中国人民解放军海军军医大学, 2020(02)
- [8]中药栀子不良反应与肝肾毒性机制研究[D]. 李春楠. 江西中医药大学, 2020(01)
- [9]养阴化瘀解毒方对常氧和低氧条件下结肠癌细胞增殖与凋亡的影响[D]. 朱静. 江西中医药大学, 2020(05)
- [10]柑橘茶抑制肝癌细胞增殖与缓解非酒精性脂肪肝的作用及机制[D]. 文帅. 五邑大学, 2020