一、实验性肝纤维化基质金属蛋白酶抑制剂-1的动态变化（论文文献综述）
周怡驰[1]（2021）在《柴芪益肝方治疗肝纤维化的临床和实验研究》文中研究说明中国是肝病大国,多种肝病高发,肝纤维化作为肝病研究和治疗的重要领域,越来越受到重视。肝纤维化是肝脏修复肝损伤引起的异常结缔组织增生和细胞外基质过度沉积的病理改变。肝纤维化存在于大多数慢性肝病中,是慢性肝病向肝硬化发展的必经阶段,甚至可持续进展为肝硬化、肝癌,给患者生命健康带来严重威胁。研究肝纤维化的病因及发病机制、寻找有效的治疗靶点,对于阻止肝病的发展、维护患者的生命健康有很大的意义。近年来,肝纤维化的病理分子生物学机制、临床诊疗技术等取得了长足发展。但目前西医对于抗纤维化疗效尚不确切,缺乏有效的治疗手段。中医药治疗肝纤维化具有确切的优势,已有多种注册适应证为肝纤维化的中成药上市。柴芪益肝方由导师胡世平教授所创,是治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的经验方,前期临床和实验研究发现对肝纤维化有较好疗效,但其作用机制尚不清楚。胡教授现任北京中医药大学深圳医院党委书记,广东省名中医,全国基层名老中医师承项目指导老师,深圳市地方级领军人才,获评“南粤最美中医”,从事中医药防治慢性肝病的临床与科研工作30多年,擅长中医、中西医结合治疗肝脏疾病,形成了独特的学术思想体系。目的结合临床回顾性研究、网络药理学预测和动物实验探讨柴芪益肝方治疗肝纤维化的疗效与作用机制,为该方的进一步开发应用提供依据,并分析总结导师胡世平教授“推陈致新”的学术思想及其在柴芪益肝方组方思路中的应用。方法1、临床研究:通过回顾性研究方法,收集2018年1月1日至2021年2月3日期间在北京中医药大学深圳医院肝病科门诊及住院部诊断为慢性乙型肝炎患者的病例资料,并筛选出符合本研究标准的慢性乙型肝炎肝纤维化肝郁脾虚型患者。根据患者所服药物分为常规治疗组和CQYG组,收集所有患者治疗12个月前后的指标,包括主要指标:肝脏硬度值（LSM）、纤维化-4指数（FIB-4）、天门冬氨酸氨基转移酶和血小板比率指数（APRI）、乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒（HBV-DNA）定量;次要指标:谷丙转氨酶（ALT）,谷草转氨酶（AST）,总胆红素（TBiL）,谷氨酰转酞酶（GGT）,白蛋白（ALB）,将所有检测指标进行治疗前后的组内与组间比较。2、网络药理学:检索 TCMSP、TCMID、Swiss Target Prediction、OMIM、Gene Cards等数据库,筛选CQYG治疗肝纤维化的活性成分和潜在作用靶点。借助Cytoscape软件和String数据库,分别构建“药物-成分-靶点-疾病”网络和蛋白互作PPI网络,并进行拓扑学分析,筛选关键药效分子和核心靶点。运用Autodock vina软件进行分子对接,并基于R语言对作用靶点进行GO和KEGG富集分析。3、动物实验:选取50只6周龄SPF级C57BL/6雄性小鼠,随机抽取10只分别纳入空白对照组（CTL）、肝纤维化模型组（Model）、柴芪益肝方低剂量组（CQYG-L）、柴芪益肝方高剂量组（CQYG-H）和水飞蓟素治疗组（Silymarin）,共5组。四氯化碳（carbontetrachloride,CCl4）腹腔注射建立小鼠肝纤维化模型:除空白对照组外,其余各组小鼠腹腔注射含15%CCl4的橄榄油5ml·kg-1,每周2次,连续注射8周。从造模第1天起,柴芪益肝方低、高剂量组小鼠分别灌胃给予0.37 g·kg-1·d-1、0.74 g·kg-1·d-1的柴芪益肝方,水飞蓟素组给予100 mg·kg-1·d-1灌胃。实验结束,摘取所有小鼠肝脏、收集血清,对各组小鼠肝组织进行HE、天狼星红、Masson染色;用自动生化分析仪检测血清AST和ALT的含量;ELISA法检测肝组织中MDA、SOD、GSH-Px和Hyp水平;免疫组化法检测肝组织中α-SMA、Collagen I、Vimentin的表达;免疫荧光法检测肝组织中Ki67+和Lgr5+细胞;提取各组肝组织RNA和蛋白,Real-time PCR和Western blot分别检测肝纤维化小鼠肝组织中NF-κB、TGF-β/Smad、Wnt/β-Catenin信号通路相关靶标mRNA和蛋白表达。结果1、临床研究:共纳入符合标准的患者203人,其中,常规治疗组纳入101人,年龄最大者76岁,最小22岁,平均年龄（41.34±0.90）岁;CQYG组纳入102人,年龄最大者67岁,最小27岁,平均年龄（43.13±0.78）岁,两组年龄无统计学差异（P>0.05）,具有可比性。（1）无创肝纤维化指标（LSM、FIB-4、APRI）在两组患者自身治疗前后比较,以及治疗后的组间比较,均无显着性差异（P>0.05）,但两组治疗后LSM均较治疗前有降低趋势。（2）两组患者自身前后比较,乙型肝炎病毒（HBV-DNA）定量和乙肝病毒表面抗原（HBsAg）治疗前和后均无显着性差异（P>0.05）;CQYG组较常规治疗组治疗后HBsAg显着性降低（P<0.05）,CQYG组治疗后HBV-DNA定量和HBsAg较治疗前均有下降趋势。（3）两组患者自身治疗前后血清肝功能指标（ALT、AST、GGT、TBiL、ALB）均在正常范围内,治疗后组间比较肝功能均无显着性差异（P>0.05）。2、网络药理学预测:共获得121种CQYG治疗肝纤维化的潜在活性成分和257个对应的作用靶点,并筛选出14种关键药效分子及28个核心靶点。点度中心性值前10的核心靶点和关键药效分子具有较好的结合活性。GO和KEGG结果主要涉及炎症反应、氧化应激、成纤维细胞增殖、内皮细胞增殖、调节脂质代谢活动、血管生成、肝再生等生物学过程及TNF信号通路、Th17细胞分化信号通路、IL-17信号通路、PI3K/Akt信号通路、Wnt信号通路、NF-κB信号通路等。3、动物实验研究:与模型组相比,CQYG各组和水飞蓟素组小鼠肝组织形态和胶原沉积较模型组改善,水飞蓟素组和CQYG-H小鼠血清ALT、AST水平均显着降低（P<0.01）;CQYG高剂量组肝组织MDA和Hyp的含量显着低于模型组（P<0.05）,SOD和GSH-Px含量显着高于模型组（P<0.05）;免疫组化结果显示,CQYG组和水飞蓟素组α-SMA、CollagenI、Vimentin阳性表达区域较模型组少;免疫荧光结果显示,柴芪益肝方组Ki67阳性细胞和Lgr5阳性细胞数量均较模型组有增多趋势;CQYG组肝组织中p-NF-κBp65、TNF-α、IL-6、IL-1β蛋白表达水平较模型组显着降低（P<0.05）;与模型组相比,CQYG-H 肝组织 CollagenI、TGF-β、TNF-α、IL-1βmRNA 的表达水平以及 Collagen I、α-SMA、TIMP-1、TGF-β、磷酸化 Smad2/3、Smad2/3、Smad4、Wnt3a、β-Catenin 蛋白表达均较模型组有不同程度降低,而MMP-9、Smad7蛋白表达水平显着升高（P<0.05）。结论1、临床研究:柴芪益肝方加减联合常规治疗有降低慢乙肝肝纤维化患者肝脏硬度值、HBV-DNA和HBsAg含量的趋势,且在降低HBsAg定量上优于单纯常规治疗。2、网络药理学:柴芪益肝方可能通过槲皮素、白藜芦醇、山奈酚等活性成分作用于丝裂原激活蛋白激酶MAPK1/3/8、原癌基因酪氨酸激酶Src、激活子蛋白Jun等靶点,以及TNF信号通路、Th17细胞分化信号通路、IL-17信号通路、PI3K/Akt信号通路、HIF-1信号通路、Rap1信号通路、Wnt信号通路、NF-κB信号通路等,调节肝脏炎症反应、氧化应激、细胞增殖、肝再生等生物学过程发挥治疗肝纤维化的作用。3、动物实验研究:柴芪益肝方能显着减轻四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化,其作用机制可能减轻氧化应激反应、抑制NF-κB介导的炎症信号通路,下调炎症细胞因子IL-6、TNF-α、IL-1β的释放,减轻肝脏炎症,并通过调节TGF-β/Smad、Wnt3a/β-catenin信号通路,抑制肝星状细胞的活化,调节MMP-9和TIMP-1活性平衡,减少细胞外基质α-SMA、Collagen I、Hyp的合成,促进ECM降解相关。4、“推陈致新”学术思想:导师胡世平教授“推陈致新”的学术思想核心在于顺应人体本身的正气祛邪之势和气血津液各自的新陈代谢过程,协助人体自然排邪,促进疾病向愈。在肝纤维化治疗上,通过“推陈致新”,加强气化动力、调节气机升降,使病理产物消除的同时,人体气血津液正常化生。
宋玉杰,单铁英,马景红,栗志英,张文博,张巍,李玲,任海霞[2]（2020）在《双氢青蒿素抑制TGF-β1诱导的子宫内膜间质细胞的分泌活性》文中研究表明目的观察双氢青蒿素（DHA）对经转化生长因子-β1（TGF-β1）孵育的来源于人子宫壁的内膜组织中的间质细胞（ESCs）数目和活力的变化。方法 2018年1月1日—6月1日,收集人正常的子宫内膜组织并分离出ESCs。实验设计分为4组。正常组:加入不含血清的培养液;TGF-β1组:在正常组的基础上加10 ng/mLTGF-β1;DHA组:在正常组的基础上加100 ng/mLDHA;TGF-β1+DHA组:在TGF-β1组的基础上加100 ng/mLDHA。通过噻唑蓝法检测每组细胞的增殖变化;用酶联免疫吸附（ELISA）法判定每组细胞孵育液中Ⅰ型胶原和纤黏连蛋白的水平。免疫印迹（Western blot）评估胞质内的基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）的含量。结果正常组和DHA组之间比较,差异无统计学意义（P>0.05）;与正常组相比,TGF-β1组的ESCs数目增加,细胞分泌Ⅰ型胶原[（0.733 4±0.007 3）ng/L]与纤黏连蛋白[（0.6834±0.0081）ng/L]的量增多,细胞内MMP-9含量（0.471±0.030）降低,然而TIMP-1的含量（0.692±0.010）升高,差异均有统计学意义（均P<0.05）;与TGF-β1组相比,TGF-β1+DHA组的ESCs数目减少,细胞分泌Ⅰ型胶原[（0.6543±0.0101）ng/L]和纤黏连蛋白[（0.554 9±0.009 2）ng/L]的量降低,细胞内MMP-9含量（0.593±0.026）升高,而TIMP-1含量（0.543±0.013）降低,差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论 ESCs在TGF-β1的作用下数目增多且分泌功能活跃,而DHA能抑制TGF-β1对子宫内膜间质细胞的这种作用。
李扬[3]（2020）在《七叶皂苷钠通过抑制4EBP1的磷酸化减缓肝纤维化进程的研究》文中提出目的肝纤维化是一种由急性或慢性肝脏损伤引起的病理过程,可以进展为肝硬化,引起肝功能衰竭、肝细胞癌等严重并发症。每年因肝硬化和肝细胞癌死亡的人数众多,给许多国家带来了沉重的经济负担。目前对于肝纤维化尚无良好的治疗手段,然而寻找潜在的肝纤维化治疗药物的脚步却从未停止。本课题主要研究七叶皂苷钠在实验性肝纤维化中的作用以及对于大鼠肝星状细胞的影响,并探讨其中可能的相关机制,为七叶皂苷钠在肝纤维化方面潜在的临床应用价值提供理论依据。方法（1）41只健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组（n=5）、模型组（n=18）以及七叶皂苷钠治疗组（n=18）。模型组和七叶皂苷钠治疗组腹腔注射体积分数为50%的CCl4橄榄油溶液,每周两次,共8周,正常对照组给予相同剂量的橄榄油。自第3周开始,七叶皂苷钠治疗组每天腹腔注射3.6 mg·kg-1七叶皂苷钠溶液一次,共6周,正常对照组和模型组同期给予相应量的生理盐水溶液。（2）HE染色观察大鼠肝脏组织的形态结构,Masson染色观察胶原纤维的增生情况。（3）免疫组织化学染色检测大鼠肝脏组织中p-4EBP1、α-SMA、COL-Ⅰ及COL-Ⅲ的表达。（4）大鼠HSC-T6细胞的培养。（5）MTT法检测七叶皂苷钠对HSC-T6增殖的影响。（6）PI染色法检测七叶皂苷钠对HSC-T6细胞周期的影响。（7）Annexin V-FITC/PI双染法检测七叶皂苷钠对HSC-T6细胞凋亡的影响。（8）Western blot法检测七叶皂苷钠对于HSC-T6细胞p-4EBP1、α-SMA、COL-Ⅰ及COL-Ⅲ蛋白表达的影响。结果（1）成功构建大鼠肝纤维化模型,且七叶皂苷钠可以改善CCl4诱导的大鼠肝纤维化程度。（2）HE及Masson染色均显示七叶皂苷钠可减少CCl4诱导的胶原纤维的产生。（3）免疫组织化学染色显示七叶皂苷钠可以减少p-4EBP1、COL-Ⅰ及COL-Ⅲ的表达,但对于α-SMA的表达无明显影响。（4）MTT结果显示,七叶皂苷钠处理48小时可以显着抑制HSC-T6细胞的增殖。（5）PI染色法检测表明30?mol·L-1的七叶皂苷钠处理48小时对于HSC-T6的细胞周期无明显影响。（6）Annexin V-FITC/PI双染法结果显示,同样的条件下,七叶皂苷钠能显着促进HSC-T6细胞的早期凋亡。（7）Western blot结果显示,30?mol·L-1的七叶皂苷钠处理48小时后,可以显着地减少HSC-T6细胞p-4EBP1、COL-Ⅰ及COL-Ⅲ蛋白的表达,而对α-SMA的表达无明显影响。结论七叶皂苷钠可以通过抑制肝星状细胞的增殖,促进其凋亡,减少胶原蛋白的产生,进而减缓肝纤维化进程,其相关机制可能与七叶皂苷钠抑制4EBP1的磷酸化有关。
贺文广[4]（2018）在《雄芍汤防治肝纤维化作用与TRAIL-FADD/caspase8细胞凋亡通路的实验研究》文中研究说明本实验由“确立CCL4综合因素诱导大鼠肝纤维化模型”“雄芍汤防治肝纤维化作用与TRAIL-FADD/caspase8凋亡通路”及“雄芍汤对大鼠肝细胞凋亡的影响”三部分组成。目的:本实验从温补脾肾的角度分析肝纤维化的防治,通过确立CCL4综合因素诱导大鼠肝纤维化模型进展期及恢复期,观察雄芍汤防治肝纤维化的作用,揭示雄芍汤、肝纤维化、肝细胞及TRAIL-FADD/caspase8细胞凋亡通路之间的内在联系,探讨雄芍汤防治肝纤维化的细胞凋亡通路,为中医药防治肝纤维化研究提供新的思路和方法。方法:实验一30只健康雄性SD大鼠,皮下注射CCl4与花生油的混合液（二者比例为4:6）,每周两次,分别于周二、周五注射,注射剂量为3ml/kg/次（注:第1次皮下注射的CCl4与花生油混合液比例为3:1,注射剂量为5ml/kg）,并给以玉米面+0.5%胆固醇+20%猪油的高脂低蛋白食物2周,玉米面+0.5%胆固醇的高脂低蛋白食物4周,饮料仅用30%酒精。分别于实验的0、4、6、8周末,随机选取6只收集血清及病理学标本,并通过检测肝组织病理学改变、羟脯氨酸（HyP）含量,血清天门冬氨酸转移酶（ALT）、丙胺酰氨基转移酶（AST）、透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、Ⅳ-C型胶原（CIV）和Ⅲ型前胶原（PCⅢ）等指标,确立CCl4综合因素诱导的大鼠肝纤维化模型进展期和恢复期（成模后4周为恢复期）。实验二64只雄性SD大鼠,随机分为六组。正常六:8只,皮下注射无菌花生油,注射时间同CCl4注射时间,自由食用标准饲料和水,与预防组雄芍汤对等灌喂纯净水;模型六:12只,按实验一CCl4综合因素6周造模,与预防组雄芍汤对等灌喂纯净水;预防六:12只,模型六基础上每日给予雄芍汤灌胃（给药剂量为成人临床日剂量7倍,雄芍汤药液8.050g/kg）;正常十:正常六基础上再正常喂养4周,与治疗组雄芍汤对等灌喂纯净水;恢复十:12只,模型六基础上,正常喂养自然恢复4周,与治疗组雄芍汤对等灌喂纯净水;治疗十:12只,模型六基础上,正常喂养同时灌胃雄芍汤4周（灌药同预防六）。6周末采集正常六、模型六、预防六各组大鼠血清及肝脏的标本;10周末采集正常十、恢复十、预防十各大鼠血清及肝脏的标本,采用紫外-乳酸脱氢酶法和紫外-苹果酸脱氢酶法分别检测各组大鼠血清ALT、AST变化;采用放免法检测各组大鼠血清HA、LN、CIV和PCⅢ含量;采用样本水解法检测各组大鼠肝组织HyP含量;采用HE和Masson染色观察各组大鼠肝组织病理形态学改变;采用免疫组化检测各组大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、5-脂氧合酶（5-LO）的表达;采用PCR和（或）Western blot检测各组大鼠肝组织5-LO、α-SMA、基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP1）、基质金属蛋白酶-13（MMP13）、肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）、Fas偶联死亡区域蛋白（FADD）、蛋白水解酶-8（Caspase-8）、B淋巴细胞瘤-2（BCL-2）、Cyt-c（细胞色素C）的mRNA和（或）蛋白表达。实验三大鼠肝细胞（BRL）培养传代,随机分为六组,分别与第二部分正常六、模型六、预防六、正常十、恢复十、治疗十各组血清共培养,采用流式细胞术检测各组大鼠肝细胞凋亡情况。结果:实验一大鼠0、4、6、8周血清ALT、AST、HA、LN、PCⅢ、CIV及肝组织Hyp指标变化:与0周比较,4、6、8周指标均明显增高,差异均有统计学意义（P<0.01）;随着造模时间延长,4、6、8周指标逐级升高,与6周比较,4周指标下降均有统计学差异（P<0.01）,8周指标上升亦均有统计学差异（P<0.05）。大鼠0、4、6、8周肝组织HE染色结果:4周出现广泛微泡性脂肪变性,汇管区纤维结缔组织增生,淋巴细胞浸润,肝组织出现纤维分割;6周出现较多成纤维细胞,纤维结缔组织增生,纤维间隔增多;8周出现典型的假小叶。大鼠0、4、6、8周肝组织Masson染色并Image Proplus肝纤维化分级结果:0周,6只均为0级;4周:1级4只,2级2只;6周:2级和3级各3只;8周,3级1只,4级5只。实验二各组大鼠血清ALT、AST、HA、LN、PCⅢ、CIV及肝组织Hyp指标变化。与正常六比较模型六指标均上升,差异均有统计学意义（P<0.01）;与模型六比较预防六指标均下降,差异均有统计学意义（P<0.01）;与正常十比较恢复十指标均上升,差异均有统计学意义（P<0.01）;与恢复十比较治疗十指标均下降,差异均有统计学意义（P<0.01）。各组大鼠肝组织HE及Masson染色结果。正常六:无肝纤维化表现;模型六:出现肝细胞坏死,肝组织脂肪变性,成纤维细胞、纤维结缔组织、胶原纤维增多,肝小叶破坏等肝纤维化表现;预防六:与模型六比较,肝纤维化表现明显减轻;恢复十:与恢复十比较无明显改善;治疗十:与恢复十比较,肝纤维化表现明显减轻。各组大鼠肝组织5-LO、α-SMA、TIMP-1、MMP13（单做Western Blot）、TRAIL、FADD、Caspase-8、BCL-2（单做PCR）、Cyt-c（单做Western Blot）的Western Blot与PCR检测结果:与正常组比较,模型六及恢复十指标表达均明显增强且差异有统计学意义（P<0.01）;与模型六比较,预防六指标的表达减弱且差异有统计学意义（P<0.01）;与恢复十比较,治疗十指标的表达减弱且差异亦有统计学意义（P<0.05）。实验三与正常六相比,模型六BRL凋亡增强差异有明显统计学意义（P<0.01）;与模型六相比,预防六BRL凋亡减弱差异有明显统计学意义（P<0.01）,恢复十BRL凋亡减弱差异有明显统计学意义（P<0.01）;与正常十比较,恢复十BRL凋亡增强差异有明显统计学意义（P<0.01）;与恢复十比较,治疗十BRL凋亡减弱差异有明显统计学意义（P<0.01）。结论:1雄芍汤具有促进CCL4综合因素诱导的大鼠肝纤维化恢复和减缓CCL4综合因素诱导的大鼠肝纤维化进展的作用。即:雄芍汤具有防治肝纤维化的作用。2雄芍汤防治肝纤维化的机制与以下途径有关:保护HC;抑制HSC活化;增强MMP-13活性;抑制TIMP-1活性;抑制5-LO活性;减少HC凋亡,抑制TRAIL-FADD/caspase8细胞凋亡通路。3雄芍汤含药血清对大鼠肝细胞的凋亡有抑制作用;雄芍汤可能通过抑制TRAIL-FADD/caspase8细胞凋亡通路减少HC的凋亡发挥防治肝纤维化的作用。
战跃福,梁贤文,韩向君,陈建强,张淑芳,谈顺,李群,王雄,刘凡[5]（2017）在《大鼠肝纤维化基质金属蛋白酶抑制剂-1 mRNA表达与弥散加权成像表观扩散系数的相关性》文中指出目的:探讨大鼠肝纤维化不同分期肝表观扩散系数（apparent diffusion coefficient,ADC）与基质金属蛋白酶抑制剂-1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1）mRNA表达的相关性。方法:采用猪血清腹腔注射联合高脂饮食建立肝纤维化大鼠模型。给药4周后开始,取实验组大鼠48只和对照组大鼠12只行磁共振弥散加权成像（diffusion weighted imaging,DWI）检查,计算b值=800 s/mm2时的ADC值。DWI检查后快速处死大鼠,行病理检查,采用RT-PCR检测TIMP-1 mRNA表达。成模大鼠按肝纤维化病理分期结果又分为S0期组（n=4）、S1期组（n=11）、S2期组（n=12）、S3期组（n=10）和S4期组（n=9）,比较肝纤维化各组ADC值及TIMP-1 mRNA的表达,并分析两者的相关性。结果:对照组、肝纤维化S14期组大鼠肝ADC值及TIMP-1 mRNA表达差异有统计学意义（分别F=46.54和53.87,均P<0.05）,ADC值除对照组与肝纤维化S1期组、S1期组与S2期组、S2期组与S3期组比较差异无统计学意义（均P>0.05）外,其余各组间比较均有统计学意义（均P<0.05）;各组TIMP-1 mRNA除肝纤维化S1期组与S2期组、S3期组与S4期组比较差异无统计学意义（均P>0.05）外,其余各组间差异均有统计学意义（均P<0.05）。秩相关分析显示肝ADC值与TIMP-1 mRNA表达的变化呈负相关（r=–0.76,P<0.01）。结论:随大鼠肝纤维化进程不断加深,ADC值逐渐减低,TIMP-1 mRNA表达逐渐升高,二者呈负相关。
高湲,陈桂敏,梁振钰,谢毅强[6]（2013）在《细胞因子对肝纤维化影响的中医药研究进展》文中研究说明肝纤维化（HF）是慢性肝病向肝硬化发展的必经病理过程。其关键病机是肝星状细胞（HSC）的活化,导致细胞外基质（ECM）的合成与降解失衡,ECM在肝内大量沉积。HSC的激活受多种细胞因子的调控,促进因子主要有:转化生长因子（TGF-β）、血小板衍生生长因子（PDGF）、肿瘤坏死因子（TNF）,基质金属蛋白酶抑制剂（TIMPs）、结缔组织生长因子（CTGF）;抑制因子主要有:基质金属蛋白酶家族（MMPS）、肝细胞生长因子（HGF）。两大类细胞因子的调控维持着ECM在肝内的合成与降解平衡。近年来,在中医药研究抗HF过程中发现,中药可通过下调促进因子或上调抑制因子达到减轻及逆转肝纤维化进程,并具有多成分、多环节的作用特点,在治疗上具有综合优势。
辛志强[7]（2012）在《DQ12对THP-1细胞基质金属蛋白酶-9的影响及松弛素干预作用》文中指出研究目的研究DQ12对佛波酯（PMA）诱导分化的THP-1细胞的基质金属蛋白酶-9mRNA表达、酶活性的影响以及松弛素（relaxin）的干预作用。研究方法RPMI-1640培养基培养THP-1细胞，于对数生长期接种于6孔板，调整细胞浓度8×105/ml。10ng/ml的PMA刺激THP-1细胞24h后无血清培养3h，然后分为对照组、DQ12组、DQ12+R组；对照组无血清培养基培养、DQ12组含100ug/mlDQ12的无血清培养基培养、DQ12+R组含100ug/ml DQ12和10ng/ml的Relaxin培养，于1h、3h、12h、24h吸取培养液、收获细胞。培养液分装、-80℃冻存，明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶-9活性；提取THP-1细胞RNA，qRT-PCR检测基质金属蛋白酶-9mRNA的表达。研究结果DQ12组THP-1细胞基质金属蛋白酶-9mRNA的表达于12h开始增加，24h维持在增高水平（P<0.01）；与对照组比较，DQ12组THP-1细胞基质金属蛋白酶-9活性于1、3、12、24h均增强（P<0.01）。DQ12+R组与DQ12组比较，降低3、12、24基质金属蛋白酶-9mRNA的表达（P<0.05）；基质金属蛋白酶-9活性差异没有统计学意义（p>0.05）。研究结论DQ12增加PMA诱导分化的THP-1细胞的基质金属蛋白酶-9mRNA表达和酶活性。Relaxin对DQ12诱导的基质金属蛋白酶-9mRNA表达增高有抑制作用，对基质金属蛋白酶-9活性的影响不明显。本研究结果提示relaxin可能通过影响肺泡巨噬细胞基质金属蛋白酶-9表达干预矽尘致肺纤维化作用。
焦黎[8]（2011）在《纤溶酶原激活物抑制因子-1对肝星状细胞活化及其细胞外基质的影响》文中认为研究目的肝纤维化已经成为严重危害人类健康的疾患,肝星状细胞活化是肝纤维化的中心环节,而肝纤维化形成关键是基质的产生。转化生长因子（transforming growth factor -β1,TGFβ1）已知是促进肝纤维化最强的细胞因子,它可促进肝星状细胞（hepatic stellate cell,HSC）活化和增殖,促进细胞外基质的产生。HSC通过产生细胞因子影响着肝纤维化的发生和发展。有研究表明HSC可表达纤溶酶原激活物抑制因子-1（plasminogen activator inhibitor type-1,PAI-1）,参与肝纤维化的发生发展,TGFβ1可促进HSC PAI-1的表达。外源性PAI-1能否影响肝星状细胞TGFβ1表达,以及细胞外基质的合成目前尚不清楚。本实验通过体外培养肝星状细胞,研究外源性PAI-1对肝星状细胞活化及细胞外基质的影响。研究方法人肝星状细胞LX-2贴壁细胞培养;MTT法测定PAI-1对LX-2细胞的最佳干预浓度;采用ELISA法测定细胞上清液中透明质酸（hyaluronic acid,HA）、TGFβ1、基质金属蛋白酶抑制抑制因子-1（tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP-1）;免疫细胞化学法检测ɑ-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,ɑ-SMA）、基质金属蛋白酶-2（matrixmetallo proteinase-2 ,MMP-2）、TIMP-1、PAI-1、尿激酶型纤溶酶原激活物（urokinase plasminogen activator, uPA）蛋白表达;逆转录聚合酶链反应（reverse transcription ploymerase chain reaction, RT-PCR）检测TGFβ1及PAI-1mRNA的表达,并分析两者相关关系。结果1、PAI-1对LX-2细胞增殖刺激作用明显,且PAI-1浓度为10ng/ml时刺激作用最为明显,A492为1.636±0.315（F=11.697, p<0.01）。2、ɑ-SMA在LX-2胞浆中表达,核内无明显表达。PAI-1干预12h组蛋白表达量为（0.408±0.031）较对照组（0.301±0.015）增加明显（t=5.438, p<0.01）。3、MMP-2、TIMP-1、PAI-1、uPA在LX-2胞浆中表达,核内无明显表达。PAI-1干预12h组MMP-2蛋白表达量为（0.245±0.028）较对照组（0.233±0.041）仅轻微增加（t=0.473, P>0.05）;uPA 12h组为（0.303±0.052）较对照组（0.288±0.036）增加不明显（t=0.581, P>0.05）;PAI-1 12h组为（0.331±0.045）较对照组（0.205±0.007）增加显着（t=4.857,P<0.01）;TIMP-112h组为（0.412±0.031）较对照组（0.235±0.011）增加显着（t=9.511,P<0.01）。4、PAI-1干预12h后TGFβ1 mRNA、PAI-1mRNA分别为（1.839±0.405）（,2.325±0.970）,对照组分别为（1.090±0.123）,（0.790±0.156）,两者相比差异显着。且TGFβ1 mRNA与PAI-1 mRNA呈正相关（r=0.827,P<0.05）。5、在细胞上清液中加入PAI-1 12h,24h,48h后（刺激组）TGFβ1蛋白表达量分别为（8.854±3.168）、（44.348±8.415）、（225.819±12.797）pg/ml ,对照组为（0.855±0.744）pg/ml ,干预组较阴性对照组增加显着（F=1566.752,P<0.01）;HA分别为（2.577±0.801）、（18.177±7.141）、（50.473±4.903）ng/ml ,对照组（0.450±0.154 ）ng/ml,干预组较阴性对照组增加显着（F=235.632,P<0.01）;TIMP-1分别为（2.872±1.396）,（20.409±11.821）,（96.548±27.154）ng/ml,对照组（0.573±0.179）ng/ml,干预组较阴性对照组有统计学意义（F=67.359,P<0.05）。结论PAI-1可刺激肝星状细胞活化,增加TGFβ1表达,增加细胞外基质合成,促进肝纤维化发生发展。
胡平方[9]（2010）在《纤溶酶原激活物抑制剂-1 siRNA治疗实验性肝纤维化》文中研究说明[研究背景及目的]肝纤维化（hepatic fibrosis）的特征性病理改变是肝内细胞外基质（extracellular matrix, ECM）的过多沉积。减少ECM沉积、促进ECM降解是治疗肝纤维化的关键环节。由尿激酶型纤溶酶原激活剂（urokinase-type plasminogen activator, uPA）、纤溶酶（plasmin）、纤溶酶原激活物抑制剂-1（plasminogen activator inhibitor-1, PAI-1）和基质金属蛋白酶（matrix metal loproteinases, MMPs）构成的反应体系是调节ECM降解的主要途径之一,在肝纤维化形成和发展中起重要作用。uPA位于纤维化调控的上游,可激活纤溶酶原形成纤溶酶,后者可进一步活化MMPs;纤溶酶和活化的MMPs均可降解胶原、蛋白多糖等ECM成分。PAI-1可与uPA结合,抑制uPA对纤溶酶原的激活作用,从而促进ECM沉积和肝纤维化发展。正常生理情况下,体内uPA和PAI-1表达处于平衡状态,而在肝纤维化发生过程中,uPA活性逐渐降低,PAI-1表达则不断增高,过多表达的PAI-1通过与uPA结合抑制其纤溶激活作用,进而导致uPA、纤溶酶和MMPs系统活性下调,ECM沉积明显增加,加重肝纤维化程度。本科室前期研究表明,在肝纤维化过程中上调uPA表达可以改善肝纤维化进程；此外,近期多项研究结果还显示,PAI-1基因敲除小鼠对纤维化形成具有保护作用,而PAI-1过表达小鼠可加重纤维化的发生发展。因此,我们设想通过下调肝纤维化过程中PAI-1的表达可能达到治疗肝纤维化的目的。小干扰RNA （small interfering RNA, siRNA）技术是以转录后调控为目的的新型基因调控与治疗技术。通过合成反义小分子RNA特异性抑制靶基因的转录后表达。RNA干扰（RNA interfering, RNAi）具有操作简单,可调控性和靶向性强、高效抑制靶基因表达等优点。本研究以肝纤维化过程中上调的PAI-1基因作为靶点,利用siRNA技术,通过体外、体内实验研究PAI-1 siRNA对实验性肝纤维化的治疗效果,为抗肝纤维化治疗提供新的靶点和途径。[实验方法]一、筛选PAI-1 siRNA应用RNAi设计软件,设计并合成针对PAI-1 mRNA 219、559、1061和2665位点的4对21核苷酸（nt） siRNA,分别转染大鼠肝星状细胞（hepatic stellate cell, HSC）株HSC-T6。以转染非特异siRNA （NC siRNA,与PAI-1 mRNA无同源性的21 ntsiRNA）作为阴性对照,应用实时定量RT-PCR （real-time reverse transcription polymerase chain reaction, real time RT-PCR）和Western blot方法检测四对siRNA分子对PAI-1基因及蛋白水平的阻抑效率,筛选出针对PAI-1 mRNA高效的siRNA片段。二、PAI-1 siRNA对HSC-T6生物学特性的影响通过细胞悬液转染以及构建稳定株两种方法将筛选出的PAI-1 siRNA转染至HSC-T6内,应用real time RT-PCR法检测肝纤维化基因mRNA表达；酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）测定HSC-T6上清Ⅰ、Ⅲ型胶原含量；四甲基偶氮唑盐（methyl thiazolyl tetrazolium, MTT）法测定细胞增殖变化；流式细胞术检测分析细胞周期等生物学特性的影响。三、针对PAI-1 siRNA的腺病毒载体——AdshPAI的构建以及鉴定合成针对219位点的PAI shRNA片段,利用pSuper载体的H1启动子,体外连接构建重组腺病毒质粒pAdshPAI,经293细胞包装后得到复制缺陷型重组腺病毒AdshPAI,同法构建对照病毒AdNC（与PAI-1 mRNA无同源性的NC shRNA）和表达绿色荧光蛋白（green fluorescent protein, GFP）病毒AdGFP。将AdshPAI和AdNC分别体外感染HSC-T6,以RT-PCR法检测AdshPAI对PAI-1的抑制效果。四、AdshPAI体内导入对实验性肝纤维化的治疗作用分别构建胆总管结扎（bile duct ligation, BDL）和二甲基亚硝胺（dimethylnitrosamine, DMN）两种大鼠肝纤维化模型。在BDL模型中,将雄性SD大鼠随机分为4组,每组10只。分设假手术组、模型对照组、病毒AdNC对照组和AdshPAI导入组。钝性分离并结扎胆总管,制备BDL肝纤维化模型。于术前48 h AdNC组和AdshPAI组分别经尾静脉导入4×109pfu／只AdNC或AdshPAI。于手术后第21 d处死大鼠。在DMN模型中,将雄性SD大鼠随机分为4组,每组8只。第1组为正常对照组；第2-4组为肝纤维化模型组,予1%DMN以10μg/kg腹腔注射,每周连续注射3次,共注射4 w。其中第2组设为模型对照组；第3组为对照病毒AdNC组,第4组为AdshPAI治疗组。于DMN注射后2 w末AdNC组和AdshPAI组分别经尾静脉导入4×109pfu／只AdNC或AdshPAI至大鼠体内。于DMN注射后第4 w末处死大鼠。分别采用组织病理方法观察各组大鼠肝纤维化程度分级改变；肝组织切片采用Masson染色和天狼猩红（sirius red）染色分析胶原沉积变化；免疫组织化学法测定PAI-1、平滑肌肌动蛋白-α（a-smooth muscle actin,α-SMA）、转化生长因子-β1 （transforming growth factor-β1, TGF-β1）、MMP-9、TIMP-1、Brdu和PCNA表达,图象分析仪半定量分析；real-time RT-PCR方法检测肝组织中PAI-1、α-SMA、TGF-β1、Ⅰ型胶原、smad3、smad7、uPA、uPAR、tPA、MMP-2、MMP-9、MMP-13和TIMP-1 mRNA水平；组织匀浆酸水解方法测定肝组织中羟脯氨酸水平；末端转移酶标记技术（TUNEL法）检测肝组织中细胞凋亡情况。五、统计学处理数据采用SPSS 11.0统计软件包进行分析,结果以X+S表示。多组间采用One-Way ANOVA分析,方差非齐性则采用非参数检验；细胞周期分析采用χ2检验。P<0.05为差异有显着性,P<0.01为差异有非常显着性。[实验结果]一、筛选PAI-1 siRNART-PCR和Western blot结果表明,219siRNA对PAI-1表达有较好的抑制效果,利用细胞悬液瞬时转染方法转染24 h和48 h后HSC PAI-1 mRNA表达较对照组明显下调（P<0.05）; Western blot结果提示,转染48 h后对蛋白的抑制效率可达到85%以上（P<0.05）。559和2665位点siRNA对PAI-1 mRNA表达抑制效率分别为72%和66%,蛋白水平抑制效率分别为57%和63%（P<0.05）,而1061位点则无明显基因沉默效果。二、PAI-1 siRNA对HSC-T6生物学特性的影响Real time RT-PCR法检测转染219 siRNA和559 siRNA组Ⅰ、Ⅲ型胶原、α-SMA、TGF-β1和TIMP-1 mRNA表达明显低于对照组（P<0.05）,培养上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量较对照组显着减少（P<0.05）。MTT法动态观察HSC-T6转染219 siRNA的细胞增殖明显慢于对照组（P<0.05）。流式细胞术检测结果显示,转染219 siRNA的HSC-T6 G0/G1期时相细胞数较对照组明显增高（57.61±0.19% vs.45.49±0.93%,P<0.05）,S期细胞数百分比明显低于对照组（30.29±2.17% vs.40.68±1.65%,P<0.05）,表明沉默PAI-1可诱导HSC-T6周期静止,抑制其增殖。三、AdshPAI的构建和鉴定利用NotⅠ/SalⅠ酶切质粒pSuper-shPAI得到Hl+shPAI片段,与质粒pShuttle体外连接获得穿梭质粒pShuttle-shPAI,同源重组后筛选获得pAdshPAI;经293细胞包装并反复感染、冻融,获得1×1010pfu/ml滴度的AdshPAI; AdshPAI体外感染HSC-T62d后,RT-PCR检测]（?）AI-1 mRNA表达抑制效率可达90%以上,证实病毒构建成功并能在细胞水平高效抑制PAI-1表达。四、AdshPAI对实验性肝纤维化的治疗作用1.AdshPAI对PAI-1表达的抑制作用：BDL和DMN大鼠肝组织real time RT-PCR结果显示,纤维化肝组织中PAI-1表达较正常肝脏分别上调6.69±0.15倍和2.62±0.08倍（P<0.01）, AdshPAI治疗后PAI-1表达较对照组明显下调（P<0.01）；免疫组化结果表明AdshPAI治疗后PAI-1蛋白水平较模型对照组和AdNC组亦明显下调。2.AdshPAI对胶原沉积的影响：AdshPAI导入组肝组织羟脯氨酸含量较AdNC组明显减少（BDL:205.97±4.68μg/g vs.271.33±10.71μg/g; DMN:201.15±1.51μg/g vs. 303.20±15.11μg/g,P<0.05）;胶原染色面积较对照组亦明显减少（P<0.05）。3. AdshPAI对胶原合成的影响：real time RT-PCR结果显示纤维化肝组织中Ⅰ型胶原、α-SMA、TGF-β1和smad3 mRNA水平较正常肝脏均明显上调（P<0.01）, AdshPAI治疗后与病毒对照组相比均显着下调（P<0.05）;α-SMA和TGF-β1免疫组化结果亦表明AdshPAI治疗后较对照组显着下调。4. AdshPAI对纤溶系统的影响：AdshPAI治疗后较AdNC组MMP9和MMP13mRNA水平明显上调,TIMP-1 mRNA水平明显下调（P<0.01）,而对tPA、uPA、uPAR和MMP2 mRNA表达无明显影响；免疫组化结果显示,与AdNC组相比,AdshPAI治疗后MMP9表达明显上调,而TIMP-1表达则明显下调。5. AdshPAI对肝细胞增殖和凋亡的影响：Brdu和PCNA免疫组化结果表明,AdshPAI治疗后肝细胞增殖较AdNC组增加约5倍（P<0.01）; PCNA免疫组化结果显示治疗组肝脏可见大量双核肝细胞和有丝分裂相肝细胞；TUNEL染色结果显示对照组在汇管区和胶原沉积区域周围可见大量肝细胞凋亡,AdshPAI治疗后肝细胞凋亡明显减少（P<0.05）。[结论]1.针对大鼠PAI-1 mRNA的219 siRNA,对靶基因有较好的基因沉默效率,抑制效率可达85%。2. siRNA沉默PAI-1可显着抑制HSC-T6活化、增殖,合成及分泌胶原。3.在肝纤维化发生发展过程中,PAI-1表达明显上调,AdshPAI治疗可下调PAI-1表达。4. AdshPAI治疗可促进胶原降解,减少肝纤维化大鼠肝内胶原沉积,抑制肝纤维化发展。5. AdshPAI治疗后可促进肝细胞增殖,抑制肝细胞凋亡。
周新颖[10]（2010）在《加减三甲散及其虫类药对肝纤维化大鼠TGF-β/Smads信号通路及MMPs/TIMPs体系影响的研究》文中研究指明目的：观察加减三甲散及其虫类药对实验性肝纤维化肝组织TGF-β/Smad转导通路及MMPs/TIMPs的影响,探讨其抗肝纤维化的效果和作用机理。方法：选用SD雄性大鼠,设正常对照组,模型组,阳性组,加减三甲散组,虫药组,去虫药组等共6组。除正常对照组外,其余五组采用40%四氯化碳（CCL4）植物油溶液腹腔注射制备肝纤维化模型,造模的同时予药物灌胃治疗。8周后,处死各组大鼠,腹主动脉取血,放射免疫法检测层粘蛋白（LN）、Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）等肝纤维化血清学指标；光镜和电镜观察肝组织病理变化；免疫组化法检测肝组织TGF-β1、TNF-α、Smad2/3、Smad7,原位杂交法检测肝组织MMP-2、TIMP-2、TIMP-1并作图像分析。结果：1. TGF-β/Smad转导通路：TGF-β1的表达：正常对照组几乎不表达TGF-β1,模型组表达增高（P<0.01）,与模型组相比,加减三甲散组、阳性组、虫药组、去虫药组表达降低（P<0.01）,与阳性组相比,加减三甲散组有差异（P<0.05）,虫药组、去虫药组无差异性。Smad2/3的表达：正常对照组几乎不表达Smad2/3,模型组表达增高（P<0.01）,与模型组比较,加减三甲散组、阳性组、虫药组、去虫药组表达降低（P<0.01）,与阳性组比较,加减三甲散组、虫药组表达降低（P<0.01,P<0.05）。Smad7的表达：与正常对照组比较,模型组明显降低（P<0.01）,与模型组比较,加减三甲散组、虫药组、去虫药组Smad7的表达明显升高（P<0.01）,与阳性组比较,加减三甲散组（P<0.01）、虫药组、去虫药组（P<0.05）均升高。TNF-α的表达：与正常对照组比较,模型组TNF-α的表达明显升高（P<0.01）,与模型组相比,阳性组、加减三甲散组、虫药组、去虫药组表达明显降低（P<0.01）,与阳性组相比,加减三甲散组有差异（P<0.05）。2.MMPs/TIMPs体系：MMP-2mRNA的表达：与正常对照组相比,模型组无差异,虫药组表达升高（P<0.05）,与模型组相比,虫药组表达升高（P<0.05）,加减三甲散、阳性组、去虫药组无差异（P>0.05）。TIMP-2mRNA的表达：与正常对照组相比,模型组表达明显升高（P<0.01）,与模型组相比,各治疗组表达降低（P<0.01）,且与阳性组比较,加减三甲散与虫药组亦有降低且加减三甲散降低明显（P<0.01）,虫药组（P<0.05）,去虫药组无差异（P>0.05）。TIMP-1mRNA的表达：与正常对照组相比,模型组TIMP-1mRNA的表达明显升高P<0.01),与模型组相比,各治疗组的表达均有降低（P<0.01）,且加减三甲散与虫药组低于阳性组（P<0.05）,去虫药组无差异（P>0.05）。结论：1.加减三甲散可显着改善肝纤维化大鼠肝组织肝纤维化程度。2.加减三甲散能降低肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1、Smad2/3的表达,升高Smad7的表达,且效果优于秋水仙碱。通过抑制TGF-β/Smad转导通路,达到抗纤维化的效果。3.在降低TNF-α的表达方面,加减三甲散优于秋水仙碱。4.加减三甲散可降低肝纤维化大鼠肝组织TIMP-1mRNA、TIMP-2mRNA的表达,从而抑制MMP-2降解ECM,达到抗纤维化的效果。5.虫药组在降低纤维化大鼠肝组织TIMP-1mRNA的表达方面效同加减三甲散（均为P<0.05）。在降低纤维化大鼠肝组织TIMP-2mRNA的表达方面,加减三甲散效果明显,优于秋水仙碱组、虫药组、去虫药组。虫药组效果也优于秋水仙碱组。去虫药组效果与秋水仙碱组无差异。
二、实验性肝纤维化基质金属蛋白酶抑制剂-1的动态变化（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、实验性肝纤维化基质金属蛋白酶抑制剂-1的动态变化（论文提纲范文）
（1）柴芪益肝方治疗肝纤维化的临床和实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一章 中西医治疗肝纤维化的研究进展 |
| 第一节 西医诊断和治疗肝纤维化的研究进展 |
| 第二节 中医药治疗肝纤维化的研究进展 |
| 第二章 柴芪益肝方治疗肝郁脾虚型慢性乙型肝炎肝纤维化的临床回顾性研究 |
| 前言 |
| 第一节 临床资料 |
| 第二节 分组与治疗 |
| 第三节 结果分析 |
| 第四节 讨论与小结 |
| 第三章 基于网络药理学探讨柴芪益肝方治疗肝纤维化的作用机制 |
| 前言 |
| 第一节 资料与方法 |
| 第二节 结果 |
| 第三节 讨论与小结 |
| 第四章 柴芪益肝方对四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化的作用及机制研究 |
| 前言 |
| 第一节 材料与研究方法 |
| 第二节 指标检测 |
| 第三节 结果 |
| 第四节 讨论与小结 |
| 结语 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（2）双氢青蒿素抑制TGF-β1诱导的子宫内膜间质细胞的分泌活性（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 分离内膜组织中的间质细胞 |
| 1.2.2 细胞分组 |
| 1.2.3 噻唑蓝法检测间质细胞的增殖实验 |
| 1.2.4 酶联免疫分析评估细胞培养液里纤粘连蛋白与Ⅰ型胶原的水平 |
| 1.2.5 免疫印迹法检测基质金属蛋白酶-9及基质金属蛋白酶抑制剂-1的表达水平 |
| 1.3 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 观察细胞的形态结构并鉴定 |
| 2.2 间质细胞的增殖分析 |
| 2.3 细胞孵育液内纤粘连蛋白与Ⅰ型胶原的水平 |
| 2.4 细胞中的基质金属蛋白酶-9及基质金属蛋白酶抑制剂-1表达水平的检测 |
| 3 讨论 |
（3）七叶皂苷钠通过抑制4EBP1的磷酸化减缓肝纤维化进程的研究（论文提纲范文）
| 缩略词表(Abbreviation) |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1.引言 |
| 2.材料和方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 5.结论 |
| 6.参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 综述 PI3K/Akt/mTOR 信号通路及 mTOR 抑制剂在肝纤维化中的研究进展 |
| 参考文献 |
（4）雄芍汤防治肝纤维化作用与TRAIL-FADD/caspase8细胞凋亡通路的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 确立CCL_4综合因素诱导大鼠肝纤维化模型进展期与恢复期 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要试剂及仪器 |
| 1.2.1 大鼠造模试剂及仪器 |
| 1.2.2 ALT、AST检测试剂及仪器 |
| 1.2.3 肝纤维化标志物检测试剂及仪器 |
| 1.2.4 HE及Masson染色试剂及仪器 |
| 1.2.5 其他 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验方案 |
| 2.2 标本采集 |
| 2.2.1 大鼠周围血清标本收集 |
| 2.2.2 大鼠肝脏组织标本收集 |
| 2.3 指标检测 |
| 2.3.1 肝重指数计算 |
| 2.3.2 血清ALT、AST检测及方法 |
| 2.3.3 血清HA、LN、PCⅢ,CIV检测及方法 |
| 2.3.4 肝组织羟脯氨酸(HyP)含量检测及方法 |
| 2.3.5 肝组织病理检测及方法 |
| 2.4 统计学处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 肝纤维化大鼠肝重指数的动态变化 |
| 3.2 血清ALT、AST的动态变化 |
| 3.3 血清HA、LN、PCⅢ及CIV的动态变化 |
| 3.4 肝组织Hyp的动态变化 |
| 3.5 肝组织病理学的动态变化 |
| 3.5.1 肝组织HE染色动态变化 |
| 3.5.2 肝组织Masson染色动态改变 |
| 4 实验讨论 |
| 4.1 四氯化碳综合因素造模的探讨 |
| 4.2 肝重指数动态变化的探讨 |
| 4.3 血清ALT、AST变化的探讨 |
| 4.4 血清HA、LN、PCⅢ及CIV变化的探讨 |
| 4.5 肝组织Hyp动态变化的探讨 |
| 4.6 肝组织病理学检测的动态变化的探讨 |
| 4.7 大鼠肝纤维化模型进展期和恢复期的确立 |
| 参考文献 |
| 第二部分 雄芍汤防治肝纤维化的作用与TRAIL-FADD/caspase8凋亡通路 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 动物 |
| 1.2 雄芍汤 |
| 1.3 主要试剂及仪器 |
| 1.3.1 大鼠造模；ALT、AST检测；HA、LN、PCⅢ,CIV检测；Hyp检测；HE染色；Masson染色检测等所用主要试剂及仪器 |
| 1.3.2 免疫组织化学染色试剂及仪器 |
| 1.3.3 PCR检测试剂及仪器 |
| 1.3.4 Westernblot检测试剂及仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 大鼠分组与喂养 |
| 2.2 标本收集与处理 |
| 2.3 检测内容与方法 |
| 2.3.1 各组大鼠肝重指数 |
| 2.3.2 各组大鼠血清ALT、AST检测 |
| 2.3.3 各组大鼠血清HA、LN、PCⅢ、CⅣ检测 |
| 2.3.4 各组大鼠肝组织中HyP含量测定 |
| 2.3.5 各组大鼠肝组织病理形态学检查 |
| 2.3.6 免疫组织化学染色检测各组肝组织a-SMA及5-LO的表达 |
| 2.3.7 PCR检测各组大鼠肝组织5-LO、α-SMA、TIMP-1、TRAIL、FADD、Caspase-8、BCL-2的mRNA表达 |
| 2.3.8 蛋白质印迹(WesternBlot)检测各组α-SMA,5-LO,TIMP1、TRAIL、FADD、Caspase-8、Cyt-c的蛋白质表达 |
| 2.4 统计学处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 各组大鼠肝重指数的结果比较 |
| 3.2 各组大鼠血清ALT、AST的结果比较 |
| 3.3 各组大鼠血清HA、LN、PCⅢ及CIV结果比较 |
| 3.4 各组大鼠肝组织Hyp结果比较 |
| 3.5 各组大鼠肝组织病理学结果比较 |
| 3.5.1 各组大鼠肝组织HE染色结果比较 |
| 3.5.2 各组大鼠肝组织Masson染色结果比较 |
| 3.6 各组大鼠肝组织免疫组织化学染色结果比较 |
| 3.6.1 各组大鼠肝组织α-SMA免疫组织化学染色结果比较 |
| 3.6.2 各组大鼠肝组织5-LO免疫组织化学染色结果比较 |
| 3.6.3 各组大鼠肝组织α-SMA、5-LO免疫组织化学染色结果定量比较 |
| 3.7 各组大鼠肝组织5-LO、α-SMA、TIMP-1、TRAIL、、FADD、Caspase-8、BCL-2的mRNA表达PCR检测结果比较 |
| 3.7.1 各组大鼠肝组织5-LO、α-SMA、TIMP-1、TRAIL、FADD、Caspase-8、BCL-2mRNA表达PCR检测的熔解、扩增曲线 |
| 3.7.2 各组大鼠肝组织5-LO、α-SMA、TIMP-1、TRAIL、FADD、Caspase-8、BCL-2mRNA表达PCR检测结果比较 |
| 3.8 各组大鼠肝组织5-LO、α-SMA、TIMP-1、MMP13、TRAIL、FADD、Caspase-8、Cyt-c蛋白表达WesternBlot检测的结果比较 |
| 3.8.1 各组大鼠肝组织5-LO、α-SMA蛋白表达WesternBlot检测结果比较 |
| 3.8.2 各组大鼠肝组织TIMP-1、MMP13蛋白表达WesternBlot检测结果比较 |
| 3.8.3 各组大鼠肝组织TRAIL、FADD、Caspase-8、Cyt-c蛋白表达WesternBlot检测结果比较 |
| 4 实验讨论 |
| 4.1 肝纤维化从脾肾论治的探讨 |
| 4.1.1 病机 |
| 4.1.2 治法 |
| 4.1.3 方药 |
| 4.2 雄芍汤防治肝纤维化的作用的探讨 |
| 4.2.1 雄芍汤抗肝纤维化作用的前期研究 |
| 4.2.2 本实验雄芍汤防治肝纤维化的作用的研究 |
| 4.3 雄芍汤防治肝纤维化的作用机制 |
| 4.3.1 雄芍汤防治肝纤维化与肝细胞 |
| 4.3.2 雄芍汤防治肝纤维化与肝星状细胞 |
| 4.3.3 雄芍汤防治肝纤维化与5-脂氧合酶 |
| 4.3.4 雄芍汤防治肝纤维化作用与TRAIL-FADD/caspase8凋亡通路 |
| 4.4 结论与启示 |
| 参考文献 |
| 第三部分 雄芍汤对大鼠肝细胞凋亡的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 含药血清 |
| 1.2 细胞株 |
| 1.3 主要试剂及仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 调整各组含药血清的浓度 |
| 2.2 大鼠肝细胞培养与传代 |
| 2.3 流式细胞术检测雄芍汤含药血清对大鼠肝细胞凋亡的影响 |
| 2.3.1 实验方案 |
| 2.3.2 流式细胞术检测 |
| 2.4 统计学分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 各组大鼠肝细胞凋亡情况 |
| 3.2 各组大鼠肝细胞凋亡统计学比较 |
| 4 实验讨论 |
| 参考文献 |
| 创新点与局限性 |
| 结语 |
| 附录 |
| 1 文献综述 |
| 参考文献 |
| 2 在读博士期间发表论文、科研情况 |
| 致谢 |
（5）大鼠肝纤维化基质金属蛋白酶抑制剂-1 mRNA表达与弥散加权成像表观扩散系数的相关性（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 肝纤维化动物模型 |
| 1.2 MRI检查 |
| 1.2.1 MRI扫描技术 |
| 1.2.2 MRI图像后处理 |
| 1.3 肝病理组织学检查 |
| 1.4 TIMP-1 m RNA检测 |
| 1.5 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 大鼠肝纤维化模型的建立 |
| 2.2 病理检查结果 |
| 2.3 对照组、肝纤维化各期大鼠肝ADC值及TIMP-1m RNA相对表达量及其相关性 |
| 3 讨论 |
（6）细胞因子对肝纤维化影响的中医药研究进展（论文提纲范文）
| 1 下调促进因子 |
| 1.1 对TGF-β的调控 |
| 1.1.1 单味药或单体有效成分 |
| 1.1.2 复方的研究 |
| 1.2 对PDGF的调控 |
| 1.2.1 单味药及单体有效组分 |
| 1.2.2 复方的研究 |
| 1.3 肿瘤坏死因子α (TNF-α) |
| 1.4 结缔组织生长因子 (CTGF) |
| 2 上调抑制因子 |
| 3 对基质金属蛋白酶家族 (MMPS) 和基质金属蛋白酶抑制剂 (TIMPs) 的调节 |
| 3.1 单味药及单体有效组分 |
| 3.2 复方的研究 |
（7）DQ12对THP-1细胞基质金属蛋白酶-9的影响及松弛素干预作用（论文提纲范文）
| 全文缩写词 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 一、材料和方法 |
| 1 主要试剂和仪器 |
| 2 细胞培养、染毒及主要指标测定 |
| 3 统计分析 |
| 二、结果 |
| 1 DQ12 作用于 PMA 刺激的 THP-1 细胞 |
| 2 DQ12 对 PMA 刺激分化的 THP-1 细胞基质金属蛋白酶-9 mRNA 的表达、基质金属蛋白酶-9 酶活性的影响 |
| 3 Relaxin 对 DQ12 作用的 PMA 刺激分化的 THP-1 细胞基质金属蛋白酶-9 mRNA 的表达、基质金属蛋白酶-9 活性的影响 |
| 三、讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
（8）纤溶酶原激活物抑制因子-1对肝星状细胞活化及其细胞外基质的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 主要缩略词表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 致谢 |
（9）纤溶酶原激活物抑制剂-1 siRNA治疗实验性肝纤维化（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 中英文缩略词对照表 |
| 前言 |
| 第一部分 纤溶酶原激活物抑制剂-1基因沉默对肝星状细胞生物学特性的影响 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 PAI-1 siRNA腺病毒表达载体的构建 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第三部分 AdshPAI体内导入对实验性大鼠肝纤维化的治疗作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 研究生在读期间发表论文 |
| 致谢 |
（10）加减三甲散及其虫类药对肝纤维化大鼠TGF-β/Smads信号通路及MMPs/TIMPs体系影响的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词对照表 |
| 引言 |
| 第一部分 文献研究 |
| 1 现代医学对肝纤维化的认识 |
| 1.1 肝纤维化的流行病学研究 |
| 1.2 肝纤维化发生的病因 |
| 1.2.1 病毒 |
| 1.2.2 酒精 |
| 1.2.3 血吸虫 |
| 1.2.4 药物 |
| 1.2.5 胆汁淤积 |
| 1.2.6 肝脏瘀血 |
| 1.2.7 其他 |
| 1.3 肝纤维化的发生机制 |
| 1.3.1 参与肝纤维化的细胞机制研究 |
| 1.3.2 细胞外基质的研究 |
| 1.3.3 细胞因子在肝纤维化中的作用 |
| 1.3.4 细胞凋亡 |
| 1.4 肝纤维化的诊断 |
| 1.4.1 临床表现 |
| 1.4.2 组织病理学检查 |
| 1.4.3 影像学检查 |
| 1.4.4 血清纤维化标志物检查 |
| 1.4.5 其他预测指标与相关危险因素 |
| 1.5 肝纤维化的治疗 |
| 1.5.1 抗病毒治疗,去除肝纤维化病因 |
| 1.5.2 抑制炎症和免疫反应 |
| 1.5.3 保护肝细胞 |
| 1.5.4 抑制HSC活化,促进其凋亡 |
| 1.5.5 抑制ECM合成及分泌,促进其降解 |
| 1.5.6 药物靶向和基因治疗 |
| 2 祖国医学对肝纤维化的认识 |
| 2.1 病名探讨 |
| 2.2 病因病机探讨 |
| 2.2.1 病因 |
| 2.2.2 病机 |
| 2.3 辨证施治 |
| 2.3.1 扶正化瘀法 |
| 2.3.2 软坚散结法 |
| 2.3.3 清热利湿法 |
| 2.3.4 疏肝健脾法 |
| 2.3.5 滋肾柔肝法 |
| 2.3.6 温补脾肾法 |
| 2.3.7 几种治法联合应用 |
| 3 中医理论依据 |
| 3.1 主客交 |
| 3.2 主客交与肝纤维化 |
| 3.3 络病理论 |
| 3.3.1 久病入络 |
| 3.3.2 奇经八脉 |
| 3.4 络病理论与肝纤维化 |
| 3.5 主客交与络病理论 |
| 4. 加减三甲散方 |
| 4.1 加减三甲散方组成 |
| 4.2 加减三甲散方方解 |
| 5 关于拆方的理论研究 |
| 5.1 中药复方拆方的现状分析 |
| 5.2 拆方研究的主要目的 |
| 5.3 中药复方拆方研究的主要方法和思路 |
| 5.4 中药复方拆方研究最新方向 |
| 5.5 中药复方拆方研究的不足 |
| 5.6 本课题三甲散拆方原则 |
| 6 虫药通络 |
| 6.1 虫类药历史回顾 |
| 6.2 虫类药功效 |
| 6.2.1 攻坚破积散结 |
| 6.2.2 活血祛瘀利水 |
| 6.2.3 搜风止痉通络 |
| 6.2.4 补益培本 |
| 6.3 药理研究 |
| 6.4 虫类药在肝病中的作用 |
| 第二部分 加减三甲散方及其拆方组对肝纤维化大鼠肝脏TGF-B1、SMAD2/3、SMAD7及TNF-A含量的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 药物组成与制备 |
| 1.3 实验试剂 |
| 1.4 主要实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 动物模型建立 |
| 2.2 实验动物分组 |
| 2.3 动物给药 |
| 2.4 标本采集及制作 |
| 2.5 检测指标及方法 |
| 2.5.1 实验动物的一般情况观察 |
| 2.5.2 肝组织病理形态观察 |
| 2.5.3 放射免疫法检测肝纤维化大鼠层粘蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C) |
| 2.5.4 免疫组化法观察TGF-β1、TNF-α、Smad2/3、Smad7在肝组织中的表达和分布 |
| 2.6 图象分析 |
| 2.7 统计学处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 一般情况 |
| 3.1.1 实验动物死亡说明 |
| 3.1.2 大鼠一般情况 |
| 3.2 肝脏组织病理形态观察结果 |
| 3.4 肝组织TGF-β1检测结果 |
| 3.5 肝组织Smad2/3检测结果 |
| 3.6 肝组织Smad7检测结果 |
| 3.7 肝组织TNF-α检测结果 |
| 4 分析与讨论 |
| 4.1 对层粘蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)含量的影响 |
| 4.2 对TGF-β1、TGF-β/Smad转导通路的影响 |
| 4.3 对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响 |
| 5 结论 |
| 第三部分 加减三甲散方及其拆方组对肝纤维化大鼠肝组织MMP-2MRNA及TIMP-1MRNA、TIMP-2MRNA表达的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验试剂 |
| 1.3 主要实验仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 造模、分组 |
| 2.2 检测指标与方法 |
| 2.2.1 原位杂交POD法观察MMP-2、TIMP-1、TIMP-2在肝组织中的表达和分布 |
| 2.2.2 结果判定 |
| 2.2.3 图像分析、统计处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 MMP-2mRNA检测结果 |
| 3.2 TIMP-2mRNA |
| 3.3 TIMP-1mRNA |
| 4 分析与讨论 |
| 4.1 对基质金属蛋白酶及其抑制剂(MMPs/TIMPs)体系的影响 |
| 4.2 对TIMP-1mRNA的影响 |
| 5 结论 |
| 问题与展望 |
| 1 电镜标本数量不足 |
| 2 关于拆方研究 |
| 3 肝纤维化动物模型 |
| 4 给药方式 |
| 5 分期治疗 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 综述:基质金属蛋白酶及其抑制因子与肝纤维化 |
| 1 MMPs生化性质与肝纤维化 |
| 1.1 MMPs的特征、分类 |
| 1.2 MMPs的活性调节 |
| 2 TIMPS功能及其活性调节 |
| 2.1 TIMPs的特征及分类 |
| 2.2 TIMPs的活性调节 |
| 3 MMPs和TIMPS与肝纤维化 |
| 3.1 MMPs与肝纤维化 |
| 3.2 TIMPs与肝纤维化 |
| 4 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
四、实验性肝纤维化基质金属蛋白酶抑制剂-1的动态变化（论文参考文献）
- [1]柴芪益肝方治疗肝纤维化的临床和实验研究[D]. 周怡驰. 北京中医药大学, 2021(01)
- [2]双氢青蒿素抑制TGF-β1诱导的子宫内膜间质细胞的分泌活性[J]. 宋玉杰,单铁英,马景红,栗志英,张文博,张巍,李玲,任海霞. 职业与健康, 2020(18)
- [3]七叶皂苷钠通过抑制4EBP1的磷酸化减缓肝纤维化进程的研究[D]. 李扬. 安徽医科大学, 2020(02)
- [4]雄芍汤防治肝纤维化作用与TRAIL-FADD/caspase8细胞凋亡通路的实验研究[D]. 贺文广. 湖北中医药大学, 2018(12)
- [5]大鼠肝纤维化基质金属蛋白酶抑制剂-1 mRNA表达与弥散加权成像表观扩散系数的相关性[J]. 战跃福,梁贤文,韩向君,陈建强,张淑芳,谈顺,李群,王雄,刘凡. 中南大学学报(医学版), 2017(02)
- [6]细胞因子对肝纤维化影响的中医药研究进展[J]. 高湲,陈桂敏,梁振钰,谢毅强. 海南医学, 2013(01)
- [7]DQ12对THP-1细胞基质金属蛋白酶-9的影响及松弛素干预作用[D]. 辛志强. 华中科技大学, 2012(08)
- [8]纤溶酶原激活物抑制因子-1对肝星状细胞活化及其细胞外基质的影响[D]. 焦黎. 山西医科大学, 2011(08)
- [9]纤溶酶原激活物抑制剂-1 siRNA治疗实验性肝纤维化[D]. 胡平方. 第二军医大学, 2010(10)
- [10]加减三甲散及其虫类药对肝纤维化大鼠TGF-β/Smads信号通路及MMPs/TIMPs体系影响的研究[D]. 周新颖. 成都中医药大学, 2010(08)
标签：对照组论文; 基质金属蛋白酶论文; 肝纤维化指标检查论文; 血清蛋白论文; 肝细胞论文;